微波提取高效液相色譜法測定花菜中的VC

吳海燕

（1.南通農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇南通226000；2.南通市農(nóng)副產(chǎn)品加工技術(shù)協(xié)會，江蘇南通226000）

微波提取高效液相色譜法測定花菜中的VC

吳海燕1，2

（1.南通農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇南通226000；2.南通市農(nóng)副產(chǎn)品加工技術(shù)協(xié)會，江蘇南通226000）

研究微波輔助提取，反相高效液相色譜測定花菜中VC含量的方法?；ú藙驖{后，以1%草酸溶液為提取溶劑，微波提取、固相萃取小柱凈化后，采用恒流的方法進行液相色譜定量檢測，以0.1%草酸溶液為流動相，流速1.0mL/min，采用C-18反相色譜柱分離，在254 nm波長下檢測。結(jié)果表明VC濃度在0.02mg/mL~0.12mg/mL范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 6，檢測限0.02mg/kg，回收率在99.9%~104.6%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.20%。該方法能有效提取蔬菜中Vc，測定結(jié)果穩(wěn)定，準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，可以用于蔬菜中VC的檢測。

微波提取；高效液相色譜法；花菜；VC

VC又名抗壞血酸，是人體正常生理代謝不可缺少的一類有機化合物，人體自身不能合成，必須依靠膳食供給。VC廣泛存在于新鮮的水果、蔬菜中[1]。

花菜是十字花科蕓薹屬植物，營養(yǎng)豐富，富含膳食纖維、維生素等。根據(jù)研究，花菜中含有豐富的VC，長期食用，能提高人體免疫功能，促進肝臟解毒；同時也能起到阻止癌前病變細(xì)胞形成的作用，預(yù)防癌癥[2]。

VC含量測定方法常以氧化還原為基礎(chǔ)的比色法或衍生反應(yīng)為基礎(chǔ)的熒光法[3]，如2，6-二氯靛酚不適應(yīng)于深色樣品；熒光分析法所需試劑多而且操作復(fù)雜；而且VC有較強的還原作用，在樣品處理時容易使樣品中的VC損失，從而影響測定的準(zhǔn)確度和精確度。

近年來用高效液相色譜法測定VC含量已有一些報道[4-6]，但是在樣品制備過程中存在提取率低，操作繁瑣，萃取劑用量大等問題。微波提取法，與傳統(tǒng)的提取法相比，其最大優(yōu)點是提取的產(chǎn)品雜質(zhì)含量低、有效成分高且提取效率高[7]，這種新的微波提取技術(shù)已逐漸應(yīng)用于天然植物有效成分、生物活性成分的提取研究中[8-10]。利用微波輔助提取能保護VC不受氧化，高效液相色譜法具有高效、穩(wěn)定、可靠等特點，能快速準(zhǔn)確測定VC的含量。

本文建立了微波提取、反相高效液相色譜測定花菜中VC的含量的方法，為花菜的VC的含量測定提供實驗資料。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與材料

花菜：市售。

甲醇（色譜純），VC、草酸等試劑均為國產(chǎn)分析純，所有試驗用水均為超純水；0.45μm濾膜：國藥集團化學(xué)試劑有限公司。

1.2 主要儀器與設(shè)備

Waters高效液相色譜儀，Waters1525泵，Waters 2487雙通道紫外檢測器；Breeze色譜系統(tǒng)管理工作站，色譜柱：Symetry—C18柱（100mm×4.6mm，5.0μm）；液相平頭微量進樣器（25μL）Eppendorf；HR2084食品制樣器：飛利浦；CW-2000A型超聲-微波協(xié)同萃取儀：上海新拓分析儀器科技有限公司；Millipore超純水機；隔膜真空泵：天津市騰達過濾器件廠；TU-1901紫外可見分光光度計：北京通用普析儀器有限責(zé)任公司；KQ3200超聲脫氣機：昆山市超聲儀器有限公司。

2 方法

2.1 色譜條件

Symetry—C18反相色譜柱（100 mm×4.6 mm，5.0μm），檢測波長：254 nm，流動相：0.1%（體積分?jǐn)?shù)）的草酸溶液，流速：1mL/min，進樣量25μL，柱溫25℃；以保留時間定性，待液相色譜穩(wěn)定后進樣分析，以峰面積外標(biāo)法定量。

2.2 樣品處理

將100mL的2%草酸溶液放入食品制樣器中，稱取100 g花菜樣品迅速切碎后放入食品制樣器中，制成勻漿。準(zhǔn)確稱取5.00g勻漿樣品，以1%草酸30mL為萃取溶劑，微波功率設(shè)為200W，萃取時間為15min，萃取溫度設(shè)定為45℃，平行萃取2次[6]。萃取液過濾后，用1%草酸溶液定容至50mL棕色容量瓶中，制成待測液。待測液用0.45μm濾膜過濾后按2.1色譜條件進行HPLC測定。

2.3 線性關(guān)系分析

VC標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：準(zhǔn)確稱取VC對照品20.0mg，用0.1%的草酸溶解，轉(zhuǎn)移至100mL棕色容量瓶中，定容，制成VC標(biāo)準(zhǔn)儲備液。再分別準(zhǔn)確量取1、2、3、4、5、6mLVC標(biāo)準(zhǔn)儲備液于10mL棕色容量瓶中，用0.1%的草酸溶解定容，制成濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12mg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)VC標(biāo)準(zhǔn)溶液，溶液用0.45μm濾膜過濾后按2.1色譜條件進行HPLC測定。每個濃度進樣3次，以平均峰面積積分值，對進樣濃度（mg/mL）進行直線回歸。

2.4 精密度試驗

取所制得樣品，按照2.1的色譜條件重復(fù)進樣6次，測定檢測方法的精密度。

2.5 回收率試驗

采用加樣回收法，精密稱取勻漿樣品適量，加入VC標(biāo)準(zhǔn)品，按2.2方法進行處理，按含量測定方法測定VC的回收率。

2.6 最低檢測限計算

以產(chǎn)生三倍儀器噪聲水平的進樣量為檢出限[11]。

3 結(jié)果與分析

3.1 色譜分離結(jié)果

液相色譜分離效果的主要影響因素：色譜柱的類別、流動相、流速。在2.1色譜條件下，VC標(biāo)準(zhǔn)品溶液、花菜樣品的色譜圖如圖1、2所示。

圖1 VC標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖（0.06mg/m L）Fig.1 Chromatogram of vitam in C in standard sampleby HPLC（0.06m g/m L）

圖2 花菜提取液色譜圖Fig.2 Chrom atogram of cauliflower extractby HPLC

VC樣品均能實現(xiàn)基線分離，而且峰形能滿足測定要求，VC的保留時間為2.868min，檢測限為0.02mg/kg。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

以3次進樣的峰面積的平均值為響應(yīng)值，以VC標(biāo)準(zhǔn)品的進樣濃度（mg/mL）為自變量，求直線回歸方程為：y=876 060x+2 750.9，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 6，標(biāo)準(zhǔn)曲線在0.02mg/mL~0.12mg/mL范圍內(nèi)線性良好，VC的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3。

圖3 VC的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3 Thestandard curveof VC

3.3 精密度試驗結(jié)果

對同一花菜樣品，按照2.1的色譜條件重復(fù)進樣6次，測定結(jié)果見表1。

表1 精密度試驗結(jié)果Table1 Resultof precision test

精密度試驗相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.20%，表明該方法重現(xiàn)性較好。

3.4 回收率試驗結(jié)果

稱取3份勻漿花菜樣品5.00 g，分別加入VC標(biāo)準(zhǔn)液（20mg/100mL）1、2、5mL，按2.2方法進行提取處理，按2.1的色譜條件測定VC的含量，每個混合樣品測定3次，取其平均值。

表2 回收率試驗結(jié)果Table2 Resultof recovery test

回收率試驗結(jié)果表明，3個不同添加量的試樣，回收率在99.9%~104.6%之間，平均回收率102.4%，表明采用微波提取、反相高效液相色譜法測定花菜中VC的含量的方法的準(zhǔn)確度好，符合色譜定量分析的準(zhǔn)確度的要求。

4 結(jié)論

本試驗采用微波輔助提取，過濾、凈化后用液相測定方法來測定花菜中的VC的含量。該方法的線性范圍為0.02mg/mL~0.12mg/mL，檢測限0.02mg/kg，回收率在99.9%~104.6%之間，平均回收率為102.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.20%。VC性質(zhì)不穩(wěn)定，易氧化，采用微波來輔助提取，加快了提取進程，縮短了樣品制備時間，避免VC的損失；同時使樣品中的VC能有效提取，高效液相色譜測定VC的準(zhǔn)確度和精密度好，可以用于蔬菜中VC含量的定量測定。

[1]劉勝輝,臧小平,魏長賓.番石榴中VC的高效液相色譜分析[J].食品科學(xué),2007,28(4):292-295

[2]第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系.中國藥用植物圖鑒[M].上海:上海教育出版社,1960:73

[3]中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所.GB/T 5009.86-2003,蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸的測定(熒光法和2,4-二硝基苯肼法)[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2004:1-6

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[5]吳曉娜,黃承鈺,孫愛民,等.用高效液相色譜(HPLC)法測定血清VC含量[J].營養(yǎng)學(xué)報,2002,24(3):301-303

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Determ ination of Vitam in C in Cauliflower by M icrowave Extraction and HPLC

WUHai-yan1，2

（1.Nantong Agricultural Vocational Technology College，Nantong 226000，Jiangsu，China 2.Nantong Agricultural Product Processing Technology Association，Nantong 226000，Jiangsu，China）

The content of vitamin C in cauliflower was determined by microwave and HPLC.Vitamin C was extracted bymicrowave-assisted extraction ofwith 1%oxalic acid，then analyzed with HPLC by controlling the speed ofmobilephase.Mobilephasewas0.1%oxalic acidwith flow rate1.0mL/min，vitamin Cwasseparated by C-18 reversed column and detected by UV detectorat254 nm.Itwasshowed thatvitamin C in cauliflower could be separated.The linear ranges were 0.02 mg/mL-0.12 mg/mL，and the obtained correlation coefficient was 0.999 6.The recovery for the vitamin C ranged from 99.9%to 104.6%，with the relative standard deviation（RSD）was1.20%.The detection limitswas0.02mg/kg.Thismethod had good precision and high accuracy.This method can determinevitamin C in vegetables.

microwaveextraction；HPLC（high performance liquid chromatography）；cauliflower；vitamin C

2013-12-02

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.23.023

南通市農(nóng)村科技創(chuàng)新及產(chǎn)業(yè)化項目（HL2012025）

吳海燕（1978—），女（漢），講師，碩士研究生，研究方向：食品綜合利用、食品安全檢測。