李 容,舒德忠,徐道英,王柏桉,鄭維國(guó)
(重慶市涪陵中心醫(yī)院藥劑科,重慶 408000)
水氯甲痤瘡凝膠劑是由水楊酸、氯霉素和甲硝唑3組分為主藥,以新型的高分子藥用輔料卡波姆-940等為輔料制成的凝膠劑,是由我院曾使用的痤瘡Ⅰ號(hào)改進(jìn)而來(lái)。痤瘡Ⅰ號(hào)是由2%水楊酸、1%氯霉素和0.5%甲硝唑以75%乙醇為溶劑溶解配制而成的溶液劑,用于青少年痤瘡,臨床療效確切,不良反應(yīng)少,深受廣大痤瘡患者的喜愛(ài),并產(chǎn)生了很大的經(jīng)濟(jì)效益。但其在皮膚表面滯留時(shí)間較短,藥物迅速?gòu)钠つw中清除,生物利用度低,對(duì)皮膚有刺激性,且溶液劑不便于使用和攜帶。卡波姆系水溶性凝膠,易于清除、清洗,是制備外用凝膠的理想輔料。為此,以2%水楊酸、1%氯霉素和0.5%甲硝唑?yàn)橹魉?,以卡波姆、甘油、薄荷腦、三乙醇胺、丙二醇和乙醇等為輔料制成凝膠劑。該產(chǎn)品均勻細(xì)膩,稠度適宜,易于涂展,對(duì)皮膚無(wú)刺激性,工藝簡(jiǎn)單,質(zhì)量可控。為確保該制劑的療效和質(zhì)量,采用高效液相色譜法不經(jīng)分離同時(shí)測(cè)定水氯甲痤瘡凝膠劑中主藥水楊酸、氯霉素和甲硝唑的含量[1-2],現(xiàn)報(bào)道如下。
UV-2401型紫外分光光度計(jì)(日本島津);LC-20AT型高效液相色譜儀(日本島津),包括SPD-M20A型光電二極管陣列檢測(cè)器、CBM-20ALite系統(tǒng)控制器、CTO-10ASVP型柱溫箱;TG328B型電光分析天平(上海天平儀器廠);電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科技有限公司)。水楊酸對(duì)照品(批號(hào)為100106),氯霉素對(duì)照品(含量 99.5%,批號(hào)為 130555),甲硝唑?qū)φ掌罚ㄅ?hào)100191),均來(lái)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;水楊酸原料藥(鎮(zhèn)江前進(jìn)化工有限公司,批號(hào)為120201);氯霉素原料藥(南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司,批號(hào)為CH111032);甲硝唑原料藥(廣西河池化工醫(yī)藥股份有限公司,批號(hào)為101106);甲醇(色譜醇,成都市科龍化工試劑廠,批號(hào)為20120728),水為注射用水(四川科倫藥業(yè)股份有限公司,批號(hào)為M12070708),其他試劑均為分析純。
按處方量稱取甘油和卡波姆,將卡波姆均勻撒于甘油表面,用玻棒輕輕攪拌浸潤(rùn),加適量純化水,攪勻,放置過(guò)夜,溶脹即得基質(zhì)。將水楊酸、氯霉素和薄荷腦溶于處方量的乙醇和丙二醇中,將甲硝唑溶于80℃純化水中,把上述兩溶液分別加入溶脹好的卡波姆基質(zhì)中,攪拌均勻,加三乙醇胺調(diào)節(jié)pH至6~7,再加純化水使成100 g,攪拌均勻呈稠狀,即得水氯甲痤瘡凝膠劑。
精密稱取水楊酸對(duì)照品30 mg,置25 mL容量瓶中,用少量乙醇溶解,加純化水至25 mL,搖勻作水楊酸對(duì)照品貯備液;精密量取水楊酸對(duì)照品儲(chǔ)備液1.5 mL,置10 mL容量瓶中,加純化水至刻度,搖勻,即得含水楊酸180 μg/mL的對(duì)照品溶液。精密稱取氯霉素對(duì)照品15 mg,置25 mL容量瓶中,用少量乙醇溶解,加純化水至25 mL搖勻作氯霉素對(duì)照品貯備液;精密量取氯霉素對(duì)照品貯備液1.5 mL,置10 mL容量瓶中,加純化水至刻度,搖勻,即得含氯霉素 90 μg/mL的對(duì)照品溶液。精密稱取甲硝唑?qū)φ掌?.5 mg,置25 mL容量瓶中,用少量熱水溶解,加純化水至 25 mL搖勻作甲硝唑?qū)φ掌焚A備液。精密量取甲硝唑?qū)φ掌焚A備液1.5 mL,置10 mL量瓶中,加純化水至刻度,搖勻,即得含甲硝唑45 μg/mL的對(duì)照品溶液。取水氯甲痤瘡凝膠劑1 g,精密稱定,用純化水溶解,過(guò)濾至100 mL容量瓶中,加純化水至刻度,搖勻,即得供試品溶液。按照水氯甲痤瘡凝膠劑處方制備不含水楊酸、氯霉素和甲硝唑的空白凝膠,按供試品溶液的制備方法操作,即得陰性對(duì)照品溶液。
色譜柱:VP - ODS C18柱(150 mm ×4.6 mm,4.6 μm);流動(dòng)相:甲醇 - 水 - 冰醋酸(50 ∶50 ∶1.2);流速:1.0 mL /min;檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量:20 μL。試驗(yàn)過(guò)程空調(diào)控溫在 25 ℃。在上述色譜條件下,將水楊酸、氯霉素和甲硝唑?qū)φ掌啡芤?、供試品溶液、陰性?duì)照品溶液分別進(jìn)樣20 μL,記錄色譜圖,見(jiàn)圖1。供試品和對(duì)照品溶液的色譜圖在相同的保留時(shí)間有一相同的色譜峰,而陰性對(duì)照品溶液在此保留時(shí)間處無(wú)干擾。
圖1 高效液相色譜圖
線性關(guān)系考察:精密吸取水楊酸、氯霉素、甲硝唑?qū)φ掌焚A備液各 0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 mL,置 10 mL 容量瓶中,用純化水稀釋至刻度,搖勻。分別取上述各溶液平行進(jìn)樣3次,記錄峰面積。以峰面積對(duì)質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 線性關(guān)系考察結(jié)果
精密度試驗(yàn):取線性關(guān)系考察項(xiàng)下水楊酸、氯霉素和甲硝唑各1個(gè)質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液,分別在不同時(shí)間測(cè)定5次。結(jié)果的 RSD分別為2.70%,2.50%,1.13%,表明該方法精密度較好。
重復(fù)性試驗(yàn):分別精密稱取同一批樣品適量,共6份,依法制備供試品溶液,進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果水楊酸、氯霉素和甲硝唑平均含量占標(biāo)示量的 102.44%,101.49%和 101.63%,RSD分別為0.95% ,0.79% 和 0.78% ,表明方法重現(xiàn)性良好。
穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液,分別于 0,2,4,6,8 h 時(shí)測(cè)定。結(jié)果水楊酸、氯霉素和甲硝唑的 RSD分別為1.23%,0.95%和0.87%(n=5),表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
加樣回收試驗(yàn):按處方比例精密稱定水楊酸對(duì)照品20.02 mg、氯霉素對(duì)照品9.86 mg、甲硝唑?qū)φ掌?.03 mg,置 50 mL容量瓶中,加少許乙醇至完全溶解,再加純化水至刻度,搖勻。分別取上清液 4,4,5,5,6,6 mL,置 10 mL 容量瓶中,加純化水至刻度搖勻,進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)
取水氯甲痤瘡凝膠劑1 g,精密稱定,用純化水溶解,過(guò)濾至100 mL容量瓶中,加純化水至刻度,搖勻,進(jìn)樣 20 μL測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)
水楊酸、氯霉素和甲硝唑的最大紫外吸收波長(zhǎng)分別為296,280和316 nm,由于處方中氯霉素的含量居中,故選擇280 nm作為測(cè)定波長(zhǎng),既保證氯霉素有最大吸收,同時(shí)也保證水楊酸和甲硝唑在此測(cè)定波長(zhǎng)處有較大吸收。
根據(jù)文獻(xiàn),考察了甲醇-水按不同的比例作流動(dòng)相系統(tǒng)[1-2],結(jié)果發(fā)現(xiàn)氯霉素和甲硝唑峰形較好,但水楊酸峰有拖尾現(xiàn)象,且分離度不好。經(jīng)過(guò)調(diào)整,用甲醇 -水 -冰醋酸(50∶50∶1.2)作流動(dòng)相系統(tǒng),水楊酸幾乎無(wú)拖尾現(xiàn)象,氯霉素和甲硝唑峰形無(wú)改變,輔料也無(wú)干擾。故選擇甲醇-水-冰醋酸(50∶50∶1.2)作流動(dòng)相系統(tǒng),水楊酸、氯霉素和甲硝唑的保留時(shí)間分別為 2.40,4.60,6.70 min,分離度好。方法學(xué)考察結(jié)果表明,該方法重復(fù)性好,且操作簡(jiǎn)便,可作為水氯甲痤瘡凝膠劑的含量測(cè)定方法。
[1]趙建穎.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方甲硝唑搽劑中甲硝唑和氯霉素含量[J].中國(guó)藥業(yè),2012,21(20):40 -42.
[2]左惠芳,張金成,趙 靜.HPLC法測(cè)定氯柳酊中氯霉素和水楊酸的含量[J].中國(guó)藥師,2008,11(7):869.