• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      同時(shí)提取五味子色素、多糖和木脂素的研究

      2014-08-03 08:59:04趙鎮(zhèn)雷馮詠梅常秀蓮
      關(guān)鍵詞:木脂素五味子水溶液

      王 東,徐 菡,趙鎮(zhèn)雷,馮詠梅,常秀蓮,周 紅

      (1. 煙臺(tái)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,山東 煙臺(tái) 264005;2. 青島鵬遠(yuǎn)康華天然產(chǎn)物有限公司,山東 萊西 266612)

      五味子(SchisandrachinensisBaill.)又名山花椒,因其果實(shí)具有甘、苦、酸、辛、咸而得名[1].五味子是雙子葉植物門、木蘭亞綱、八角目、五味子科植物[2],根據(jù)五味子醇甲和五味子酯甲的含量,五味子又分北五味子屬(Schisandra)和南五味子屬(Kadsura)2個(gè)屬,北五味子(Schisandrachinensis(Turcz.) Baill.)的特征成分為五味子醇甲,其含量不少于0.4%,南五味子又名華中五味子特征成分為五味子酯甲,其含量不少于3.0%[3].

      五味子含有木脂素、有機(jī)酸、維生素、色素、揮發(fā)油及多糖等多種成分[4-6],自從1970年發(fā)現(xiàn)它具保肝降酶作用以來,研究還發(fā)現(xiàn)其具有抗癌、抗?jié)?、?zhèn)靜、抗艾滋病毒、拮抗血小板活化因子和抑制醛糖還原酶等多種活性[7].五味子作為一種新型的“藥食同源”功能性保健食品,應(yīng)用范圍愈來愈廣,其果實(shí)已成為新興食品工業(yè)的一種重要原料.但目前的研究多數(shù)僅限于對(duì)其中一種成分的研究,缺少對(duì)五味子多種活性成分的綜合提取研究,造成五味子資源的浪費(fèi).因此如何提高五味子資源的利用率,綜合利用五味子資源是目前亟待解決的問題之一.

      1 料料與方法

      1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

      Agilent 1200高效液相色譜儀,美國安捷倫公司;RE52CS-2旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,上海亞榮生化儀器廠;752S紫外可見分光光度計(jì),上海棱光技術(shù)有限公司;TU-1900雙光束紫外可見分光光度計(jì),北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;DL-5型低速大容量離心機(jī),上海安亭科學(xué)儀器廠.

      1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

      五味子果實(shí),吉林鵬遠(yuǎn)生物科技有限公司提供;葡萄皮色素,青島鵬遠(yuǎn)康華天然產(chǎn)物有限公司提供;五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)品,上海順勃生物制藥公司;甲醇,色譜純;其他試劑為分析純;SP207樹脂,日本三菱化學(xué)樹脂,北京慧德易科技有限責(zé)任公司供應(yīng).

      1.3 分析方法

      1.3.1 木脂素含量的測(cè)定 采用高效液相色譜法測(cè)定五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素的含量.木脂素含量以上述六種木脂素含量之和來計(jì)算[8].

      1.3.2 多糖含量的測(cè)定 采用苯酚-硫酸法[9].

      1.3.3 花青素含量的測(cè)定 采用示差法[10],按矢車菊-3-葡萄糖苷來計(jì)算.

      1.3.4 色價(jià)測(cè)定 通過測(cè)定吸光度值來計(jì)算[11].

      1.4 實(shí)驗(yàn)方法

      1.4.1 樣品預(yù)處理 將五味子果實(shí)于40 ℃下烘干,粉碎,粒度為40~60目.

      1.4.2 提取流程 2種同時(shí)提取五味子木脂素、色素和多糖的實(shí)驗(yàn)流程,見圖1、圖2.

      圖1 同時(shí)提取色素、多糖和木脂素流程Ⅰ

      圖2 同時(shí)提取色素、多糖和木脂素流程Ⅱ

      1.4.3 五味子色素和多糖的提取 稱取上述五味子粉末50 g,加入10倍體積的蒸餾水,于80 ℃水浴中攪拌提取2 h.離心后的殘?jiān)貜?fù)提取5次,測(cè)定每次提取的多糖和色素的含量,計(jì)算多糖的提取率.

      1.4.4 大孔樹脂吸附分離色素和多糖 經(jīng)過預(yù)處理的SP207樹脂采用排水法裝柱.由1.4.2項(xiàng)圖2得到的色素粗提液,以1 BV/h的流速上柱,待樹脂吸附飽和,將流出液濃縮、醇沉,用于提取多糖.

      當(dāng)樹脂吸附飽和后,先用蒸餾水洗柱去除雜質(zhì),直到流出液澄清.然后用含有0.3%檸檬酸的70%乙醇水溶液(1 BV/h)洗脫,收集洗脫液.收集洗脫液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行濃縮,然后60 ℃干燥,稱重,計(jì)算色素的得率.

      1.4.5 正交試驗(yàn)優(yōu)化回流提取五味子木脂素 取提取完色素和多糖的五味子干渣20 g,9份,按1∶10的固體和乙醇水溶液料液比加入乙醇水溶液,乙酸乙酯和乳化劑EM的加入量均按占乙醇水溶液的體積百分比計(jì)算.設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn),如表1所示.表1中,A指乙醇水溶液的濃度,B、C分別指加入的乙酸乙酯、EM與乙醇水溶液的體積百分比.超聲30 min,回流提取2次,每次2 h.將上清液混合、濃縮至浸膏,以原溶液1/2體積蒸餾水溶解,分別用HPLC法和分光光度法測(cè)溶液木脂素含量和透光率.

      表1 試驗(yàn)因素水平表

      2 結(jié)果與分析

      2.1 同時(shí)提取色素、多糖和木脂素實(shí)驗(yàn)流程優(yōu)化

      采用圖1和圖2所示的實(shí)驗(yàn)流程同時(shí)提取木脂素、色素和多糖,2種流程的結(jié)果比較如表2所示.

      表2 2種流程的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

      如表2所示,流程Ⅰ的木脂素雖然提取率高于流程Ⅱ,但得率低;流程Ⅱ的色素得率也高于流程Ⅰ.實(shí)驗(yàn)流程Ⅰ提取液中含有大量的色素等雜質(zhì),在樹脂純化之前,先去除提取液中的乙醇,加入少量的水進(jìn)行混合,然后用乙酸乙酯萃取,得到的下相是含有大量色素的水相,上相乙酸乙酯相是主要含有木脂素和少量色素,基本上將色素和木脂素進(jìn)行了有效的分離,但與實(shí)驗(yàn)流程Ⅱ相比,流程Ⅰ比較復(fù)雜,增加了乙酸乙酯的萃取步驟,而且乙酸乙酯相中仍然含有少量的色素;流程Ⅱ先采用熱水提取法,將色素和多糖分離出去,剩余的殘?jiān)兄饕心局兀@樣提取的木脂素純度得到提高,木脂素是3種目標(biāo)產(chǎn)品中最有價(jià)值的,因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)均采用方案Ⅱ.

      2.2 五味子色素和多糖提取

      綜合考慮到五味子色素的穩(wěn)定性和多糖的提取率,前期實(shí)驗(yàn)得到適宜的提取溫度為80 ℃,研究提取次數(shù)對(duì)五味子多糖和色素提取率的影響.以提取次數(shù)為橫坐標(biāo),多糖提取率和色素在520 nm處的吸光度值為縱坐標(biāo),得出多糖提取率和色素量隨提取次數(shù)的變化曲線,如圖3所示.

      圖3 提取次數(shù)對(duì)五味子多糖和色素提取率的影響

      從圖3可以看出,隨著提取次數(shù)的增加,五味子色素和多糖的提取率越來越低.當(dāng)提取次數(shù)超過3次時(shí),多糖的提取率和色素的含量變化不顯著.前3次多糖的提取率為89.47%,色素的提取率為85.45%,考慮到實(shí)際應(yīng)用的生產(chǎn)成本和工作量,水法提取五味子色素和多糖的最佳提取次數(shù)為3次.

      2.3 SP207樹脂分離多糖和色素

      將色素和多糖的提取液上SP207樹脂柱,多糖不被吸附,流出柱子,色素被吸附并得到純化.當(dāng)上料液體積達(dá)到120個(gè)柱體積時(shí),色素樹脂吸附飽和.真空濃縮流出液,用4倍體積的95%乙醇醇沉得到粗多糖沉淀,無水乙醇洗滌3次后干燥,得粗多糖8.2 g,粗多糖得率8.2%,和多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道的最佳提取條件(100 ℃提取多糖的得率11.3%)接近[12].

      五味子含有大量有機(jī)酸,pH值約為3.0,提取5次后pH值仍為3.0~3.2,說明五味子在此pH下緩沖能力很好,可采用水法直接提取色素和多糖,不需要調(diào)節(jié)pH.此法成本低,無毒、無污染,產(chǎn)品后處理簡單,提取率高,可用于工業(yè)生產(chǎn).

      當(dāng)洗脫液為2個(gè)柱體積時(shí),大部分色素被洗脫下來.洗脫液真空濃縮,60 ℃烘干后得到色素3 g,得率3%,色價(jià)2.87,花青素為2.75mg/g,干燥物粘稠,色價(jià)和花青素含量較低,可能色素吸附后,用水清洗不充分,使糖類的殘留量高.考慮到色素收率較低,工業(yè)化生產(chǎn)不建議從五味子中提取色素.

      2.4 從渣子中提取五味子木脂素

      文獻(xiàn)[13]中優(yōu)化的乙醇和乳化劑EM聯(lián)合提取木脂素的方法得到的粗提液比較混濁,長時(shí)間放置,溶液有沉淀產(chǎn)生,采用乙酸乙酯進(jìn)行二次萃取純化雖然可以改善溶液的澄清度,但過程比較麻煩,而且木脂素?fù)p失較大.因此嘗試在提取過程中加入乙酸乙酯進(jìn)行提取,以木脂素含量和透光率為指標(biāo)考察溶劑組成對(duì)木脂素提取效果的影響,結(jié)果見表3.

      表3 正交試驗(yàn)結(jié)果表

      由表3透光率極差值大小可知,各因素作用主次為A>B>C,最佳溶劑配比為A3B1C2,即乙醇水溶液濃度為80%,乙酸乙酯和EM的加入量分別為乙醇水溶液體積的10%和2%.由木脂素含量極差值大小可知,各因素作用主次為A>B>C,最佳溶劑配比為A1B2C3,即:乙醇水溶液濃度為60%,乙酸乙酯和EM的加入量分別為乙醇水溶液體積的10%和3%.可見,以提取液透光率和木脂素含量為指標(biāo)得出的最佳條件不一致,所以在上述2個(gè)最佳提取條件下,補(bǔ)充實(shí)驗(yàn),提取五味子木脂素,測(cè)定樣液的木脂素含量和透光率,結(jié)果見表4.

      表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

      由表4可知,透光率高的試驗(yàn)組五味子木脂素含量也高,說明溶液的澄清度對(duì)五味子木脂素含量的測(cè)定有影響.通過表4的分析結(jié)果,發(fā)現(xiàn)各因素對(duì)五味子木脂素含量無顯著影響,因此可忽略其影響效果,只考察溶液透光率的影響.通過觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象,發(fā)現(xiàn)提取液放置一段時(shí)間后,實(shí)驗(yàn)組1~3出現(xiàn)沉淀,說明其乳化效果不佳.而用液相色譜法測(cè)定木脂素含量時(shí),樣液必須用0.45 μm濾膜過濾,沉淀的木脂素不能透過濾膜,對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響.

      綜合以上結(jié)果,采用第4組實(shí)驗(yàn)結(jié)果提取五味子木脂素,即乙醇水溶液濃度為80%、乙酸乙酯和EM的加入量分別為乙醇水溶液體積的10%和2%時(shí),粗提液比較澄清,穩(wěn)定性較好,無沉淀,木脂素含量高,有利于進(jìn)一步純化五味子木脂素.

      3 結(jié) 論

      (1)建立了同時(shí)提取五味子多糖和木脂素的最佳工藝流程:

      五味子—粉碎—水提多糖和色素—樹脂吸附脫色—多糖不被吸附—濃縮酒精沉淀—多糖;

      渣子—溶劑提取木脂素—樹脂純化—木脂素.

      (2)從五味子中提取天然色素,工業(yè)化生產(chǎn)意義不大.

      (3)多種溶劑混合的回流提取法提取五味子木脂素的最佳溶劑組成為:乙醇水溶液濃度為80%,乙酸乙酯和乳化劑EM的加入量分別為乙醇水溶液體積的10%和2%.

      參考文獻(xiàn):

      [1]張?zhí)m杰, 張維華, 趙珊紅. 北五味子果實(shí)中多糖的提取與純化研究[J]. 鞍山師范學(xué)院學(xué)報(bào), 2002, 4(1): 58-60.

      [2]中國科學(xué)院華南植物研究所. 海南植物志(第一卷)[M].北京:科學(xué)出版社, 1964: 232.

      [3]Zhao Yangyun. Berryfruit: Value-added products for health promotion[M]. CRC Press: Boca Raton, 2007.

      [4]王慕鄒. 常用中草藥高效液相色譜分析[M]. 北京:科學(xué)出版社, 1999: 55-56.

      [5]倪立東, 陳延西. 五味子藥理作用研究概況[J]. 暨南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版, 1996, 17(2): 125-128.

      [6]劉國宇, 陳旭. 五味子木脂素類化學(xué)成分及其含量分析方法的研究現(xiàn)狀[J]. 黑龍江醫(yī)藥, 2010, 3(2): 228-230.

      [7]鄭占虎, 董澤宏,佘靖,等. 中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用[M]. 北京:學(xué)苑出版社, 1997: 148-156.

      [8]Lu Yan, Chen Daofeng. Analysis of Schisandra chinensis and Schisandra sphenanthera[J]. Journal of Chromatography A, 2009, 1216: 1980-1990.

      [9]Dubois M, Gilles K A, Hamilton J K, et al. Colorimetric method for determination of sugars and related substancesm[J]. Analytical Chemistry, 1956, 28: 350-356.

      [10]Lee J, Durst R W, Wrolstad R E. Determination of total monomeric anthocyanin pigment content of fruit juices, beverages, natural colorants, and wines by the pH differential method: Collaborative study[J]. Journal of AOAC international, 2005, 88(5): 1269-1278.

      [11]王清濱, 陳國良. 食品著色劑及其分析方法[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2004: 211-214.

      [12]范榮軍, 任濤, 劉成柏, 等. 五味子多糖提取工藝的比較研究[J]. 中成藥, 2008, 30(6): 827-831.

      [13]陳碧云,王東,常秀蓮,等.乳化劑輔助提取五味子木脂素的研究[J].食品科技,2011,36(9):247-250.

      猜你喜歡
      木脂素五味子水溶液
      木莢紅豆葉中1個(gè)新的木脂素
      中草藥(2022年3期)2022-02-14 03:16:50
      HPLC-DAD法快速篩查五味子顆粒(糖漿)中南五味子代替五味子
      中成藥(2018年12期)2018-12-29 12:26:02
      五味子醇甲提取純化方法的研究進(jìn)展
      中成藥(2017年3期)2017-05-17 06:09:06
      北五味子化學(xué)成分的研究
      中成藥(2017年3期)2017-05-17 06:09:01
      DMAC水溶液乙酸吸附分離過程
      聚焦水溶液中的三大守恒關(guān)系
      TEA水溶液的流變性研究
      木脂素生物學(xué)特性及分離提取研究進(jìn)展
      HPLC法同時(shí)測(cè)定五酯膠囊中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的含量
      添加酸對(duì)HPP-SO2水溶液熱解吸的影響
      万源市| 永春县| 古浪县| 沈阳市| 梅河口市| 南雄市| 庄浪县| 民和| 宜都市| 江孜县| 五大连池市| 澄迈县| 丰顺县| 汶川县| 绥棱县| 军事| 龙里县| 宜都市| 澎湖县| 毕节市| 封开县| 济阳县| 东海县| 湘西| 英山县| 濮阳市| 和顺县| 青海省| 资源县| 涿州市| 渝北区| 昌图县| 安化县| 阜平县| 长海县| 南澳县| 林芝县| 平安县| 阿图什市| 宁海县| 璧山县|