頂空毛細(xì)管氣相色譜法測定血栓通注射液中有機(jī)溶劑殘留量

張赟赟，嚴(yán)赟，羅佚

(1.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022;2.廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530021)

血栓通注射液，又名田七人參注射液，可改善缺血心肌供血，建立側(cè)支循環(huán)，增加冠脈血流量，降低心肌耗氧量，提高心肌耐缺氧力，具有活血祛瘀，通脈活絡(luò)功效。臨床用于瘀血阻絡(luò)，中風(fēng)偏癱，胸痹心痛及視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞等癥。其主要成分為三七總皂苷，由于三七總皂苷在提取精制過程中使用了有機(jī)溶劑提取、大孔樹脂分離純化等手段，可能會帶來醇類、烷烴類和苯類等殘留物，給用藥安全帶來隱患。本實(shí)驗(yàn)參考《中國藥典》2010年版一部“三七總皂苷”項(xiàng)下及“大孔吸附樹脂分離純化中藥提取液的技術(shù)要求(暫行)”對多批次市售血栓通注射液中可能存在的甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、二甲苯、1，2－二乙基苯和二乙烯苯等有機(jī)溶劑進(jìn)行研究并測定。

1 儀器與試藥

島津GC－2010氣相色譜儀;Agilent 7864E頂空進(jìn)樣器;甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、二甲苯、1，2－二乙基苯、二乙烯苯(分析純);N，N－二甲基甲酰胺(色譜純);水為二次重蒸水;血栓通注射液為市售隨機(jī)抽取6個企業(yè)15批樣品。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件

DB－624毛細(xì)管柱(柱長30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚度1.40μm);柱溫為程序升溫，初始溫度60℃，保持2min，以每分鐘3℃的速率升溫至130℃，保持3min，再以每分鐘40℃的速率升溫至200℃，保持6min;進(jìn)樣口溫度230℃;檢測器溫度250℃;頂空進(jìn)樣，頂空瓶平衡溫度為80℃，平衡時間為30min;進(jìn)樣量:1μl;分流進(jìn)樣，分流比為1∶1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液的制備 精密稱取甲醇0.2g、乙醇 0.2g、丙酮 0.2g、正己烷 0.2g、乙酸乙酯0.2g、正丁醇 0.2g、苯 0.02g、甲苯 0.2g、二甲苯 0.2g、1，2 － 二乙基苯 0.2g、二乙烯苯 0.2g，置同一 100ml量瓶中，加N，N－二甲基甲酰胺至刻度，搖勻，再精密量取1ml置50ml量瓶中，加25%N，N－二甲基甲酰胺至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取血栓通注射液1.0ml，置20ml頂空瓶中，精密加入25%N，N － 二甲基乙酰胺溶液4ml，密封，搖勻，即得。

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱取甲醇0.2g、乙醇 0.2g、丙酮0.2g、正己烷0.2g、乙酸乙酯 0.2g、正丁醇 0.2g、苯 0.02g、甲苯0.2g、二甲苯 0.2g、1，2 － 二乙基苯 0.2g、二乙烯苯0.2g，置同一50ml量瓶中，加N，N－二甲基甲酰胺至刻度，搖勻，作為混合對照品儲備液。分別精密量取混合對照品儲備液 5.0、2.5、1.0、0.50ml，置 50ml量瓶中，加25%N，N－二甲基甲酰胺至刻度，搖勻，得線性1～4號混合對照品溶液;再分別精密量取線性2號混合對照品溶液 10.0、5.0ml置 100ml量瓶中，加 25%N，N－二甲基甲酰胺至刻度，搖勻，得線性5、6號混合對照品溶液。再精密量取線性6號混合對照品溶液1.00ml置10ml量瓶中，加25%N，N－二甲基甲酰胺至刻度，搖勻，得線性7號混合對照品溶液。分別精密吸取1～7號混合對照品溶液5ml，置20ml頂空進(jìn)樣瓶中，混勻，吸取1μl，注入氣相色譜儀測定，結(jié)果見表1。以進(jìn)樣濃度C(mg/ml)為橫坐標(biāo)X、對照品峰面積為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行回歸計(jì)算，得回歸方程。結(jié)果以上溶劑在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 11種溶劑的回歸方程和檢出限

2.4 精密度試驗(yàn)

取2.2.1項(xiàng)下的混合對照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)測定6次。分別記錄甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、二甲苯、1，2－二乙基苯、二乙烯苯的峰面積，RSD分別為2.8%、1.3%、2.1%、2.6%、2.8%、1.7%、2.6%、1.9%、2.5%、2.6%、2.3%。結(jié)果表明，本法的精密度良好。

2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

由于樣品中只有部分批次中有乙醇和丙酮被檢出，其他溶劑均未檢出，故重復(fù)性試驗(yàn)未做。試驗(yàn)精密度可參考回收率試驗(yàn)數(shù)值。

2.6 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密量取已知含量的血栓通注射液1ml，置20ml頂空進(jìn)樣瓶中，精密加入2.2.1項(xiàng)下混合對照品溶液4.0ml，搖勻，按上述色譜條件，平行測定6次，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、二甲苯、1，2－二乙基苯、二乙烯苯平均回收率和 RSD分別為 99.5%(RSD=2.9%)、101.8%(RSD=1.8%)、103.4%(RSD=2.1%)、100.2%(RSD=3.3%)、102.8%(RSD=1.0%)、102.4%(RSD=2.2%)、104.2%(RSD=2.9%)、103.2%(RSD=4.0%)、101.9%(RSD=2.9%)、103.7%(RSD=3.9%)、100.6(RSD=1.8%)。表明本方法準(zhǔn)確度較高。

3 結(jié)果與討論

按擬訂的測定方法，共隨機(jī)抽取6個企業(yè)15批血栓通注射液，測定甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、二甲苯、1，2－二乙基苯和二乙烯苯的含量。結(jié)果顯示，有5個企業(yè)部分批次檢出乙醇和丙酮2種有機(jī)溶劑，乙醇含量在0.001% ～0.033%、丙酮含量在0.0002% ～0.0008%，其他有機(jī)溶劑均未檢出。

本法能有效地控制血栓通射液中的殘留溶劑。由于血栓通注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)形成年代較早，對于生產(chǎn)工藝及很多關(guān)鍵的技術(shù)參數(shù)都未細(xì)化，2010版《中國藥典》也未有對該品種有機(jī)溶劑殘留量的控制方法，為了避免造成生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)上的隨意性，有必要建立對血栓通注射液中殘留溶劑的測定項(xiàng)目。

附圖:

圖1 混合對照品GC圖

圖2 25%N，N－二甲基甲酰胺GC圖

圖3 企業(yè)1樣品HPLC色譜圖

圖4 企業(yè)2樣品HPLC色譜圖

圖5 企業(yè)3樣品HPLC色譜圖

圖6 企業(yè)4樣品HPLC色譜圖

圖7 企業(yè)5樣品HPLC色譜圖

圖8 企業(yè)6樣品HPLC色譜圖