僵蠶化學(xué)成分和藥理活性的研究進(jìn)展Δ

徐 沖，商思陽(yáng)，劉 梅，楊 敏（重慶市中醫(yī)院/重慶市中醫(yī)研究院/古驗(yàn)方與中藥制劑研究所，重慶

400021）

僵蠶為蠶蛾科昆蟲(chóng)僵蠶Bombyx mori Linnaeus4～5齡的幼蟲(chóng)感染（或人工接種）白僵菌beauveria bassiana（bals.）Vuillant 而致死的干燥體，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，應(yīng)用歷史悠久，具有息風(fēng)止痙、祛風(fēng)止痛、化痰散結(jié)等功效。據(jù)統(tǒng)計(jì)，9.6%的成人用藥含僵蠶，而兒童用藥中含僵蠶的比例則高達(dá)45.3%，體現(xiàn)其藥用價(jià)值高且應(yīng)用廣泛[1]。但是，《中國(guó)藥典》仍未明確記載僵蠶的藥效成分，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)亟待完善。本文就僵蠶的化學(xué)成分和藥理活性的現(xiàn)狀作一綜述，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)其藥用價(jià)值和完善其質(zhì)量控制提供參考。

1 化學(xué)成分

當(dāng)前，國(guó)內(nèi)外研究人員已經(jīng)從僵蠶中發(fā)現(xiàn)了多種化學(xué)成分，主要有蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、核苷、揮發(fā)油、有機(jī)酸和衍生物、甾體、香豆素、黃酮、多糖、微量元素等。

1.1 蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸

僵蠶中蛋白質(zhì)類含量高，成分復(fù)雜。李冬生等[2]測(cè)定白僵蠶中的蛋白質(zhì)含量為64.73%；趙建國(guó)等[3]以薄層色譜法對(duì)僵蠶中所含蛋白質(zhì)和氨基酸進(jìn)行分離鑒別，發(fā)現(xiàn)有15種氨基酸和多種蛋白質(zhì)成分。

僵蠶感染的白僵菌素在生長(zhǎng)過(guò)程中能分泌毒素，具有陽(yáng)離子絡(luò)合特性，是僵蠶具有代表性的有效成分之一。白僵菌素為環(huán)狀三羧酸肽，由Hamil首次從球孢白僵菌的菌絲體中獲得[4]。李曉華[5]也在僵蠶本體中分離得到此物。Kong Y等[6]以凝膠過(guò)濾、陰離子交換和反相高效液相色譜（RP-HPLC）法從僵蠶中純化得到一個(gè)新的多肽類化合物BB octapeptide，抗血小板聚集效力與阿司匹林相似，有望開(kāi)發(fā)成為新型的抗凝血藥物。黃海英[7]通過(guò)凝膠色譜法和離子交換色譜法，從僵蠶水煎粗提液中分離純化得到一個(gè)分子質(zhì)量為1.2kD的小分子多肽，測(cè)定其一級(jí)結(jié)構(gòu)顯示，其含甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、丙苯氨酸和酪氨酸等，分子遠(yuǎn)小于已有的抗凝血藥物水蛭素（約7 kD），對(duì)進(jìn)一步合成、開(kāi)發(fā)小分子多肽有很大幫助。彭延古等[8]應(yīng)用凝膠過(guò)濾和離子交換層析等生化技術(shù)分離純化得單一成分ACIBB，HPLC 法測(cè)定分析一活性峰，聚丙烯酰胺凝膠電泳為單一區(qū)帶，鑒定分析為肽類物質(zhì)。

此外，僵蠶中還含有各種氨基酸。衛(wèi)功慶等[9]通過(guò)氨基酸自動(dòng)分析儀發(fā)現(xiàn)僵蠶含有17種氨基酸，如甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、酪氨酸等，其中甘氨酸含量最高。程鎖明等[10]也首次在僵蠶中分離得到高精氨酸。彭延古等[11]對(duì)僵蠶水煎液抗凝活性部位的研究發(fā)現(xiàn)，多肽、氨基酸和草酸銨是其主要成分，含量占80%以上。

1.2 核苷

李偉等[12]以HPLC 法測(cè)定僵蠶中含有4種核苷，分別為尿嘧啶、尿苷、次黃嘌呤和黃嘌呤，其中尿嘧啶含量最高。Kwon HC等[13]和殷志琦等[14]也先后發(fā)現(xiàn)并鑒定了僵蠶中含有胞嘧啶核苷、腺嘌呤和尿嘧啶。

1.3 揮發(fā)油

李冬生等[2]用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）對(duì)白僵蠶、蠶幼蟲(chóng)和桑葉的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)白僵蠶揮發(fā)油中含有170種化學(xué)物質(zhì)，其中5，6-dihydro-2，4，6-trimethyl-4H-1，3，5-dithiazine的含量最高。

1.4 有機(jī)酸和衍生物

草酸銨是僵蠶的主要藥效成分之一，含量高，并具有抗凝和抗驚厥的作用[15-16]。殷志琦等[14]對(duì)白僵蠶的系統(tǒng)化學(xué)成分進(jìn)行研究，首次分離得到棕櫚酸和赤蘚酸。Kwon HC 等[17]2003年從僵蠶中分離鑒定了4個(gè)鞘脂類化合物和3個(gè)磷脂類化合物，分別為：（4E，2S，3R）-2-N-octadecanoyl-4-tetradecasphingenine、（4E，6E，2S，3R）-2-N-eicosanoyl-4，6-tetradecasphingadienine、（4E，2S，3R）-2-N-eicosanoyl-4-tetradecasphingenine、（4E，6E，2S，3R）-2-N-docosanoyl-4，6-tetradecasphingadienine和1-O-（9Z-octadecenoyl）-2-O-（8Z，11Z-octadecadienoyl）-snglycero-3-phosphorylcholine、1，2-di-O-hexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphorylcholine、1，2-di-O-9Z-octadecenoyl-sn-glycero-3-phosphorylcholine。

1.5 甾體

近年來(lái)，研究人員在僵蠶中發(fā)現(xiàn)并鑒定出許多甾體類化合物。殷志琦等[14]從僵蠶的乙醇提取物中分離得到了3個(gè)甾體化合物，利用光譜學(xué)方法鑒定其結(jié)構(gòu)為：麥角甾-6，22-二烯-3β，5α，8α-三醇、β-谷甾醇和胡蘿卜苷。程鎖明等報(bào)道[18]，通過(guò)現(xiàn)代分離分析技術(shù)和化合物理化性質(zhì)及光譜數(shù)據(jù)，2013年首次在白僵蠶中分離鑒定了6個(gè)甾體：3β，5α-二羥基-（22E，24R）-麥角甾-7，22-二烯-6-酮、（22E，24S）-5α，8α-環(huán)二氧-24-甲基-膽甾-6，9（11），22-三烯-3β-醇、5β，6β-環(huán)氧-（22E，24R）-麥角甾-8（14），22-二烯-3β，7α-二 醇、7α-甲氧基-（22E，24R）-5α，6α-環(huán)氧麥角甾-8（14），22-二烯-3β-醇、（22E，24R）-麥角甾-5，7，22-三烯-3β-醇和豆甾醇-7，22-二烯-3β，5α，6α-三醇。李曉華等[5]首次確定氯仿和乙酸乙酯部位為僵蠶抗驚厥的有效部位，從氯仿部位中分離純化得到6，9-氧橋-麥角甾-7，22-雙烯-3-醇，麥角甾-6，22-二烯-3β，5，8-三醇（首次在僵蠶中發(fā)現(xiàn)）和β-谷甾醇、β-胡蘿卜苷。

1.6 香豆素

殷志琦等[19]以95%乙醇提取僵蠶干燥粉末，反復(fù)柱層析輔以重結(jié)晶得到6-甲氧基-7-O-β-d-（4’-甲氧基）吡喃葡糖基香豆素，為首次發(fā)現(xiàn)的新化合物。

1.7 黃酮

趙清等[20]考察了不同炮制方法對(duì)僵蠶中槲皮素和山奈酚含量的影響，發(fā)現(xiàn)變化不大，與生品較接近。王錦軍等[21]以反相HPLC法測(cè)得僵蠶中槲皮素和山奈酚的含量分別為0.22mg/g、0.64mg/g。李冬生等、趙建國(guó)等[2-3]，運(yùn)用AD-8大孔樹(shù)脂和聚酰胺制備白僵蠶黃酮類化合物，建立了分光光度法測(cè)定其含量的方法。

1.8 多糖

據(jù)報(bào)道，對(duì)白僵蠶進(jìn)行脫脂，乙醇回流除去小分子糖類、苷類和生物堿等，經(jīng)超聲波水提、醇沉、Sevag法除蛋白后得到精制的白僵蠶多糖，再經(jīng)陰離子交換層析柱得到1個(gè)水相中性多糖組分BBPW 和3個(gè)鹽相酸性多糖組分BBPS-1、BBPS-2、BBPS-3；BBPW 過(guò)聚丙烯酰胺葡聚糖凝膠層析柱得到2個(gè)均一多糖BBPW-1和BBPW-2，分別為高度聚合的大分子多糖和寡聚糖，寡聚糖結(jié)構(gòu)以β-d-1，2，6-葡萄糖和-d-1，2，6-甘露糖為主鏈、α-d-1，2-半乳糖和α-d-1，3-甘露糖為支鏈、α-d-甘露糖和α-d-葡萄糖為端基組成[22-23]。

1.9 微量元素

中藥中的微量元素與性味、歸經(jīng)、功效有一定相關(guān)性。衛(wèi)功慶等[9]以等離子體光量計(jì)自動(dòng)分析儀測(cè)得僵蠶中含有18種微量元素，其中6種為人體必需的微量元素：鐵（Fe）、鋅（Zn）、銅（Cu）、錳（Mn）、鉻（Cr）、鎳（Ni）。閻汝南等[24]以電感偶合等離子原子發(fā)射光譜分析（ICP-AES）法測(cè)定了生僵蠶和制僵蠶中32種微量元素的含量，以鋁（Al）、鈣（Ca）、鎂（Mg）、磷（P）含量最高。

1.10 其他

僵蠶中還含有芳香胺和醇類，如煙酰胺（nicotinamide）[13]、甘露醇[14]、赤蘚醇[19]以及碳酸氫銨（為僵蠶的又一抗驚厥成分）[25]等無(wú)機(jī)鹽類。

2 藥理活性

2.1 抗凝、抗血栓、促進(jìn)微循環(huán)

Wang JD 等[26]以37種動(dòng)物藥材和一種狗絲蟲(chóng)制備出112份提取物，觀察凝血和纖溶系統(tǒng)的作用，篩選結(jié)果顯示，僵蠶水提物具有潛在的抗凝活性。彭延古等[27]制作大鼠beyers 靜脈血栓模型，靜脈滴注僵蠶注射液后，血栓癥狀明顯減輕，纖溶酶原含量、優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間明顯減少，同時(shí)還可以延長(zhǎng)凝血活酶時(shí)間、凝血酶原時(shí)間和凝血酶時(shí)間。研究結(jié)果顯示，僵蠶對(duì)凝血酶-纖維蛋白原反應(yīng)有直接的抑制作用，通過(guò)抑制血液凝固、促纖溶活性而抑制血栓形成。大劑量僵蠶注射液可明顯抑制凝血酶誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞釋放，并能抗血栓形成[28]。毛曉健等[29]研究結(jié)果顯示，僵蠶水煎劑能增加毛細(xì)血管開(kāi)放數(shù)量，增大微血管直徑，延長(zhǎng)凝血時(shí)間。

2.2 抗驚厥

湯化琴等[30]研究結(jié)果顯示，僵蠶能對(duì)抗士的寧（二甲氧馬錢子堿）引起的小鼠驚厥，而且效果與氯化銨相似。郭曉恒等[31]對(duì)僵蠶抗驚厥活性部位分離鑒定的麥角甾-6，22-二烯-3β，5α，8α-三醇、β-谷甾醇和白僵菌素3個(gè)單體進(jìn)行抗驚厥活性篩選。研究結(jié)果顯示，白僵菌素具有抗驚厥活性。

2.3 抗癌

Jiang X 等[22]在僵蠶中分離純化得到寡聚糖BBPW-2。其體外抗腫瘤檢測(cè)對(duì)腫瘤細(xì)胞株HeLa 和HepG2具有直接的細(xì)胞毒活性，對(duì)MCF-7細(xì)胞株具有長(zhǎng)期抗增殖效應(yīng)；細(xì)胞周期阻斷在G0/G1和G2/M 期。而白僵蠶黃酮類化合物對(duì)癌細(xì)胞增殖的抑制作用明顯且對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有毒性，并具有良好的抗癌效果[23]。僵蠶醇提物對(duì)小鼠艾氏腹水癌（ECA）實(shí)體型抑制率為36%，對(duì)小鼠S180也有抑制作用；體外可抑制人體肝癌細(xì)胞的呼吸，也可用于直腸腺癌型息肉的治療[31-32]。

2.4 降糖

采用白僵蠶片治療85例糖尿病患者，有效率達(dá)71.4%，三多癥狀緩解率85.6%，尿糖控制有效率85.7%，空腹血糖控制有效率80%[33]。提示白僵蠶片治療2型糖尿病具有一定的臨床意義。家兔實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，白僵蠶對(duì)四氧嘧啶實(shí)驗(yàn)型糖尿病有效，并進(jìn)一步提取其醇溶部分和僵蛹，顯示提取物脫皮激素對(duì)四氧嘧啶實(shí)驗(yàn)型糖尿病較白僵蠶片效果更好[34]。

2.5 抗菌

項(xiàng)林平等[34]以95%乙醇超聲提取，提取物對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃度（MIC）為0.625mg/ml。提示僵蠶的抗炎作用與其抑菌活性相關(guān)。柴衛(wèi)利等[35]研究結(jié)果顯示，白僵蠶醇提物對(duì)蘋果炭疽病菌、腐爛病菌、花椒落葉病菌均有一定的抑制作用，其中對(duì)炭疽病菌的抑制作用最強(qiáng)。

2.6 增強(qiáng)免疫

白僵蠶多糖可從多方面促進(jìn)正常小鼠和免疫抑制小鼠的體液免疫和細(xì)胞免疫，對(duì)正常小鼠免疫功能的提高和免疫抑制小鼠免疫功能的恢復(fù)有較強(qiáng)的促進(jìn)作用[23]。

2.7 鎮(zhèn)靜催眠

胡鵬飛等[36]以光電法和開(kāi)闊法觀察僵蠶水提醇沉提取物對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響，發(fā)現(xiàn)提取物能明顯減少小鼠自主活動(dòng)，作用強(qiáng)于酸棗仁，與地西泮效果相當(dāng)，并具有明顯的鎮(zhèn)靜作用；而水提物則無(wú)明顯作用。提示鎮(zhèn)靜作用可能與醇溶性的成分有關(guān)。小鼠灌胃0.5g/20g 或皮下注射0.25g/20g 白僵蠶醇提液，催眠效果與皮下注射50mg/kg 苯巴比妥的效果相當(dāng)[37]。

2.8 對(duì)生育的影響

僵蠶水煎液灌胃能明顯降低雌性小鼠卵巢、子宮質(zhì)量和妊娠率，對(duì)妊娠有明顯影響，其結(jié)果支持僵蠶屬“胎前禁忌”的論點(diǎn)。也能明顯增加雄性小鼠睪丸、貯精囊的質(zhì)量，與文獻(xiàn)[29]報(bào)道其具有雄性激素作用一致。

2.9 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)

Kwon HC等[13]分離純化得到的磷脂與鞘脂類化合物可能通過(guò)刺激神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）合成來(lái)發(fā)揮神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)性效應(yīng)。Kim HJ 等[38]研究結(jié)果顯示，僵蠶提取物作用于人工培養(yǎng)的大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞，通過(guò)抑制脂質(zhì)過(guò)氧化和保護(hù)抗氧化酶來(lái)對(duì)抗乙型淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性。Koo BS等[39]研究結(jié)果顯示，僵蠶提取物能對(duì)抗興奮性氨基酸誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性，從而保護(hù)海馬神經(jīng)元、降低腦缺血及其他神經(jīng)損害導(dǎo)致的神經(jīng)損傷。提示僵蠶可能對(duì)人腦有保護(hù)作用。

3 結(jié)語(yǔ)

僵蠶在古代多用于肝風(fēng)夾痰、驚癇抽搐、小兒急驚等，現(xiàn)代多用于抗驚厥、抗凝和催眠，臨床應(yīng)用一直十分廣泛，且療效確切。近年來(lái)，其抗腫瘤作用亦逐漸受到重視，藥材的市場(chǎng)需求劇增。然而，其代表性有效成分和藥效成分基礎(chǔ)仍未明確，現(xiàn)代藥理研究也不夠深入且集中于原藥材或粗提物上，使得質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)滯后，藥效極難保證，在一定程度上限制了僵蠶的開(kāi)發(fā)利用。因此，利用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)進(jìn)一步系統(tǒng)而深入地研究僵蠶活性成分和作用機(jī)制，對(duì)指導(dǎo)臨床用藥、拓寬藥用范圍、完善藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、保證療效均有著積極的臨床意義。

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