北五味子總木脂素減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑凋亡延緩小鼠腦衰老*

于春艷， 于春榮， 李 賀， 鞠文博， 姜恩平, 4△，陳建光△

(1北華大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，吉林 吉林 132013； 2北京昭衍新藥研究中心股份有限公司毒理部，北京 100176； 3北華大學(xué)藥學(xué)院，吉林 吉林 132013； 4廣東醫(yī)學(xué)院, 廣東 東莞 523808)

隨著人們年齡的增長、老齡人口的增多，研究衰老的機(jī)制以及如何緩解衰老引起學(xué)者們?cè)絹碓蕉嗟年P(guān)注。腦衰老是人衰老最明顯的現(xiàn)象，腦衰老的過程極其復(fù)雜，研究認(rèn)為腦組織結(jié)構(gòu)與功能的改變由多種因素共同作用導(dǎo)致，學(xué)習(xí)和記憶能力的減退是最重要的表現(xiàn)[1]。北五味子[Schisandrachinensis(Turcz.)Baill]屬木蘭科植物，據(jù)報(bào)道其中有效成分五味子多糖可使衰老小鼠已退行性變的神經(jīng)細(xì)胞恢復(fù)正常，且可使神經(jīng)細(xì)胞胞體增大并可明顯促進(jìn)衰老小鼠神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)育[2]。北五味子是否具有緩解腦衰老作用尚需進(jìn)一步研究。關(guān)于衰老的發(fā)生機(jī)制有許多學(xué)說，如自由基學(xué)說、端粒學(xué)說和細(xì)胞凋亡學(xué)說等[3]。研究發(fā)現(xiàn)，在細(xì)胞水平，衰老主要體現(xiàn)在細(xì)胞膜流動(dòng)性降低、脂褐質(zhì)色素累積、酶活性下降和蛋白質(zhì)聚集體增加等[4]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)最重要的負(fù)責(zé)蛋白質(zhì)折疊的細(xì)胞器，未折疊蛋白或錯(cuò)誤折疊的蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)堆積即發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。持續(xù)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡[5]。本課題組已利用D-半乳糖復(fù)制小鼠衰老模型，給予不同劑量的北五味子總木脂素(schisandra total lignin，SCL)，結(jié)果顯示北五味子總木脂素給藥組延緩小鼠衰老，并增加衰老小鼠肌肉協(xié)調(diào)性、增強(qiáng)衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶能力[6]，此次實(shí)驗(yàn)觀察代表蛋白聚集物堆積的泛素化蛋白(ubiquitin，Ub)的表達(dá)水平以及葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、硫氧還蛋白二硫鍵異構(gòu)酶(protein disulfide isomerase,PDI)和C/EBP同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)表達(dá)水平的變化，凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)情況，用以明確北五味子總木脂素抗衰老作用及其可能的作用機(jī)制。

材 料 和 方 法

1 試劑

北五味子總木脂素由北華大學(xué)林學(xué)院自制提純，實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水稀釋溶解至所需濃度；D-半乳糖購自Sigma；SP試劑盒購于福州邁新試劑公司；Ub、GPR78、PDI、CHOP、Bcl-2、Bax及β-actin抗體購自Santa Cruz。

2 衰老小鼠模型的建立、分組與給藥

健康昆明小鼠，雌雄各半，體重18～20 g，吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。合格證號(hào)為SCXK-(吉)2008-0003。清潔級(jí)動(dòng)物室飼養(yǎng)，飲水不限，定時(shí)喂食。

參照文獻(xiàn)[7]復(fù)制衰老小鼠模型。取小鼠50只，雌雄各半，經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，按體重隨機(jī)分為5組: 空白對(duì)照組、模型組、五味子總木脂素低劑量組、五味子總木脂素中劑量組和五味子總木脂素高劑量組，每組10只，正常飲食。除空白對(duì)照組外，其余各組每天1次頸、背部皮下注射D-半乳糖100 mg/kg，連續(xù)注射10周。同時(shí)，五味子總木脂素低劑量組、中劑量組、高劑量組分別按35 mg/kg、70 mg/kg、140 mg/kg蒸餾水配制藥液，灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥10周[8]。斷髓處死小鼠，冰上低溫解剖取腦，部分多聚甲醛固定，部分凍存于-80 ℃。

3 方法

3.1學(xué)習(xí)記憶能力測試(小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)) 學(xué)習(xí)訓(xùn)練于停止給藥后次日進(jìn)行。每組各取1只，平行操作。實(shí)驗(yàn)裝置為一長方形反射箱，大小為32 cm×22.5 cm× 33 cm，用黑色塑料板分隔成6間。底面鋪以銅柵，間距為0.5 cm，每間左角置一高度和直徑均為4.5 cm 的橡膠平臺(tái)。將小鼠置于跳臺(tái)儀隔間內(nèi)，適應(yīng)環(huán)境3 min，然后立即通以32 V 交流電。其正常反應(yīng)是跳回平臺(tái)以躲避傷害性刺激，以雙足同時(shí)接觸銅柵為錯(cuò)誤反應(yīng)，訓(xùn)練5 min(避免電擊死亡)。每只訓(xùn)練3 次。

記憶測試于學(xué)習(xí)訓(xùn)練24 h 后進(jìn)行。將小鼠放置于跳臺(tái)上，同時(shí)按動(dòng)記時(shí)器，記錄第1 次跳下平臺(tái)時(shí)間，此為觸電潛伏期。并記錄5 min 內(nèi)跳下平臺(tái)受到電擊的次數(shù)，即錯(cuò)誤反應(yīng)數(shù)，作為記憶指標(biāo)。

學(xué)習(xí)記憶實(shí)驗(yàn)結(jié)束后斷頭處死，后立即于冰臺(tái)上解剖取出全腦組織，用預(yù)冷的生理鹽水反復(fù)沖洗，濾紙吸干，用于Western blotting實(shí)驗(yàn)的腦組織置于-80 ℃ 超低溫冰箱保存待用，用于切片的腦組織置于4%多聚甲醛中固定。

3.2Western blotting檢測Ub、PDI、GRP78、CHOP、Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá) 用RIPA裂解液提取細(xì)胞總蛋白，以β-actin的水平作為等量蛋白質(zhì)上樣對(duì)照，取50 μg蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行SDS-PAGE后， 轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上；5%奶粉室溫封閉2 h，用含0.01% Tween 20的TBS緩沖液 (TBST) 漂洗3次，每次10 min；加入相應(yīng)的抗體Ub (1∶200)和PDI (1∶200)、GPR78 (1∶200)、CHOP(1∶200)，Bcl-2(1∶200)和Bax(1∶200)，4 ℃ 孵育過夜；TBST漂洗3次后加入相應(yīng)的辣根過氧化物酶標(biāo)記的Ⅱ抗 (1∶1 000)，37 ℃搖床溫育2 h；TBST漂洗3次，每次10 min；DAB顯色，凝膠圖像分析系統(tǒng)(上海天能科技有限公司GIS凝膠成像系統(tǒng))拍照，同時(shí)以β-actin為內(nèi)參照，進(jìn)行蛋白表達(dá)分析，蛋白表達(dá)量用光密度比值表示。

3.3免疫組化方法檢測Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá) 應(yīng)用SP 免疫組化染色法?？笲cl-2多克隆抗體以1∶100稀釋，抗Bax單克隆抗體以1∶100稀釋，Ⅱ抗為羊抗兔/鼠IgG 抗體。顯微鏡(Olympus) 下觀察組織中蛋白表達(dá)，并攝片。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (mean±SD) 表示，多組間樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)檢測北五味子總木脂素對(duì)衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

在學(xué)習(xí)測試中，模型組小鼠5 min 內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)較對(duì)照組增多(P<0.05)，SCL低(L)、中(M)、高(H)劑量組小鼠5 min 內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)較模型組減少(P<0.05)。在記憶測試中，模型組小鼠首次跳下平臺(tái)的潛伏期較空白對(duì)照組縮短(P<0.05)，5 min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)增多(P<0.05)；與模型組比較，SCL低、中、高劑量組小鼠首次跳下平臺(tái)的潛伏期延長(P<0.05)，5 min 內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)減少(P<0.05)，見表1。

表1 北五味子總木脂素對(duì)衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

2 北五味子總木脂素對(duì)衰老小鼠腦組織中Ub蛋白表達(dá)的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組Ub表達(dá)增加(P<0.05)；與模型組相比，SCL低、中、高劑量組Ub蛋白表達(dá)降低(P<0.05)，見圖1。

3 北五味子總木脂素對(duì)衰老小鼠腦組織中GRP78蛋白表達(dá)的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組GRP78蛋白表達(dá)增加(P<0.05)；與模型組相比，SCL低、中、高劑量組GRP78蛋白表達(dá)降低(P<0.05)，見圖2。

4 北五味子總木脂素對(duì)衰老小鼠腦組織中PDI蛋白表達(dá)的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組PDI蛋白表達(dá)增加(P<0.05)；與模型組相比，SCL低、中、高劑量組PDI蛋白表達(dá)降低(P<0.05)，見圖3。

Figure 1. The effect of SCL on Ub protein expression of the aging mouse brain tissues detected by Western blotting.1: control group; 2: model group; 3: SCL(L) group; 4: SCL(M) group; 5: SCL (H) group.Mean±SD.n=3. *P<0.05 vs control group; #P<0.05 vs model group.

Figure 2. Effect of SCL on GRP78 protein expression of the aging mouse brain tissue detected by Western blotting.Mean±SD.n=3.*P<0.05 vs control group; #P<0.05 vs model group.

5 北五味子總木脂素對(duì)衰老小鼠腦組織中CHOP蛋白表達(dá)的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組CHOP蛋白表達(dá)增加(P<0.05)；與模型組相比，SCL低、中、高劑量組CHOP蛋白表達(dá)降低(P<0.05)，見圖4。

6 北五味子總木脂素對(duì)衰老小鼠大腦皮質(zhì)Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響

免疫組化結(jié)果顯示，空白對(duì)照組神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常，細(xì)胞核清晰，胞漿豐富；模型組大部分神經(jīng)細(xì)胞變性，神經(jīng)元體積變小，胞核與胞漿界限模糊，細(xì)胞核固縮成三角形或不規(guī)則形；與模型組相比，SCL低、中、高劑量組神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)規(guī)則仍有不同程度的神經(jīng)細(xì)胞變性，但變性細(xì)胞數(shù)量明顯減少，見圖5、6。

Figure 3. The effect of SCL on PDI protein expression of the aging mouse brain tissue detected by Western blotting.Mean±SD.n=3.*P<0.05 vs control group; #P<0.05 vs model group.

空白對(duì)照組神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)可見棕黃色顆粒，Bcl-2蛋白為陽性表達(dá)；模型組神經(jīng)細(xì)胞胞漿內(nèi)棕黃色顆粒含量降低，Bcl-2蛋白為陰性表達(dá)；與模型組相比，SCL低、中、高劑量組神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)可見棕黃色顆粒，Bcl-2蛋白為陽性表達(dá)，見圖5。

空白對(duì)照組神經(jīng)細(xì)胞胞漿內(nèi)無棕黃色顆粒，Bax蛋白為陰性表達(dá)；模型組神經(jīng)細(xì)胞胞漿內(nèi)可見棕黃色顆粒，Bax蛋白為陽性表達(dá)；與模型組相比，SCL低、中、高劑量組神經(jīng)細(xì)胞胞漿內(nèi)無棕黃色顆粒，Bax蛋白為陰性表達(dá)，見圖6。

Figure 4. The effect of SCL on CHOP protein expression of the aging mouse brain tissues detected by Western blotting.Mean±SD.n=3.*P<0.05 vs control group; #P<0.05 vs model group.

7 北五味子總木脂素對(duì)衰老小鼠腦組織中Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的影響

與空白對(duì)照組相比，模型組線粒體抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)降低(P<0.05)，促凋亡蛋白Bax表達(dá)增加(P<0.05)，Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05)；與模型組相比，SCL低、中、高劑量組Bcl-2蛋白增加(P<0.05)，Bax蛋白表達(dá)降低(P<0.05)，Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)，見圖7。

討 論

北五味子藥用其成熟、干燥的果實(shí)，其中含有木脂素、多糖、揮發(fā)油、脂肪酸和維生素等活性成分，具有增強(qiáng)心血管功能、抗氧自由基及免疫增強(qiáng)作用。本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果顯示，北五味子具有明顯的鎮(zhèn)靜、催眠、促睡眠作用，并對(duì)劑量呈現(xiàn)一定依賴性[9-10]。北五味子總木脂素具有抗疲勞、增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力、增強(qiáng)免疫系統(tǒng)功能等作用[11]。五味子油對(duì)2型糖尿病大鼠胰島B細(xì)胞具有保護(hù)作用[12]。北五味子總木脂素具有抑制過氧化氫(H2O2) 誘導(dǎo)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC12細(xì)胞凋亡的作用，與線粒體途徑凋亡有關(guān)[13]。本課題從北五味子延緩衰老方面進(jìn)行研究。

Figure 5. The effect of SCL on Bcl-2 protein expression of the aging mouse cerebral cortex observed by immunohistochemistry (×400).

Figure 6. The effect of SCL on Bax protein expression in the aging mouse cerebral cortex observed by immunohistochemistry (×400).

D-半乳糖誘發(fā)動(dòng)物衰老與氧化應(yīng)激損傷和自由基毒性有關(guān)[14]。D-半乳糖可誘發(fā)體內(nèi)自由基蓄積，使蛋白、脂質(zhì)及核酸過氧化，引起線粒體結(jié)構(gòu)損傷和功能紊亂，出現(xiàn)能量代謝障礙，導(dǎo)致細(xì)胞損傷。機(jī)體衰老以腦結(jié)構(gòu)和腦功能的改變?yōu)橹匾卣?。隨著大腦老化，灰色物質(zhì)萎縮，白色物質(zhì)功能開始衰退[15]。萎縮現(xiàn)象在前額皮質(zhì)和海馬體處非常明顯，前額皮質(zhì)的功能是幫助人們進(jìn)行高級(jí)思考和推理，而海馬體在記憶過程中起著核心作用。學(xué)習(xí)記憶障礙是腦衰老的一種重要表現(xiàn)。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，D-半乳糖誘導(dǎo)小鼠表現(xiàn)為學(xué)習(xí)記憶能力障礙，形成衰老的行為學(xué)改變；通過免疫組化結(jié)果，觀察到衰老小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞變性，形成衰老的形態(tài)學(xué)改變。北五味子總木脂素能改善衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，延緩衰老的發(fā)生和發(fā)展。

目前研究發(fā)現(xiàn)，在衰老相關(guān)的疾病中，細(xì)胞活性氧生成過多可引起線粒體能量代謝障礙，從而導(dǎo)致一些神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生或惡化[16]。線粒體的完整性由Bcl-2超家族的幾個(gè)成員控制。細(xì)胞內(nèi)存在促凋亡和抗凋亡2個(gè)Bcl-2蛋白家族。在凋亡發(fā)生時(shí)，促凋亡蛋白Bax和Bak二聚化，從而插入線粒體外膜，啟動(dòng)內(nèi)源性凋亡信號(hào)通路，使得生物膜上形成孔洞?？沟蛲龅鞍譈cl-2可以中斷這一相互作用，避免線粒體膜通透化，故細(xì)胞凋亡的發(fā)生取決于Bcl-2 和Bax的相對(duì)濃度，即Bcl-2 /Bax 值。免疫組化結(jié)果觀察到衰老小鼠神經(jīng)細(xì)胞胞漿中抗凋亡蛋白Bcl-2呈陰性表達(dá)，促凋亡蛋白Bax呈陽性表達(dá)，SCL低、中、高劑量組神經(jīng)細(xì)胞胞漿中抗凋亡蛋白Bcl-2呈陽性表達(dá)，促凋亡蛋白Bax呈陰性性表達(dá)。Western blotting結(jié)果顯示，衰老小鼠Bcl-2蛋白表達(dá)水平降低，Bax蛋白表達(dá)增加，Bcl-2/Bax降低；SCL低、中、高劑量組Bcl-2蛋白表達(dá)水平增加，Bax蛋白表達(dá)降低，Bcl-2/Bax增加，這些結(jié)果提示北五味子總木脂素通過減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抗小鼠腦組織衰老的作用。

Figure 7. The effects of SCL on the protein expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 and proapoptotic protein Bax, and Bcl-2 /Bax ratio in the aging mouse brain tissue detected by Western blotting.Mean±SD.n=3.*P<0.05 vs control group; #P<0.05 vs model group.

衰老不僅能引起機(jī)體各組織器官功能下降、免疫功能下降易感染以外，還引起阿爾茨海默(Alzheimer)病等相關(guān)疾病[17]。在Alzheimer病患者腦中可見β淀粉性蛋白沉積，由于錯(cuò)誤折疊或變性蛋白質(zhì)在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)堆積而導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙，細(xì)胞凋亡速率是正常對(duì)照組的50多倍。異常蛋白或聚集的錯(cuò)誤折疊的蛋白是被泛素化修飾的，所以常常用Ub代表蛋白發(fā)生異?；蝈e(cuò)誤折疊[18]。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是真核細(xì)胞的重要細(xì)胞器，提供了蛋白質(zhì)合成、折疊、修飾然后分泌到細(xì)胞外，或表達(dá)于細(xì)胞膜表面的主要場所[19]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)新生成蛋白質(zhì)的正確折疊、成熟和穩(wěn)定由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)的幾種駐留分子伴侶來完成，其中包括了GRP78以及幾種參與蛋白折疊的酶類，例如硫氧還蛋白超家族成員PDI。在各種生理和病理的情況下，包括缺氧、氧化損傷，都有可能會(huì)導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的蛋白折疊負(fù)荷和能力的失衡，從而引起未折疊蛋白或錯(cuò)誤折疊蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)堆積，此時(shí)即發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生時(shí)，其腔內(nèi)的PDI蛋白表達(dá)增加、活化以恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白折疊能力。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是進(jìn)化保守機(jī)制，其整合了信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein response，UPR)。哺乳動(dòng)物細(xì)胞的UPR反應(yīng)是由3個(gè)跨膜蛋白所控制，都是存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的應(yīng)激感受因子，它們分別是PERK、IRE1和ATF6。UPR首要的作用就是減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白負(fù)擔(dān)。GRP78在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時(shí)與IRE-1α、PERK、ATF6解離，激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路[20]。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是細(xì)胞對(duì)內(nèi)外刺激的適應(yīng)性反應(yīng)。適度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)GRP78 等內(nèi)質(zhì)應(yīng)激蛋白表達(dá)上調(diào)，有利于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)處理未折疊蛋白或錯(cuò)誤折疊蛋白，并促進(jìn)鈣穩(wěn)態(tài)恢復(fù)；持續(xù)而嚴(yán)重的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可明顯上調(diào)GRP78的表達(dá)，誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的CHOP 的表達(dá)及活化，觸發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡途徑[21]。CHOP 又稱生長停滯及DNA損傷蛋白153是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激特異的轉(zhuǎn)錄因子，過量表達(dá)的CHOP 由胞漿轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核，進(jìn)而通過下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2，導(dǎo)致Bax 從胞漿轉(zhuǎn)位至線粒體，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[22]，或者誘導(dǎo)促凋亡蛋白Bim表達(dá)等途徑促進(jìn)細(xì)胞凋亡[23]。另外，CHOP 可通過上調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化酶1α( ER oxidase 1α，ERO1α) 誘導(dǎo)三磷酸肌醇受體介導(dǎo)的鈣釋放，激活鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶，進(jìn)而觸發(fā)線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

我們的結(jié)果顯示，衰老模型組Ub蛋白表達(dá)水平增加，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白PDI表達(dá)增加，GRP78和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑凋亡調(diào)控蛋白CHOP蛋白表達(dá)增加，Bcl-2蛋白表達(dá)水平降低，Bax蛋白表達(dá)增加，Bcl-2/Bax降低；SCL低、中、高劑量組Ub蛋白、PDI 、GRP78和CHOP蛋白表達(dá)降低，Bcl-2蛋白表達(dá)水平增加，Bax蛋白表達(dá)降低，Bcl-2/Bax增加，這提示北五味子總木脂素通過減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡而發(fā)揮抗小鼠腦衰老的作用。

細(xì)胞凋亡途徑分為內(nèi)源性與外源性，內(nèi)源性凋亡有線粒體途徑和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑2條主要的信號(hào)途徑。Bcl-2 蛋白家族是線粒體途徑凋亡的關(guān)鍵分子，CHOP 被認(rèn)為是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)凋亡的特異性標(biāo)志。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體之間存在結(jié)構(gòu)和功能上的緊密聯(lián)系，參與調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到線粒體間通信的因素還需深入研究。

[參 考 文 獻(xiàn)]

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