奧拉西坦對(duì)奧美拉唑在健康志愿者體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響

杜 杰，張志清，楊秀嶺，劉秀菊，肖若璇

(1.河北省邢臺(tái)市人民醫(yī)院藥劑科，邢臺(tái) 054016；2.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院藥學(xué)部，石家莊 050000；3.西北農(nóng)林科技大學(xué)2011級(jí)本科生，西安 712100)

奧美拉唑?yàn)橘|(zhì)子泵抑制劑，能顯著抑制H+，K+-ATP酶，阻斷胃酸分泌，從而減少潰瘍創(chuàng)面擴(kuò)大，促進(jìn)黏膜組織再生，是一種新型、強(qiáng)效的抗?jié)兯帲R床主要用于十二指腸潰瘍、胃潰瘍、卓-艾綜合征和反流性食管炎[1]。目前，奧美拉唑作為一種主要的質(zhì)子泵抑制劑還被廣泛應(yīng)用于腦外傷、卒中、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染等疾病，以達(dá)到預(yù)防應(yīng)激性潰瘍的目的。奧拉西坦是新一代腦代謝改善藥，屬于γ-氨基丁酸(GABA)的環(huán)形衍生物。本品可促進(jìn)磷酰膽堿和磷酰乙醇胺的合成，提高大腦中三磷腺苷(ATP)/二磷腺苷(ADP)的比值，使大腦中蛋白質(zhì)和核酸的合成增加，主要用于治療腦損傷引起的記憶與智能障礙、老年性癡呆和神經(jīng)功能缺失等疾病[1]?；趦伤幍乃幚碜饔茫谀X外傷、卒中、細(xì)菌性或病毒性腦炎、一氧化碳中毒等疾病的治療中，奧美拉唑和奧拉西坦存在聯(lián)合用藥的指征。但奧拉西坦是否會(huì)對(duì)奧美拉唑的體內(nèi)代謝產(chǎn)生影響，目前尚無(wú)人體試驗(yàn)的研究資料。本研究采用HPLC法測(cè)定奧美拉唑血藥濃度，考察奧拉西坦是否對(duì)奧美拉唑在健康志愿者體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)產(chǎn)生影響，為兩者聯(lián)合用藥的安全性評(píng)價(jià)提供理論依據(jù)。

1 材 料

1.1 儀器 Waters 高效液相色譜系統(tǒng)，包括515色譜泵、486紫外檢測(cè)器、Empower Application 色譜工作站(美國(guó)Waters公司)；Diamonsil C18色譜柱(濟(jì)南賽暢科學(xué)儀器有限公司)；GL-20G-Ⅱ 冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；XW-80A渦旋混合器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠)； HZ F-B1200萬(wàn)分之一電子天平(美國(guó)康州HZ電子有限公司)；CPA225D電子分析天平(德國(guó)Sartorius公司)；KL512J數(shù)控恒溫水浴氮吹儀(北京康林科技有限公司)；AP-01抽濾器(天津市協(xié)同儀器有限公司)；KQ-300B超聲清洗器(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 藥品和試劑 奧美拉唑腸溶膠囊(規(guī)格：20 mg/粒，產(chǎn)品批號(hào)ME 9000，分裝批號(hào)1008075)、奧美拉唑?qū)φ掌?含量99.60%，批號(hào)73139E09，阿斯利康制藥有限公司)；卡馬西平對(duì)照品(含量100.0%，批號(hào)H1426，北京諾華制藥有限公司)；奧拉西坦膠囊(規(guī)格：0.4 g/片，批號(hào)128101207，石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)公司)；乙腈(色譜純)、甲醇(色譜純)、二氯甲烷(分析純，天津市康科德科技有限公司)。

1.3 試驗(yàn)對(duì)象 本試驗(yàn)經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院藥物臨床試驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。選擇10例健康志愿者，年齡(21±1)歲，體重(63±5) kg。志愿者均不過(guò)量吸煙、飲酒，試驗(yàn)前2周未用任何藥物。試驗(yàn)前向志愿者說(shuō)明試驗(yàn)方案、藥物特性及可能出現(xiàn)的藥物不良反應(yīng)(ADRs)，志愿者簽署知情同意書(shū)。試驗(yàn)前、后均進(jìn)行常規(guī)體檢，血液生化檢查，以及心、肝、腎功能檢查。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5.0 μm)，柱溫：25 ℃，流動(dòng)相：乙腈-水(45∶55)，流速：1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：302 nm，進(jìn)樣量：20 μl，以卡馬西平為內(nèi)標(biāo)。

2.2 溶液的配制 (1)奧美拉唑?qū)φ掌啡芤海壕芊Q(chēng)取奧美拉唑?qū)φ掌芳s10 mg，置50 ml棕色量瓶中，加0.01 mol/L NaOH溶液9 ml溶解，用蒸餾水定容，配制成濃度約為200 μg/ml的奧美拉唑?qū)φ掌穬?chǔ)備液，4 ℃避光保存。精密量取儲(chǔ)備液5 ml置100 ml棕色量瓶中，用蒸餾水定容，得到10 μg/ml的奧美拉唑?qū)φ掌啡芤骸?2)卡馬西平對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取卡馬西平對(duì)照品約10 mg，置100 ml棕色量瓶中，用蒸餾水定容，得100 μg/ml的卡馬西平對(duì)照品儲(chǔ)備液，4 ℃保存。取儲(chǔ)備液適量，用蒸餾水稀釋成4和2 μg/ml的卡馬西平對(duì)照品溶液作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3 給藥方案及血樣采集 10例男性健康志愿者隨機(jī)分為2 組，每組5 人。試驗(yàn)組口服奧拉西坦膠囊0.8 g/次，對(duì)照組口服空膠囊，bid，連續(xù)服用6 d。志愿者于第6天20：00禁食，第7天8：00口服奧美拉唑腸溶膠囊40 mg，用100 ml溫開(kāi)水送服。服藥2 h后可飲水，4 h后可進(jìn)食低脂、低蛋白標(biāo)準(zhǔn)餐。志愿者于服藥前及服藥后0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、10、12 h取前臂靜脈血3 ml，置5 ml棕色具塞玻璃試管中，用肝素鈉抗凝，201.24×g離心10 min。取血漿1 ml置具塞試管中，-40 ℃避光保存。經(jīng)2周洗脫期后，試驗(yàn)組和對(duì)照組交叉用藥。試驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)照組和試驗(yàn)組各有1 例志愿者分別由于發(fā)熱和服用大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物退出試驗(yàn)。

2.4 血漿樣品預(yù)處理 冷凍血漿在室溫下自然解凍，2.236×103×g離心5 min，取上清液0.5 ml，加磷酸鹽緩沖液(pH=7.83)100 μl，加4 μg/ml內(nèi)標(biāo)溶液50 μl，混勻后加二氯甲烷5 ml，渦旋振蕩1 min，201.24×g離心5 min，棄去上清液，取二氯甲烷層，在40 ℃水浴中以氮?dú)饬鞔蹈蒣2]。用100 μl甲醇溶解殘?jiān)?，混勻，作為供試品溶液?/p>

2.5 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn) 取空白血漿、奧美拉唑?qū)φ掌啡芤骸? μg/ml內(nèi)標(biāo)溶液以及血漿樣品處理液，分別按2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，得到色譜圖見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，奧美拉唑和卡馬西平的保留時(shí)間分別約為5.9和7.6 min，峰形良好，血漿內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾測(cè)定。配制濃度約1 μg/ml的奧美拉唑?qū)φ掌啡芤?，倍比稀釋后進(jìn)行測(cè)定，直至S/N≥10，測(cè)得該方法的最低定量限為0.005 μg/ml。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制 精密吸取2.2項(xiàng)的奧美拉唑?qū)φ掌啡芤哼m量，加入空白血漿中，得到奧美拉唑系列濃度為0.01、0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)工作液，按2.4項(xiàng)下方法預(yù)處理后進(jìn)樣測(cè)定。以?shī)W美拉唑與卡馬西平的峰面積比值(Y)對(duì)血藥濃度(X)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程：Y=3.221X-0.015(r=0.999 9)，表明奧美拉唑血漿濃度在0.01～3.00 μg/ml范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

圖1 奧美拉唑的HPLC譜圖

2.7 回收率和精密度實(shí)驗(yàn) 取空白血漿15 份，分為3 組，每組5 份，分別加入適量奧美拉唑?qū)φ掌啡芤海苽涞?、中、高濃?0.05、0.25、2.00 μg/ml)血漿樣品，按2.4項(xiàng)操作預(yù)處理，得到血漿樣品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。提取回收率=血漿樣品溶液的峰面積/等濃度的奧美拉唑?qū)φ掌啡芤悍迕娣e×100%。方法回收率=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程計(jì)算的實(shí)際濃度/加入的理論濃度×100%。在同1 d內(nèi)測(cè)定5 次，計(jì)算奧美拉唑的日內(nèi)精密度；每天測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定5 d，計(jì)算日間精密度，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 奧美拉唑的回收率和精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Table 1 Results of recovery and precision tests of omeprazole

表1 奧美拉唑的回收率和精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

(ρB/μg·ml-1)RSDRSD0．05 78．63±3．84 98．97±2．07 2．79 4．140．25 82．61±1．88 99．48±2．14 5．37 3．952．00 74．54±1．93 92．67±1．10 1．00 2．47

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取空白血漿，加入奧美拉唑?qū)φ掌啡芤哼m量，制備濃度為0.25 μg/ml的血漿樣品共17 份，按2.4項(xiàng)操作預(yù)處理，得到血漿樣品溶液，即刻進(jìn)樣測(cè)定。取5份血漿樣品在室溫放置1、2、3、4 h各測(cè)定1 次，考察血漿樣品在室溫下的穩(wěn)定性，計(jì)算得到RSD=3.87%(n=5)。取6份血漿樣品于-40 ℃避光保存4 d后測(cè)定濃度，計(jì)算得到RSD=2.10%(n=6)。取6份血漿樣品反復(fù)凍融3 次后測(cè)定濃度，計(jì)算得到RSD=2.59%(n=6)。

2.9 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)和藥-時(shí)曲線(xiàn) 根據(jù)對(duì)照組和試驗(yàn)組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度繪制藥-時(shí)曲線(xiàn)，見(jiàn)圖2。采用DAS 2.1.1藥動(dòng)學(xué)軟件處理相關(guān)數(shù)據(jù)，自動(dòng)擬合統(tǒng)計(jì)距，得到主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表2。采用SPSS 13.1統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件比較藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的組間差異。對(duì)tmax、cmax、t1/2、AUC0～t和AUC0～∞分別進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，結(jié)果均符合正態(tài)分布。采用兩個(gè)獨(dú)立樣本的配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，結(jié)果P值均>0.05。由此可以推斷，健康志愿者服用奧拉西坦對(duì)奧美拉唑的藥動(dòng)學(xué)沒(méi)有顯著性影響。

圖2 健康志愿者單劑量口服40 mg奧美拉唑膠囊后的平均血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)

表2健康志愿者單劑量口服40mg奧美拉唑膠囊后的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

Table2Mainpharmacokineticparametersofomeprazoleafterasingleoraldoseof40mgomeprazolecapsulesinhealthyvolunteers

tmax(t/h)cmax(ρB/μg·ml-1)t1/2(t/h)AUC0～t(A/mg·min·L-1)AUC0～∞(A/mg·min·L-1)2．31±1．10 1．14±0．77 1．50±0．83 3．32±3．08 3．33±3．232．00±0．85 1．32±0．60 1．66±0．69 3．69±3．15 3．79±3．29

3 討 論

健康志愿者口服奧拉西坦后再服用奧美拉唑，對(duì)奧美拉唑的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)無(wú)顯著性影響。結(jié)果提示，在兩藥聯(lián)合使用過(guò)程中無(wú)需調(diào)整藥物劑量，為臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)。本研究結(jié)果與大鼠體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不符[3]，其原因可能為種屬差異，具體原因有待進(jìn)一步的研究證實(shí)。奧美拉唑經(jīng)肝臟P450酶系催化代謝，其主要的代謝途徑為經(jīng)CYP2C19酶代謝生成5-羥基-奧美拉唑，再經(jīng)CYP3A4代謝生成5-羥基-磺基-奧美拉唑。CYP2C19酶活性是奧美拉唑藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)的重要影響因素[4]。本研究還可以間接證明，在人體內(nèi)奧拉西坦對(duì)CYP2C19酶沒(méi)有明顯的促進(jìn)或抑制作用。奧美拉唑的血藥濃度個(gè)體間差異較大，原因是志愿者中存在CYP2C19基因表型多態(tài)性[5]。奧美拉唑在堿性條件下穩(wěn)定，故本研究配制奧美拉唑?qū)φ掌穬?chǔ)備液時(shí)，以0.01 mol/L的NaOH溶液溶解，既可以增大奧美拉唑的溶解度，又可以增加其穩(wěn)定性。奧美拉唑?yàn)楸讲⑦溥蝾?lèi)衍生物，見(jiàn)光不穩(wěn)定，易分解[6]。因此血漿樣品應(yīng)置于棕色具塞試管中，保存在自制避光盒內(nèi)，處理和測(cè)定過(guò)程均要求嚴(yán)格避光。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采取上述避光措施，基本可滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求。

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