芪夏消癭合劑對SD大鼠實驗性自身免疫性甲狀腺炎的影響*

李 玲 陳曉雯

（安徽中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，安徽 合肥 230031）

芪夏消癭合劑對SD大鼠實驗性自身免疫性甲狀腺炎的影響*

李 玲 陳曉雯△

（安徽中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，安徽 合肥 230031）

目的 觀察芪夏消癭合劑對SD大鼠實驗性自身免疫性甲狀腺炎（EAT）的影響。方法 將30只SD大鼠隨機分為3組：正常對照組、EAT組、中藥治療組。對照組飲用自來水，其他各組實驗SD大鼠飲用配制的0.05%碘化鈉水溶液，并且在高碘的基礎(chǔ)上皮下注射完全弗氏佐劑、甲狀腺球蛋白和不完全弗氏佐劑，建立EAT動物模型。中藥治療組在不同的時間灌胃給予芪夏消癭合劑治療，觀察大鼠甲狀腺自身抗體水平的變化，并取完整甲狀腺組織進行HE染色，觀察其形態(tài)變化。結(jié)果 （1）造模第8周末，檢測SD大鼠甲狀腺球蛋白（TgAb）和甲狀腺過氧化物酶抗體（TPOAb）。EAT組和治療組的TGAb和TPOAb水平與對照組相比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；EAT組和治療組之間 TGAb和 TPOAb水平相當（P＞0.05，檢驗效能＞0.999）；（2）實驗第12周末，EAT模型組SD大鼠TGAb和TPOAb水平明顯高于正常對照組（P＜0.01）；中藥治療組雖未能使TGAb和TPOAb水平恢復正常，其值明顯低于EAT組 （P＜0.01）。結(jié)論 芪夏消癭合劑能夠改善EAT大鼠的免疫功能紊亂狀況。

芪夏消癭合劑 自身免疫性甲狀腺炎 甲狀腺自身抗體 實驗研究

橋本甲狀腺炎（HT）目前是公認的一種器官特異性的自身免疫性甲狀腺疾?。ˋIT），為甲狀腺炎中常見的一種類型。其發(fā)病機制復雜，主要為自身免疫功能異常，使機體細胞免疫反應和體液免疫反應發(fā)生紊亂，從而產(chǎn)生大量的針對甲狀腺組織的自身抗體，造成甲狀腺在組織形態(tài)學上的改變以及功能上的改變。本實驗觀察芪夏消癭合劑對大鼠模型的影響?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選用SPF級雌性SD大鼠30只，體質(zhì)量 100～120 g，動物合格證號：SCXK（皖）2011-002。 8～10周齡。標準飼料（碳水化合物60%、脂肪11%、蛋白質(zhì)29%）喂養(yǎng)，材料均購自安徽醫(yī)科大學動物實驗中心。

1.2 試劑及藥物 （1）完全弗氏佐劑（CFA）、不完全弗氏佐劑 （IFA）（美國Sigma公司）、豬甲狀腺球蛋白（PTg），碘化鈉（上海寶新化工科技有限公司），芪夏消癭合劑（購自安徽中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院），甲狀腺球蛋白（TgAb）和甲狀腺過氧化物酶抗體（TPOAb）放射免疫檢測試劑盒（北京北方生物技術(shù)研究所）。（2）芪夏消癭合劑：黃芪10 g，炒白芍 10 g，夏枯草 10 g，玄參10 g，桔梗10 g，生甘草10 g。由安徽中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院制劑中心生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：20090520，規(guī)格：每袋10 g。

1.3 分組與造模 將30只SD大鼠隨機分成3組：正常對照組、自身免疫性甲狀腺炎（EAT）組、中藥治療組，每組10只。大鼠置于SPF級環(huán)境下，飼喂標準基礎(chǔ)飼料，自由進食和飲水。除對照組飲用自來水，其余各組大鼠飲用0.05%的碘化鈉水溶液 （1L水中加入0.64 g碘化鈉配制而成），現(xiàn)配現(xiàn)用，避光放置。SD大鼠均參照文獻［1-2］建立EAT動物模型：將經(jīng)磷酸鹽緩沖液（PBS）溶解的PTg與CFA按1∶1比例混合，充分乳化制成油包水乳劑，SD大鼠適應性飼養(yǎng)1周后，于實驗第2周對大鼠進行皮下多點免疫注射（100 μg/只，即0.4 mL/只）為初次免疫，連續(xù)3周，注射部位分別為足跖、背部皮下、腹腔皮下處。實驗第5周開始取PTg與IFA充分混合后作加強免疫，以后每周加強免疫1次，至第8周末結(jié)束。

1.4 給藥方法 造模成功后，治療組于第9周開始給予中藥灌胃。對照組僅予自來水，EAT組給予配制的0.05%碘化鈉水溶液，并且在高碘的基礎(chǔ)上皮下注射完全弗氏佐劑、甲狀腺球蛋白和不完全弗氏佐劑。每組大鼠以成人9倍的劑量每日灌胃1次，連續(xù)灌胃4周，每日灌胃劑量為 0.2 mg/（kg·d），直到實驗結(jié)束，每周稱取體質(zhì)量1次，并調(diào)整灌胃液的劑量。

1.5 標本采集與檢測 第12周末處死所有動物，留取相關(guān)標本進行實驗研究。（1）TgAb和TPOAb水平的檢測。造模第8周后，以毛細玻璃管取眶靜脈血置于試管中，離心分離獲得血清，用放射免疫分析法（RIA）檢測血清中的TgAb和TPOAb水平。灌胃至第12周，處死所有實驗動物，腹主動脈取血，立即分離血清，保存于-70℃冰箱。（2）甲狀腺組織形態(tài)的變化。實驗結(jié)束后，取SD大鼠完整甲狀腺組織，固定于10%中性甲醛中，常規(guī)石蠟脫水包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察甲狀腺組織病理形態(tài)改變，包括濾泡大小、上皮形態(tài)、上皮及濾泡間的淋巴細胞浸潤。

1.6 統(tǒng)計學處理 應用SAS9.2統(tǒng)計軟件分析。計量資料以（±s）表示，兩組計量資料之間比較采用 t檢驗，3組及以上計量資料之間比較采用方差分析，計數(shù)資料之間比較采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 實驗第8周后3組SD大鼠血清TgAb和TPOAb水平比較 見表1。結(jié)果示實驗造模成功。與對照組比較，EAT組及中藥治療組SD大鼠TgAb和TPOAb水平明顯高于對照組（P＜ 0.01）；（2）與 EAT 組比較，中藥治療組的SD大鼠TgAb和TPOAb水平之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞ 0.05）。

表1 實驗第8周大鼠血清TgAb和TPOAb水平（IU/mL，±s）

表1 實驗第8周大鼠血清TgAb和TPOAb水平（IU/mL，±s）

與對照組比較，*P＜0.05。

組別 n TGAb TPOAb對照組 10 0.22±0.08 0.56±0.03 EAT 組 10 41.13±7.41* 40.19±3.61*中藥治療組 10 39.88±6.50* 39.96±4.24*

2.2 實驗第12周芪夏消癭合劑對自身免疫性甲狀腺炎大鼠血清TgAb和TPOAb水平的影響 見表2。EAT模型組大鼠TgAb和TPOAb水平明顯高于對照組（P＜0.01）；中藥治療組雖未能使TgAb和TPOAb水平恢復正常，但與EAT組比較，其水平明顯低于EAT組（P＜0.01）。

表2 實驗第12周末各組血清TgAb和TPOAb水平（IU/mL，±s）

表2 實驗第12周末各組血清TgAb和TPOAb水平（IU/mL，±s）

與對照組比較，**P＜0.01；與 EAT 組比較，△P＜0.01。

組別 n TgAb TPOAb對照組 10 0.22±0.08 0.56±0.03 EAT 組 10 61.65±4.95** 49.39±7.00**中藥治療組 10 31.19±3.66**△ 30.26±2.84**△

2.3 光鏡下觀察大鼠甲狀腺病理組織形態(tài)變化 對照組：甲狀腺組織濾泡呈圓形或橢圓形，大小適中，濾泡腔內(nèi)可以觀察到豐富的膠質(zhì)，未見炎細胞浸潤。EAT組：甲狀腺組織濾泡大小不等，濾泡壁較薄，上皮細胞數(shù)量少，可見廣范的炎性細胞浸潤。中藥治療組：炎性細胞較EAT組明顯減少，濾泡數(shù)量明顯增多，濾泡腔內(nèi)膠質(zhì)染色深。見圖1。

3 討 論

目前本病的治療上，西醫(yī)僅予以對癥治療，主要包括抗甲狀腺藥物治療、甲狀腺激素替代治療、免疫治療以及手術(shù)治療等。西醫(yī)治療存在副作用大，且容易復發(fā)的缺點。中醫(yī)治療可以從整體上，調(diào)整人體的臟腑功能，提高機體的免疫，使本病的治療在安全性和療效穩(wěn)定性方面均具有獨特的優(yōu)勢。

HT根據(jù)其癥狀表現(xiàn)可將其歸屬于中醫(yī)學 “癭病”中的“肉癭”、“氣癭”或“石癭”范疇。本病的病因主要與情志、飲食、水土及體質(zhì)等因素有密切關(guān)系。病理因素致氣滯痰凝壅結(jié)于頸前，日久則血脈瘀阻，終致氣血痰瘀四者合而為患。故本病屬本虛標實之證，長期情志不調(diào)為其主要病因，氣滯痰凝血瘀為其基本病機。病變可以涉及肝脾等多個臟腑，治療的關(guān)鍵是疏肝健脾、活血化瘀、軟堅散結(jié)。

圖1 各組甲狀腺病理切片（HE，400倍）

本實驗所用藥物芪夏消癭合劑方是由本文通信作者陳曉雯教授根據(jù)HT的發(fā)病機制，以中醫(yī)辨病、辨證理論為指導，同時結(jié)合大量的文獻報道，經(jīng)過長期的臨床實踐，總結(jié)得出。在長期的臨床實踐中，收到了良好的療效。方中黃芪為君藥，生用具有健脾補中、升陽舉陷、益胃固表、利尿、托毒生肌之功效。白芍苦、酸，性微寒，歸肝、脾經(jīng)，具養(yǎng)血和營、緩急止痛、斂陰柔肝之功效，與黃芪以益氣健脾、養(yǎng)陰柔肝，共為為方中之君藥。夏枯草、桔梗具有化痰散結(jié)之效，玄參味甘、苦、咸，性微寒，入肺、腎經(jīng)，有涼血滋陰，瀉火解毒功效，與夏枯草共清肝火，散郁結(jié)相須為用，共為為方中之臣藥。生甘草取其補中健脾，又能調(diào)和藥性，兼使藥之用，白芍與甘草配伍，白芍主入肝經(jīng)，酸斂苦泄，性寒陰柔，能養(yǎng)斂陰，瀉肝柔肝，甘草主入脾經(jīng)，為甘性緩，能和逆氣而補脾胃，兩藥合用，酸甘化陰，肝脾同治，共湊緩肝和脾，益血養(yǎng)陰之功。全方共奏益氣健脾、養(yǎng)陰柔肝、化痰消癭之效。

藥理學研究表明，夏枯草、桔梗等能夠調(diào)節(jié)機體的免疫功能［1-2］。夏枯草能夠增強腎上腺皮質(zhì)功能，抑制機體的細胞和體液免疫反應；桔梗對細胞免疫反應有抑制作用，并且能夠促進腎上腺糖皮質(zhì)激素的分泌，有激素樣作用。黃芪對機體特異性細胞及體液免疫功能有增強作用，可提高機體的免疫功能、防御能力以及抗瘤能力［3］。白芍主要化學成分為白芍總苷［4］，能降低或升高環(huán)磷酰胺誘導免疫功能增強或降低小鼠的免疫功能，有功能依賴性的雙向免疫調(diào)節(jié)作用。這些藥物的免疫抑制作用和激素樣作用可能就是芪夏消癭合劑降低AIT模型甲狀腺自身抗體的主要原因。

本研究應用SD大鼠的AIT實驗模型進行研究，結(jié)果表明芪夏消癭合劑不僅可以改善HT甲狀腺自身抗體水平，還可以預防自身免疫性甲狀腺疾病的發(fā)生和發(fā)展，為臨床上預防和治療自身免疫性甲狀腺疾病提供了一定的思路，但對其確切的機制仍有待于進一步研究。

［1］侯家玉.中藥藥理學［M］.北京.中國中醫(yī)藥出版社，2002.

［2］駱和生.中藥與免疫（祛痰平喘類藥）［M］.廣州：廣東科技出版社，1990：8.

［3］焦艷，聞杰，于曉紅，等.膜莢黃芪莖葉總黃酮對小鼠細胞免疫功能的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1999，19（6）：356.

［4］張泓.白芍總苷的免疫調(diào)節(jié)作用計機制［J］.中國藥理學與毒理學雜志，1990，4（3）：190.

Influence of Qixiaxiaoying Mixture on the Experimental Autoimmune Thyroiditis

LI Ling，CHEN Xiaowen.The first Affiliated Hospital of Anhui College of Traditional Chinese Medicine，Anhui，Hefei230031，China

Objective:To investigate the influence ofQixiaxiaoying Mixtureon the experimental autoimmune thyroiditis in SD rats.Methods:30 SD rats were randomly divided into three groups including the normal control，theexperimental autoimmune thyroiditis （EAT） group，and the Chinese medicine treatment group.Except the normal controls，two other groups of rats were raised with water containing 0.05%NaI.EAT models were set up by some drugs such as the complete Freund′s adjuvant，the thyroglobulin and the incomplete Freund's adjuvant.Qixiaxiaoying Mixturewere given at different time in order to observe the change of the level about thyroid autoantibodies in the period of experiment.Results:（1）After eight weeks of molding，in EAT group and Chinese medicine treatment group.The differences of the levels of TGAb and TPOAb were not significance between above groups（P＞0.05）.But comparing with normal group，these differences were obviouse（P＜0.01）.（2）In the end of twelfth week，the levels of TGAb and TPOAb in EAT group were higher than those in normal group（P＜0.01）.Although，the Chinese medicine treatment group were failed to make TGAb and TPOAb level to return to normal，the levels of TGAb and TPOAb in Chinese medicine treatment group were lower than those in EAT group （P＜0.01）.Conclusion:Qixiaxiaoying Mixturecan prevent and improve immune function disorder status in SD rats with autoimmune thyroiditis.

Qixiaxiaoying Mixture；Autoimmune thyroiditis；Autoantibodies；Experimental research

R285.5

A

1004-745X（2014）07-1233-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.07.010

安徽省年度科研項目（12070403074）

△通信作者

2013-12-31）