高效液相色譜法測(cè)定水氯甲痤瘡凝膠劑中3組分含量

李 容，舒德忠，徐道英，王柏桉，鄭維國(guó)

（重慶市涪陵中心醫(yī)院藥劑科，重慶 408000）

水氯甲痤瘡凝膠劑是由水楊酸、氯霉素和甲硝唑3組分為主藥，以新型的高分子藥用輔料卡波姆－940等為輔料制成的凝膠劑，是由我院曾使用的痤瘡Ⅰ號(hào)改進(jìn)而來(lái)。痤瘡Ⅰ號(hào)是由2%水楊酸、1%氯霉素和0.5%甲硝唑以75%乙醇為溶劑溶解配制而成的溶液劑，用于青少年痤瘡，臨床療效確切，不良反應(yīng)少，深受廣大痤瘡患者的喜愛(ài)，并產(chǎn)生了很大的經(jīng)濟(jì)效益。但其在皮膚表面滯留時(shí)間較短，藥物迅速?gòu)钠つw中清除，生物利用度低，對(duì)皮膚有刺激性，且溶液劑不便于使用和攜帶。卡波姆系水溶性凝膠，易于清除、清洗，是制備外用凝膠的理想輔料。為此，以2%水楊酸、1%氯霉素和0.5%甲硝唑?yàn)橹魉?，以卡波姆、甘油、薄荷腦、三乙醇胺、丙二醇和乙醇等為輔料制成凝膠劑。該產(chǎn)品均勻細(xì)膩，稠度適宜，易于涂展，對(duì)皮膚無(wú)刺激性，工藝簡(jiǎn)單，質(zhì)量可控。為確保該制劑的療效和質(zhì)量，采用高效液相色譜法不經(jīng)分離同時(shí)測(cè)定水氯甲痤瘡凝膠劑中主藥水楊酸、氯霉素和甲硝唑的含量[1－2]，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

UV－2401型紫外分光光度計(jì)（日本島津）；LC－20AT型高效液相色譜儀（日本島津），包括SPD－M20A型光電二極管陣列檢測(cè)器、CBM－20ALite系統(tǒng)控制器、CTO－10ASVP型柱溫箱；TG328B型電光分析天平（上海天平儀器廠）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科技有限公司）。水楊酸對(duì)照品（批號(hào)為100106），氯霉素對(duì)照品（含量 99.5%，批號(hào)為 130555），甲硝唑?qū)φ掌罚ㄅ?hào)100191），均來(lái)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；水楊酸原料藥（鎮(zhèn)江前進(jìn)化工有限公司，批號(hào)為120201）；氯霉素原料藥（南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)為CH111032）；甲硝唑原料藥（廣西河池化工醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)為101106）；甲醇（色譜醇，成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)為20120728），水為注射用水（四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為M12070708），其他試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 凝膠劑制備

按處方量稱取甘油和卡波姆，將卡波姆均勻撒于甘油表面，用玻棒輕輕攪拌浸潤(rùn)，加適量純化水，攪勻，放置過(guò)夜，溶脹即得基質(zhì)。將水楊酸、氯霉素和薄荷腦溶于處方量的乙醇和丙二醇中，將甲硝唑溶于80℃純化水中，把上述兩溶液分別加入溶脹好的卡波姆基質(zhì)中，攪拌均勻，加三乙醇胺調(diào)節(jié)pH至6～7，再加純化水使成100 g，攪拌均勻呈稠狀，即得水氯甲痤瘡凝膠劑。

2.2 溶液配制

精密稱取水楊酸對(duì)照品30 mg，置25 mL容量瓶中，用少量乙醇溶解，加純化水至25 mL，搖勻作水楊酸對(duì)照品貯備液；精密量取水楊酸對(duì)照品儲(chǔ)備液1.5 mL，置10 mL容量瓶中，加純化水至刻度，搖勻，即得含水楊酸180 μg／mL的對(duì)照品溶液。精密稱取氯霉素對(duì)照品15 mg，置25 mL容量瓶中，用少量乙醇溶解，加純化水至25 mL搖勻作氯霉素對(duì)照品貯備液；精密量取氯霉素對(duì)照品貯備液1.5 mL，置10 mL容量瓶中，加純化水至刻度，搖勻，即得含氯霉素 90 μg／mL的對(duì)照品溶液。精密稱取甲硝唑?qū)φ掌?.5 mg，置25 mL容量瓶中，用少量熱水溶解，加純化水至 25 mL搖勻作甲硝唑?qū)φ掌焚A備液。精密量取甲硝唑?qū)φ掌焚A備液1.5 mL，置10 mL量瓶中，加純化水至刻度，搖勻，即得含甲硝唑45 μg／mL的對(duì)照品溶液。取水氯甲痤瘡凝膠劑1 g，精密稱定，用純化水溶解，過(guò)濾至100 mL容量瓶中，加純化水至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按照水氯甲痤瘡凝膠劑處方制備不含水楊酸、氯霉素和甲硝唑的空白凝膠，按供試品溶液的制備方法操作，即得陰性對(duì)照品溶液。

2.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：VP － ODS C18柱（150 mm ×4.6 mm，4.6 μm）；流動(dòng)相：甲醇 － 水 － 冰醋酸（50 ∶50 ∶1.2）；流速：1.0 mL ／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。試驗(yàn)過(guò)程空調(diào)控溫在 25 ℃。在上述色譜條件下，將水楊酸、氯霉素和甲硝唑?qū)φ掌啡芤?、供試品溶液、陰性?duì)照品溶液分別進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。供試品和對(duì)照品溶液的色譜圖在相同的保留時(shí)間有一相同的色譜峰，而陰性對(duì)照品溶液在此保留時(shí)間處無(wú)干擾。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取水楊酸、氯霉素、甲硝唑?qū)φ掌焚A備液各 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，置 10 mL 容量瓶中，用純化水稀釋至刻度，搖勻。分別取上述各溶液平行進(jìn)樣3次，記錄峰面積。以峰面積對(duì)質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果

精密度試驗(yàn)：取線性關(guān)系考察項(xiàng)下水楊酸、氯霉素和甲硝唑各1個(gè)質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，分別在不同時(shí)間測(cè)定5次。結(jié)果的 RSD分別為2.70%，2.50%，1.13%，表明該方法精密度較好。

重復(fù)性試驗(yàn)：分別精密稱取同一批樣品適量，共6份，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果水楊酸、氯霉素和甲硝唑平均含量占標(biāo)示量的 102.44%，101.49%和 101.63%，RSD分別為0.95% ，0.79% 和 0.78% ，表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8 h 時(shí)測(cè)定。結(jié)果水楊酸、氯霉素和甲硝唑的 RSD分別為1.23%，0.95%和0.87%（n＝5），表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：按處方比例精密稱定水楊酸對(duì)照品20.02 mg、氯霉素對(duì)照品9.86 mg、甲硝唑?qū)φ掌?.03 mg，置 50 mL容量瓶中，加少許乙醇至完全溶解，再加純化水至刻度，搖勻。分別取上清液 4，4，5，5，6，6 mL，置 10 mL 容量瓶中，加純化水至刻度搖勻，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.5 樣品含量測(cè)定

取水氯甲痤瘡凝膠劑1 g，精密稱定，用純化水溶解，過(guò)濾至100 mL容量瓶中，加純化水至刻度，搖勻，進(jìn)樣 20 μL測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

3 討論

水楊酸、氯霉素和甲硝唑的最大紫外吸收波長(zhǎng)分別為296，280和316 nm，由于處方中氯霉素的含量居中，故選擇280 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)，既保證氯霉素有最大吸收，同時(shí)也保證水楊酸和甲硝唑在此測(cè)定波長(zhǎng)處有較大吸收。

根據(jù)文獻(xiàn)，考察了甲醇－水按不同的比例作流動(dòng)相系統(tǒng)[1－2]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)氯霉素和甲硝唑峰形較好，但水楊酸峰有拖尾現(xiàn)象，且分離度不好。經(jīng)過(guò)調(diào)整，用甲醇 －水 －冰醋酸（50∶50∶1.2）作流動(dòng)相系統(tǒng)，水楊酸幾乎無(wú)拖尾現(xiàn)象，氯霉素和甲硝唑峰形無(wú)改變，輔料也無(wú)干擾。故選擇甲醇－水－冰醋酸（50∶50∶1.2）作流動(dòng)相系統(tǒng)，水楊酸、氯霉素和甲硝唑的保留時(shí)間分別為 2.40，4.60，6.70 min，分離度好。方法學(xué)考察結(jié)果表明，該方法重復(fù)性好，且操作簡(jiǎn)便，可作為水氯甲痤瘡凝膠劑的含量測(cè)定方法。

[1]趙建穎.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方甲硝唑搽劑中甲硝唑和氯霉素含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2012，21（20）：40 －42.

[2]左惠芳，張金成，趙 靜.HPLC法測(cè)定氯柳酊中氯霉素和水楊酸的含量[J].中國(guó)藥師，2008，11（7）：869.