電針三陰交對(duì)自然更年期大鼠焦慮行為學(xué)的影響

徐 玲 李 由 秦 卓 程 凱

(北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京，100029)

電針三陰交對(duì)自然更年期大鼠焦慮行為學(xué)的影響

徐 玲 李 由 秦 卓 程 凱

(北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京，100029)

目的：觀察電針三陰交穴對(duì)自然更年期大鼠焦慮行為學(xué)的影響。方法：將大鼠分為正常組、模型組和治療組，治療組在三陰交穴處進(jìn)行電針，隔日1次，共治療15次。正常組、模型組常規(guī)飼養(yǎng)，隔日抓取刺激。記錄在高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中焦慮行為數(shù)據(jù)(進(jìn)入開放臂次數(shù)、向下探究次數(shù)、封閉臂后腿直立次數(shù)和進(jìn)入開放臂時(shí)間等)。結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，模型組的OE%、OT%均顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)，HD值均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)表現(xiàn)出明顯的焦慮癥狀，模型組、治療組的OE+CE差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與模型組比較，治療組的OE%及OT%均顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，治療組的HD值明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；RE值無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：電針三陰交有一定的抗焦慮作用。

電針；高架十字迷宮；自然更年期大鼠；三陰交

圍絕經(jīng)期綜合征(Peri-menopausal Syndrome，PMS)是婦科的常見病，指婦女絕經(jīng)前后因卵巢功能衰退，出現(xiàn)性激素波動(dòng)或減少所致的以植物神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為主，伴有神經(jīng)心理癥狀的一組癥候群[1]，調(diào)查顯示，2030年我國50歲以上婦女將達(dá)2.8億，當(dāng)今社會(huì)的激烈競爭，生活作息的不規(guī)律等都影響著圍絕經(jīng)期婦女的身心健康[2]。在圍絕經(jīng)期這一過程中，由于卵巢功能逐漸退化，大部分PMS患者因不能適應(yīng)圍絕經(jīng)期的生理變化而表現(xiàn)出特有的身心癥狀，如因植物神經(jīng)功能紊亂而出現(xiàn)的陣發(fā)性潮熱、眩暈、出汗、失眠耳鳴，焦慮不安等[3]。圍絕經(jīng)期焦慮癥臨床表現(xiàn)為焦慮不安、心煩、失眠、敏感多疑等癥狀，常困擾更年期婦女。研究發(fā)現(xiàn)，大約75%左右的更年期婦女出現(xiàn)神經(jīng)精神癥狀，10%～15%婦女因癥狀較嚴(yán)重需要接受治療[4]。本實(shí)驗(yàn)以自然衰老更年期大鼠為模型，通過電針三陰交治療后，對(duì)大鼠進(jìn)行高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)，采用動(dòng)物行為活動(dòng)分析系統(tǒng)來分析判定行為學(xué)指標(biāo)，以初步評(píng)價(jià)電針三陰交穴對(duì)更年期大鼠焦慮行為學(xué)的改善作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型制備 根據(jù)文獻(xiàn)方法，11～15月齡雌性SD大鼠機(jī)體病理生理與婦女更年期類似，表明已進(jìn)入更年期。故我們選取11～15月齡雌性SD大鼠作為本實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物模型。陰道組織涂片法是有效區(qū)分大鼠動(dòng)情周期各個(gè)階段的一種簡便方法[5]，通過陰道涂片法即每日定時(shí)將大鼠的陰道涂片用堿性美藍(lán)溶液染色后在顯微鏡下觀察其組織學(xué)變化，連續(xù)觀察3個(gè)動(dòng)情周期(15 d)，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)、種類及數(shù)量篩選符合圍絕經(jīng)期變化規(guī)律的大鼠16只，體重(320±20)g。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字法分為：更年期對(duì)照組(模型組)8只和電針治療組(治療組)8只。另將3個(gè)月齡大鼠8只作為青年對(duì)照組(正常組)，體重(220±20)g，共3組。所有SD大鼠均為清潔級(jí)，由北京維通利華動(dòng)物中心提供(許可證編號(hào)為SCXK(京)2012-0001)。動(dòng)物置于清潔柜中，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度保持在(20±2)℃，濕度為65%，12 h光暗周期，自由攝食和飲水。

1.2 儀器 高架十字迷宮、高架十字迷宮視頻分析系統(tǒng)、韓氏穴位神經(jīng)刺激儀(北京華衛(wèi)公司)高架十字迷宮結(jié)構(gòu)：由2條相對(duì)的開放臂(Open Arm，長×寬分別為45 cm×15 cm)、兩條相對(duì)的封閉臂(Enclosed Arm，長×寬×高分別為45 cm×15 cm×30 cm)及一個(gè)聯(lián)接4條臂的中央平臺(tái)(Central Platform，15 cm×15 cm)組成，即開放臂-中央平臺(tái)-開放臂或封閉臂-中央平臺(tái)-封閉臂，此二者互相垂直成為“╈”(plus)形狀。封閉臂頂部開放。迷宮四條臂合中央平臺(tái)均為深灰色，整體固定于鐵制支架上，使其距地面高度為50 cm。在中央平臺(tái)上方安置攝像頭。毫針：華佗牌不銹鋼針灸針(規(guī)格：長13 mm，直徑0.22 mm；蘇州華佗醫(yī)療器械有限公司制造)。

1.3 針刺治療 穴位定位和刺法參考林文注主編《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》選取雙側(cè)三陰交穴，直刺3 mm，進(jìn)行電針刺激，采用疏密波，頻率2/100 Hz，強(qiáng)度以針柄輕微抖動(dòng)為宜，每次留針20 min。隔日1次，共計(jì)15次。其他各組常規(guī)飼養(yǎng)，隔日抓取。

1.4 行為學(xué)觀測方法 操作間內(nèi)保持較暗的光線(以1.5 m距離處能區(qū)分大鼠細(xì)微活動(dòng)的最低亮度為準(zhǔn))、室溫24 ℃、安靜條件下進(jìn)行。迷宮測試開始前將待測大鼠放入1個(gè)鼠籠內(nèi)，任其自由探究5 min后迅速放于迷宮的中央平臺(tái)處，使其頭部正對(duì)其中任一開放臂，釋放后即開始觀察測試并同步錄像。每只大鼠測試5 min。取出大鼠后，用干抹布蘸75%乙醇及時(shí)清除每只動(dòng)物的排泄物，待乙醇揮發(fā)擴(kuò)散后，再進(jìn)行下一只大鼠的測試。

1.5 行為學(xué)觀察指標(biāo) 1)進(jìn)入開放臂次數(shù)(Open Arm Entry，OE)：進(jìn)入到任一開放臂的次數(shù)，以大鼠4個(gè)爪子均進(jìn)入到臂內(nèi)為準(zhǔn)，中途一個(gè)爪子從該臂中完全退出則為該次進(jìn)入活動(dòng)完成；2)進(jìn)入開放臂時(shí)間(Open Arm Time，OT)，單位：s；3)進(jìn)入封閉臂次數(shù)(Close Arm Entry，CE)：進(jìn)入到任一封閉臂的次數(shù)，以大鼠4個(gè)爪子均進(jìn)入到臂內(nèi)為準(zhǔn)；4)進(jìn)入封閉臂時(shí)間(Close Arm Time，CT)，單位：s；5)OE百分率=OE/(OE+CE)×100%；6)OT百分率=OT/(OT+CT)×100%；7)進(jìn)入開放臂和封閉臂的總次數(shù)(OE+CE)：表示大鼠的運(yùn)動(dòng)活力；8)向下探究次數(shù)(Head Dipping，HD)：大鼠置身于中央平臺(tái)或開放臂時(shí)，一邊用前爪抓住迷宮邊緣，一邊把頭部和肩部伸出開放臂的邊緣向迷宮外面探究的行為次數(shù)；9)封閉臂內(nèi)后腿直立次數(shù)(Rearing，RE)：大鼠在封閉臂內(nèi)前腿抬起以后腿支持使身體豎立的次數(shù)。

1.6 分析及數(shù)據(jù)處理方法 運(yùn)用國際公認(rèn)的荷蘭Noldus公司開發(fā)的動(dòng)物行為活動(dòng)標(biāo)記分析系統(tǒng)The Observer 5.0和Etho Vision 3.0兩套軟件對(duì)各組大鼠有關(guān)自主活動(dòng)、學(xué)習(xí)與記憶、焦慮等行為進(jìn)行分析評(píng)價(jià)。采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，先進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，計(jì)量資料進(jìn)行單因素方差分析，方差不齊者用秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 電針三陰交對(duì)大鼠OE%、OT%、OE+CE的影響 與正常對(duì)照組比較，模型組的OE%、OT%均顯著減少(P<0.05，P<0.01)表現(xiàn)出明顯的焦慮癥狀。與模型組比較，治療組的OE%及OT%均顯著增高(P<0.05)。(見表1)

表1 各組大鼠OE、OT和OE+CE比較

注：與模型組比較，*P<0.05，與正常組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

2.2 電針三陰交對(duì)大鼠HD和RE的影響 與正常組比較，模型組的HD值均顯著升高(P<0.01)，表現(xiàn)明顯的焦慮癥狀。與模型組比較，治療組的HD值顯著降低(P<0.05)。(見表2)

表2 各組大鼠的HD和RE比較

注：與模型組比較，*P<0.05，與正常組比較，△△P<0.01。

3 討論

圍絕經(jīng)期綜合征中醫(yī)稱為“絕經(jīng)前后諸癥”范疇，歷代文獻(xiàn)關(guān)于本病的論述散見于“臟躁”“心悸”“失眠”“眩暈”“頭痛”“郁證”等病癥中[6]。其病機(jī)主要為腎氣虛，天癸竭，沖任脈虛，臟腑氣血功能失調(diào)。隨著我國人口結(jié)構(gòu)不斷老齡化和社會(huì)競爭日益激烈，不良的工作環(huán)境、家庭關(guān)系緊張及精神等因素影響，婦女進(jìn)入更年期逐漸增加、年齡提早，從而使圍絕經(jīng)期焦慮癥的發(fā)病率亦明顯增加[7]。因此治療和緩解更年期綜合征焦慮癥具有重要的社會(huì)意義。

三陰交在調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)、增強(qiáng)免疫功能、調(diào)節(jié)血流變以及對(duì)子宮肌電收縮影響和大腦中樞參與方面已取得一定認(rèn)識(shí)[8]。三陰交作為足太陰脾經(jīng)經(jīng)穴，又是足太陰、足厥陰、足少陰三條經(jīng)脈的交會(huì)穴，本穴在千金方中言其別名為承命、太陰[9]，具有補(bǔ)脾胃，助運(yùn)化，化濁利濕，通經(jīng)活絡(luò)，調(diào)和氣血，滋補(bǔ)肝腎之功效，婦女的生理特點(diǎn)與肝脾腎三臟關(guān)系密切，因此三陰交穴在治療婦科病癥方面有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，常作為婦科疾病的首選穴位。本實(shí)驗(yàn)通過電針三陰交穴，來改善圍絕經(jīng)期所出現(xiàn)的身心癥狀。

90%的圍絕經(jīng)女性擁有完整的卵巢，且其激素水平呈現(xiàn)逐漸衰退過程[10]，去勢(shì)模型大鼠除影響雌激素外還使促性腺激素釋放激素、黃體生成素及促卵泡素等水平快速下降[11]。不僅如此，卵巢的摘除還會(huì)影響雄激素的水平[12]。采用X線照射破壞卵巢所致癥狀來反映圍絕經(jīng)期綜合征主要表現(xiàn)，但經(jīng)X線照射后可明顯出現(xiàn)放射線腸炎癥狀，嚴(yán)重可伴有大鼠死亡[13]?？傊捎萌?shì)模型和X線照射破壞卵巢模型雖然能達(dá)到激素水平的變化，但不能準(zhǔn)確地模擬自然衰老過程出現(xiàn)的病理生理變化。本實(shí)驗(yàn)以自然衰老更年期大鼠為模型，因圍絕經(jīng)期出現(xiàn)的機(jī)體變化不是單純卵巢的生理改變和相關(guān)激素水平的變化，而是機(jī)體整體的改變，由于大鼠在自然衰老過程中未受到人為地干預(yù)，其機(jī)體生理病理的變化與人類圍絕經(jīng)期的變化極為相似，可較客觀地反映人體的變化過程。這也符合中醫(yī)順應(yīng)自然的理論。

實(shí)驗(yàn)中所采用的高架十字迷宮是國際公認(rèn)的動(dòng)物焦慮行為測評(píng)的首選裝置。利用動(dòng)物對(duì)新異環(huán)境的探究特性和對(duì)高懸敞開臂的恐懼形成動(dòng)物的矛盾沖突來考察動(dòng)物的焦慮狀態(tài)[14]。并且其作為焦慮大鼠模型的評(píng)價(jià)方法具有很好的復(fù)測信度[15]。觀察實(shí)驗(yàn)指標(biāo)以大鼠OE%與OT%反映大鼠焦慮狀態(tài)；以(OE+CE)反映大鼠的運(yùn)動(dòng)能力；以開放臂和中央臺(tái)區(qū)HD次數(shù)反映在非保護(hù)區(qū)的探索行為[16]，與焦慮程度具有相關(guān)性；封閉臂RE值也可用來觀察電針三陰交有無鎮(zhèn)靜作用及鎮(zhèn)靜強(qiáng)度。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，模型組的OE%、OT%分別為(14.44±3.85)、(3.10±0.64)表明自然衰老更年期大鼠較少進(jìn)入或者停留于開放臂，而趨向探究封閉臂，而電針治療組的OE%、OT%值分別為(26.85±5.99)、(12.70±4.01)較模型對(duì)照組顯著增加(P<0.05)，說明該組大鼠對(duì)開放臂和非保護(hù)區(qū)的探究增加，提示電針三陰交具有抗焦慮作用。與模型組比較，治療組的HD值顯著降低，HD具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，因此，我們可以認(rèn)為電針三陰交具有一定的抗焦慮作用。

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(2013-12-26收稿 責(zé)任編輯：曹柏)

Effect of Electrical Acupuncture (EA) in Sanyinjiao Acupoint on Anxiety Behavior of Natural Climacterium

Xu Ling， Li You，Qin Zhuo， Cheng Kai

(SchoolofAcupuncture-moxibustionandTuina，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100029，China)

Objective： To observe the effect of electrical acupuncture in Sanyinjiao acupoint on anxiety-like behavior of natural climacterium rats. Methods：The rats were divided into normal control group， model group and treatment group. Rats in the treatment group were given electro-acupuncture at Sanyinjiao acu-point once every other day for15 sessions. Rats in the other two groups were fed with conventional methods， and

stimulation every other day. The data of anxiety behavior were recorded， including times of entering the open arm， times of rear leg upright standing in the closed arm， time entering the open arm， etc. Results： Compared with normal control group， the percentages of close-area time (OE%) and open-area time (OT%) showed an decreasing trend in model group， and the difference was significant (P<0.05，P<0.01) which showed significant symptoms of anxiety; but the difference of OE and CE between the model group and treatment group was not statistically significant (P>0.05); compared with model group， the percentages of OE and OT increased greatly， and the difference was statistically significant (P<0.05); the value of HD in model group increased greatly， and the difference was statistically significant (P<0.01)， the HD value in treatment group showed a downward trend， and the difference was significant (P<0.05)， but the RE value was not statistically significant. Conclusion： Electrical acupuncture in Sanyinjiao acupoint shows certain anti-anxiety effect.

EA; Elevated plus maze; Natural Menopause rat; Sanyinjiao

徐玲(1985.3—)，女，碩士，研究方向：腧穴特異性，E-mail：xulingshuai@126.com

程凱(1971.7—)，男，博士，副主任醫(yī)師，研究生導(dǎo)師，研究方向：腧穴特異性，E-mail：Kevin@chengs.cn

R-332；R246.3

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.05.027