玉米中黃曲霉毒素B1 的檢測方法

依桂華 崔 迪 劉加娟 楊金鳳 徐俊文

（1.黑龍江省大慶市綠色農(nóng)產(chǎn)品監(jiān)測中心163316，2.黑龍江省大慶市糧食質(zhì)量檢驗監(jiān)測站163316）

青刈飼料是指人工播種的專供家畜飼用的青飼作物。這類飼料在貯存時要防止潮濕或霜凍。我國常用的青刈飼料作物有青刈玉米、雀麥、青刈高粱、燕麥、黑豆、蠶豆、飼用甘藍和甜菜等。玉米是我國繼大米之后的第二大糧食作物，但是霉菌毒素對玉米的污染遠遠嚴重于對大米的污染。從玉米中黃曲霉毒素的檢出率高達83.9%。動物食用了黃曲霉毒素污染的玉米同樣會受到危害，并且黃曲霉毒素會在動物體內(nèi)富集，最終危害人類的健康。

黃曲霉毒素是生長在食物及飼料中的黃曲霉和寄生曲霉代謝的一組化學結(jié)構(gòu)類似的產(chǎn)物，難溶于水易溶于油、甲醇、丙酮和氯仿等有機物，是一組具有致癌、致畸、致突變性的毒性極強的化合物，其毒性隨種類或結(jié)構(gòu)的不同而存在著較大的差異。黃曲霉毒素B1被公認為是目前致癌力最強的天然物質(zhì)，并且分布很廣，對世界范圍內(nèi)的絕大多數(shù)食品原料和制成品均有不同程度的危害。黃曲霉毒素的檢測方法，最初以薄層層析法為主，發(fā)展到高效液相色譜法、微柱法、酶聯(lián)免疫吸附法等多種方法普遍應用，其進展與新的化學檢測手段和新儀器的出現(xiàn)密不可分。這些新方法、新手段的快速應用，為黃曲霉毒素的檢測提供了更廣泛的選擇余地，適應了不同的檢測目的和要求。本文介紹了食品中黃曲霉毒素B1的檢測方法，為進一步加強食品中黃曲霉毒素B1的控制提供參考。

1 薄層層析法（TLC法）

薄層層析法（TLC法）是20世紀60年代建立起來的檢測黃曲霉毒素的經(jīng)典方法（GB/T5009），也是我國測定食品及飼料中黃曲霉毒素的國家標準方法之一。其原理是樣品中黃曲霉毒素經(jīng)有機溶劑提取、凈化、濃縮并經(jīng)薄層色譜分離后，在波長365納米的紫外光下可產(chǎn)生藍色熒光，根據(jù)其在薄層板上顯示的熒光強度來測定黃曲霉毒素含量。薄層層析法有單向展開和雙向展開法。雙向展開法能進一步去除樣品中的雜質(zhì)，提高了靈敏度，省略了柱層析等凈化步驟。但薄層層析法測定黃曲霉毒素的專一性不夠，因此經(jīng)常引起測量誤差，為確定是否含有黃曲霉毒素還經(jīng)常需要其他試驗進行確證。

2 高效液相色譜法（HPLC法）

高效液相色譜法是20世紀80年代發(fā)展起來的檢測黃曲霉毒素的方法，主要是用熒光檢測器檢測，這一檢測方法將化學分析與領先的計算機技術相結(jié)合，使自動化程度得到極大提高，在實驗空間、人力和儀器都保持不變的情況下，能檢測更多的樣品。其原理是根據(jù)衍生后的黃曲霉毒素在固定相和流動相之間的分配量不同，從而達到分離的目的，分離后的黃曲霉毒素能發(fā)射特征性熒光，被熒光檢測器捕獲后得到檢測。該方法既可采用正相色譜也可采用反相色譜。正相色譜中固定相一般使用硅膠柱，流動相使用以50%水飽和的三氯甲烷：環(huán)己烷：乙腈：乙醇。反相色譜固定相為C18，流動相為乙酸：乙腈：異丙醇：水（1∶5∶5∶39）。樣品中黃曲霉毒素B1經(jīng)提取、柱層析、洗脫、濃縮、薄層分離后，在波長365納米紫外燈光下產(chǎn)生藍色熒光，根據(jù)其在薄層上顯東熒光的最低檢出量來測定含量。該方法分辨率很高，分析時間較短，分析結(jié)果也比較準確，最低檢出限可達到1.0微克/千克。

3 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）

ELISA法測定黃曲霉毒素時主要采用間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法，原理是將黃曲霉毒素的特異性抗體包被于聚苯乙烯微量反應板的孔穴中，再加入待測樣品及酶標已知抗原，兩者與特異性抗體進行免疫競爭反應，然后加入酶底物顯色，利用酶標儀根據(jù)顯色反應顏色的深淺進行定量。該方法測定結(jié)果準確可靠，操作簡便，所涉及儀器及試劑比較少，回收率高，實驗步驟也比較簡單，是目前國內(nèi)外較為先進的黃曲霉毒素檢測方法。但抗體壽命短且需要低溫保存，測定時假陽性率比較高，適合于大量樣品的篩查。

4 結(jié)語

黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織劃定為1類致癌物，毒性比砒霜大68倍，僅次于肉毒素，是目前霉菌中毒性最強的毒素。農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，黃曲霉毒素超標的玉米不少見，如果全部銷毀，將對種植者造成巨大經(jīng)濟損失。因此，加強食物、飼料中黃曲霉毒素B1的檢測有利于提高人民生活水平與安全。