山莨菪堿和芬太尼后處理聯(lián)合缺血后適應(yīng)對兔心肌缺血再灌注損傷SOD、MDA 的影響

李方江，張文婷，杜美玲，王曉元，李寶亮，李 清，李慧敏，陳莉峰，要 彤

（1.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院心血管內(nèi)科，河北 張家口075000；2.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院心電圖室，河北 張家口075000；3.河北北方學(xué)院研究生部，河北 張家口075000；4.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 張家口075000；5.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院導(dǎo)管手術(shù)室，河北 張家口075000；6.河北省張家口市宣化區(qū)醫(yī)院眼科，河北 張家口075000）

隨著介入治療的開展，心肌缺血再灌注損傷 （myocardial ischemia and reperfusion injury，MIRI）成為心血管領(lǐng)域的重要問題。缺血后適應(yīng) （ischemic post－conditioning，IPOC）能提高心肌對之前較長時(shí)間I／R 的耐受性，從而減輕MIRI［1］。藥物后處理 （pharmacologic post－conditioning，PPOC）是在不同的干預(yù)時(shí)間 （再灌注期間或再灌注后）給予藥物可對MIRI起到保護(hù)作用［2］。本研究擬觀察山莨菪堿和芬太尼PPOC與IPOC聯(lián)合對兔心肌缺血再灌注心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase，SOD）酶蛋白活力濃度、丙二醛 （manlondialdehyde，MDA）濃度的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與試劑

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康日本大耳白兔32只，體質(zhì)量2.5～3.5kg。雌雄各半，河北北方學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.1.2 主要藥品及試劑 鹽酸消旋山莨菪堿 （規(guī)格：10mg·mL－1，生產(chǎn)批號6923671403472山西晉新雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司）；芬太尼 （規(guī)格：0.1mg·2mL－1，生產(chǎn)批號1130705A1宜昌人福藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）；烏拉坦 （北京篤信精細(xì)制劑廠）；96孔板超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase，SOD）測定試劑盒、96孔板丙二醛 （manlondialdehyde，MDA）測定試劑盒 （武漢博士德生物科技有限公司）。

1.1.3 儀器 LEAD－2000多道電生理記錄儀 （四川錦江電子科技有限公司）；動(dòng)物呼吸機(jī) （TOPO，美國Kent公司）；Rayto酶標(biāo)儀 （RT－2100C，美國Rayto公司）；中佳中低速臺式離心機(jī) （KDC－40，浙江科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）；恒溫水浴箱 （美國Thermo公司）；醫(yī)用DW－86W420低溫冷凍冰箱（－86 ℃，山東海爾）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物模型的制備 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)用20%烏拉坦5mL·kg－1麻醉并固定。四肢及胸前皮下置入電極，連接LEAD－2000多道電生理記錄儀。氣管插管接動(dòng)物呼吸機(jī)，頻率45次·min－1，氧流量0.8L·min－1。沿胸骨左緣3～4肋間隙作切口，逐層分離，切開心包。撥開左心耳可見左冠狀動(dòng)脈自主動(dòng)脈根部發(fā)出，確認(rèn)左冠狀動(dòng)脈前降支 （left anterior descending coronary artery，LAD）即沿左室間溝下行的動(dòng)脈分支，在LAD 根部穿雙股2－0號絲線，結(jié)扎其中一股造成心肌梗死，采用缺血30min，復(fù)灌120min建立心肌I／R 模型。缺血后處理采用推管法，復(fù)灌30s／缺血30s，重復(fù)3次。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 32只健康日本大耳白兔按隨機(jī)區(qū)組法隨機(jī)分為4組 （每組8只），分別為： （1）假手術(shù)組 （sham－operated group，S組）：僅開胸并分離LAD，但不阻斷血流； （2）缺血再灌注組 （ischemia－reperfusion，I／R 組）：結(jié)扎LAD30min后，復(fù)灌120 min； （3）缺血后適應(yīng)組 （ischemic postconditioning，IPOC組）：結(jié)扎LAD 30min后，于復(fù)灌即刻，給予3輪復(fù)灌30s／缺血30s作為后處理，復(fù)灌120min； （4）聯(lián)合用藥后處理＋缺血后適應(yīng)組 （anisodamine and fentanyl post－conditioning combined with ischemic post－conditioning group，A＋F＋I(xiàn)POC組）：結(jié)扎LAD 28min時(shí)，沿兔耳緣靜脈注射山莨菪堿5mg·kg－1、芬太尼5μg·kg－1，30min時(shí)給予3輪復(fù)灌30s／缺血30s作為后處理。

1.3 監(jiān)測指標(biāo)

SOD 酶蛋白活力濃度及MDA 濃度：各組于再灌注結(jié)束即刻頸動(dòng)脈抽取動(dòng)脈血1 mL，以4500r·min－1分離血清，－80 ℃冰箱保存，解凍后以黃嘌呤氧化酶法用SOD 測定試劑盒測定SOD 酶蛋白活力，MDA 濃度以硫代巴比妥酸鹽 （thiobarbituricacid，TBA）法用MDA 測定試劑盒測定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （±s）表示。心肌細(xì)胞氧化損傷指標(biāo)行單因素方差分析，組間比較采用SNK－q檢驗(yàn)。P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

與S組比較，I／R 組、IPOC組的SOD 酶蛋白活力濃度顯著降低 （P＜0.01）；與I／R 組比較，IPOC組、A＋F＋I(xiàn)POC組SOD 酶蛋白活力濃度明顯升高 （P＜0.01）；與IPOC組比較，A＋F＋I(xiàn)POC組SOD酶蛋白活力濃度明顯升高 （P＜0.01）。與S組比較，I／R 組、IPOC組的MDA 濃度顯著升高（P＜0.01）；與I／R 組比較，IPOC 組、A＋F＋I(xiàn)POC 組MDA 濃度明顯降低 （P＜0.01）；與IPOC 組比較，A＋F＋I(xiàn)POC組MDA 濃度明顯降低 （P＜0.01）。S組同A＋F＋I(xiàn)POC組比較SOD 酶蛋白活力濃度、MDA 濃度差異無顯著性 （P＞0.05）（表1）。

表1 不同處理組外周血SOD 酶蛋白活力、MDA 濃度比較 （±s）

注：與S組比較，＊P＜0.01；與I／R 組比較，▲P＜0.01；與IPOC組比較，△P＜0.01。

n SOD （U·mL－1） MDA （nmol·mL－1）8 226.75±20.84 2.13±0.47 I／R 組 8 81.63±20.84＊ 6.28±0.59＊IPOC組 8 130.18±20.44＊▲ 4.42±0.47＊▲A＋F＋I(xiàn)POC組 8 213.44±18.22▲△ 2.39±0.40 S組▲△

3 討 論

心肌梗死是危害人類健康的重要疾病之一，其最有效的治療措施是及時(shí)恢復(fù)血運(yùn)重建，挽救存活缺血心肌，但恢復(fù)血流后由于自由基大量生成、鈣離子超負(fù)荷、能量代謝障礙等原因引起心肌超微結(jié)構(gòu)、電生理、功能及代謝的進(jìn)一步損害。再灌注損傷導(dǎo)致心肌和微血管功能頓抑，心律失常及心肌梗死，嚴(yán)重影響缺血后心臟功能的恢復(fù)，危及病人生命。研究表明：抗心肌缺血再灌注損傷的措施包括IPOC 和PPOC，其中IPOC已有大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及小樣本臨床研究證實(shí)其具有臨床可控性和廣泛的臨床應(yīng)用價(jià)值［3］。山莨菪堿具有降低血小板聚集從而抑制血栓形成、改善微循環(huán)、提高冠脈灌注壓保護(hù)心肌作用［4］，山莨菪堿可激活KATP通道，阻止細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流，減輕細(xì)胞內(nèi)鈣超載，減輕心肌缺血再灌注損傷；并可增加Bcl－2 mRNA 表達(dá)，抗血管內(nèi)皮凋亡［5－6］。芬太尼通過作用于ATP敏感性鉀通道，降低氧化損傷，減少心律失常的發(fā)生，減少心肌梗死面積，減輕MIRI［7］。

缺血再灌注后，因活性氧產(chǎn)生過多或抗氧化酶類活性下降，氧自由基大量生成，介導(dǎo)脂質(zhì)過氧化物反應(yīng)增強(qiáng)，通過與生物膜磷脂中的多不飽和脂肪酸發(fā)生反應(yīng)，形成以MDA 為代表的一系列脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，導(dǎo)致組織損傷［8］，因此，MDA 作為血清代謝指標(biāo)可間接反映心肌細(xì)胞損傷的嚴(yán)重程度。SOD 是體內(nèi)的主要抗氧化酶，可通過清除氧自由基，保護(hù)細(xì)胞免受自由基的損傷。

本研究通過對SOD 和MDA 水平的測定，評價(jià)不同處理方式對缺血再灌注心肌的保護(hù)作用，表明山莨菪堿與芬太尼后處理聯(lián)合心肌缺血后適應(yīng)可顯著降低心肌缺血再灌注兔外周血丙二醛濃度、提高超氧化物歧化酶酶蛋白活力濃度，具有減輕心肌缺血再灌注損傷的作用。

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