夾脊溫針灸法對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜核因子－κB的影響

張秀榮，張鴻婷，郭丹丹，王興，闞麗君

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

RA是由于機(jī)體免疫異常引起的以對(duì)稱性多關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的異質(zhì)性、系統(tǒng)性自身免疫疾病。NF－κB在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的炎癥進(jìn)程中有重要地位，在免疫介導(dǎo)的RA的炎癥、增生和骨侵蝕三大病理過程中，NF－κB都起著中心調(diào)節(jié)作用。以NF－κB為靶點(diǎn)，針對(duì)其信號(hào)通路中的各個(gè)環(huán)節(jié)抑制其活化，目前已成為抗炎、抗風(fēng)濕治療研究的熱點(diǎn)。本研究以佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠為研究對(duì)象，從核因子－κB角度探討RA的發(fā)病機(jī)制并研究夾脊溫針灸法對(duì)AA大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜核因子NF－κB表達(dá)的影響，探討針灸治療RA作用的內(nèi)在作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

Wistar大鼠，30只，潔凈級(jí)，體質(zhì)量(200±10)g，雌雄各半，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

將30只Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，隨機(jī)抽取10只，于右側(cè)后肢足墊皮內(nèi)注射0.1ml生理鹽水，余20只大鼠足跖底部注射0.1ml完全弗氏佐劑［1］進(jìn)行造模。造模成功的AA大鼠20只，隨機(jī)分成模型對(duì)照組(B組)、夾脊溫針灸組(C組)，每組10只，將注射生理鹽水的10只大鼠作為空白對(duì)照組(A組)。A組和B組不做任何治療;C組:將大鼠固定，參照《中國(guó)獸醫(yī)針灸學(xué)》選夾脊穴，用0.28mm×25mm毫針針刺上述穴位，并用多功能艾灸儀治療，每日1次，每次15min，治療中間按上述穴位行針1次，采用平補(bǔ)平瀉法，共治療14天。

1.3 標(biāo)本采集

膝關(guān)節(jié)取材:針灸第14天，大鼠稱重，用20%烏拉坦腹腔麻醉(4ml/kg)，仰位固定，沿后腿膝關(guān)節(jié)正中縱行切開皮膚，直至暴露出以膝關(guān)節(jié)為中心約3cm×3cm的區(qū)域，可見白色的髕韌帶，沿髕韌帶下方將其剪開，用止血鉗夾住髕韌帶斷端將髕骨向上掀起，再分別沿髕骨兩側(cè)向上分離至股骨，此時(shí)即打開了膝關(guān)節(jié)腔，可見由髕骨下極向下延續(xù)有一層平滑光亮呈淺淡黃色的滑膜組織，用眼科剪緊貼關(guān)節(jié)面邊緣將滑膜完整剪下，用眼科直鑷夾起置10%的中性甲醛中固定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)腫脹度的影響

夾脊溫針灸法可以改善AA大鼠關(guān)節(jié)腫脹度，結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度變化比較(s，cm)

表1 各組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度變化比較(s，cm)

注:與 A 組比較，△P ＜0.05;與 B 組比較，★P ＜0.01。

組別 n 造模前 針灸前 針灸第14天A組10 0.446 ±0.053 0.485 ±0.054 0.497 ±0.052 B 組 10 0.488 ±0.056 0.948 ±0.102△ 0.631 ±0.074△C 組 10 0.491 ±0.051 1.011 ±0.172△ 0.495 ±0.037★

2.2 膝關(guān)節(jié)滑膜組織 NF－κB(P65)免疫組織化學(xué)結(jié)果

A組:滑膜細(xì)胞內(nèi)棕黃色的NF－κB(P65)陽性反應(yīng)物在胞漿、胞核染色非常弱，且?guī)缀醵挤植加诎麧{中，胞核中的陽性物質(zhì)很少甚至沒有?；ぜ?xì)胞無增生為1～2層。

B組:滑膜細(xì)胞明顯增生，滑膜細(xì)胞核、胞漿內(nèi)棕黃色的NF－κB(P65)陽性反應(yīng)物染色較正常組明顯加深，多呈團(tuán)塊狀分布，且胞核內(nèi)染色較胞漿深。分布細(xì)胞多在滑膜襯里細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及淋巴細(xì)胞。

C組:滑膜細(xì)胞無明顯增生，滑膜細(xì)胞內(nèi)NF－κB(P65)陽性反映物在胞核、胞漿棕黃色染色非常淺，在胞核內(nèi)的棕黃色染色較模型組染色淺，接近正常組，未見棕黃色染色團(tuán)塊狀分布。

2.3 各組大滑鼠膜中NF－κB(P65)表達(dá)密度變化

夾脊溫針灸能夠抑制AA大鼠關(guān)節(jié)滑膜NF－κB(P65)高表達(dá)活性，結(jié)果見表2。

表2 各組關(guān)節(jié)滑膜NF－κB(P65)表達(dá)密度比較(s)

表2 各組關(guān)節(jié)滑膜NF－κB(P65)表達(dá)密度比較(s)

注:與 A 組比較，△P ＜0.01;與 B 組比較，★P ＜0.01。

組別 n NF－κB(P65)A組10 0.011026 ±0.002293 B 組 10 0.088897 ±0.015542△C 組 10 0.017147 ±0.002293★

3 討論

目前關(guān)于RA發(fā)病機(jī)制仍不清楚，NF－κB信號(hào)通路在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的炎癥進(jìn)程中有重要地位。沈暉等［2］研究顯示，AA大鼠模型滑膜中和脊神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中NF－κB表達(dá)均增高。NF－κB參與調(diào)節(jié)炎癥過程中多種細(xì)胞因子和細(xì)胞黏附因子表達(dá)，在自身免疫性疾病的發(fā)病中發(fā)揮重要作用［3］?；罨霓D(zhuǎn)錄因子NF－κB通過與相應(yīng)的炎癥介質(zhì)靶基因啟動(dòng)子區(qū)的κB位點(diǎn)相結(jié)合而導(dǎo)致炎癥介質(zhì)基因的過度表達(dá)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，在RA滑膜組織中NF－κB異常活化，而且，在RA患者滑膜組織和關(guān)節(jié)液中NF－κB通路調(diào)節(jié)多種炎癥因子的表達(dá)［4－5］。

針灸治療RA是一種有效的方法，具有改善微循環(huán)，調(diào)節(jié)免疫功能，抑制自由基，釋放鎮(zhèn)痛，降低皮質(zhì)醇的分泌等作用，為了尋求一個(gè)高效易于實(shí)施的針灸方案，在我們多年工作經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，參考大量文獻(xiàn)，又經(jīng)多次反復(fù)臨床實(shí)踐，確立了夾脊溫針灸法治療RA方案，以貫通督脈之陽氣，達(dá)到調(diào)和陰陽，平和氣血作用。本研究以NF－κB為靶點(diǎn)，以?shī)A脊溫針灸法為研究方法，結(jié)果表明，本法可降低滑膜組織中異?；罨腘F－κB活性表達(dá)，從而抑制NF－κB信號(hào)通路活化，達(dá)到治療作用。

［1］蘇暢，張成義，韓慧明，等.佐劑性關(guān)節(jié)炎的佐劑劑量條件探索［J］.北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2001，2(4):306 －307.

［2］沈暉，魯靜國(guó).佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠脊神經(jīng)節(jié)中核因子kappa B表達(dá)的研究［J］.中國(guó)病理生理雜志，2005，21(3):494 －496.

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［4］楊露，全學(xué)軍.CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在同種異體移植免疫耐受中的研究進(jìn)展［J］.免疫學(xué)雜志，2011，27(11):932 － 935.

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