外源亞精胺對NaCl脅迫下菜用大豆多胺合成及膜脂過氧化的影響

楊立飛　魏國平　朱月林

摘要：以菜用大豆品種綠領(lǐng)95-1為試材，研究外源亞精胺（Spd）對NaCl脅迫下菜用大豆植株不同時期葉片多胺含量、膜脂過氧化、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量等的影響。結(jié)果表明，外施Spd顯著提高NaCl脅迫下菜用大豆葉片中的游離態(tài)腐胺（Put）、亞精胺（Spd）和精胺（Spm）含量；NaCl脅迫下外施Spd的菜用大豆植株葉片超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）和抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性均顯著高于對照植株， O-2· 產(chǎn)生速率及丙二醛（MDA）含量顯著低于對照，植株膜脂過氧化輕于對照；外施Spd植株葉片可溶性糖、可溶性蛋白質(zhì)含量均顯著高于對照。因此，亞精胺在提高菜用大豆耐鹽性方面具有重要作用。

關(guān)鍵詞：亞精胺；NaCl脅迫；膜脂過氧化；滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)；菜用大豆

中圖分類號： S643.701文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）01-0114-03

收稿日期：2013-05-08

基金項(xiàng)目：中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)青年科技創(chuàng)新基金（編號：KJ2010007）。

作者簡介：楊立飛（1980—），男，山東聊城人，副教授，從事蔬菜栽培生理與生物技術(shù)研究。E-mail：lfy@njau.edu.cn。

通信作者：朱月林，教授，博士生導(dǎo)師，從事蔬菜生理與生物技術(shù)研究。 E-mail：ylzhu@njau.edu.cn。土壤鹽漬化是一個世界性的資源環(huán)境和生態(tài)問題[1-2]，全世界每年因鹽堿造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)數(shù)百億美元。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界約有9×108 hm2土地有不同程度的鹽漬化，占耕地面積的20%[3]，我國有1.0×107 hm2 鹽堿地，占耕地面積的6.2%。近年來，隨著我國人口的增加及工業(yè)化程度的快速提高，可耕地面積急劇下降，另外，由于不合理的施肥和灌溉措施造成的良田次生鹽漬化也正在快速蔓延。

菜用大豆是我國的重要大田作物，是當(dāng)今世界上重要的植物蛋白質(zhì)來源之一，對鹽分中度敏感，耐鹽性差，在鹽脅迫條件下造成花莢敗育，落花、落莢率可達(dá)70%～90%，甚至導(dǎo)致絕收，嚴(yán)重影響其產(chǎn)量與品質(zhì)，這阻礙了我國菜用大豆生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展。多胺（PA）是植物中廣泛存在的一種小分子脂肪胺。植物細(xì)胞中主要多胺有亞精胺（Spd）、精胺（Spm）和游離態(tài)腐胺（Put）[4]。目前，普遍認(rèn)為PAs在植物生長發(fā)育中有重要作用，而且能夠抵抗脅迫逆境[5]，在鹽脅迫下PAs含量會增加，這在單子葉和雙子葉植物中均有報道，如水稻和番茄耐鹽栽培品種與鹽敏感品種相比，在鹽脅迫下Spd和Spm的含量增加[6]。然而，鹽脅迫下外施Spd對菜用大豆植株不同時期葉片多胺含量、膜脂過氧化、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量等的影響還鮮見報道。因此，本研究以菜用大豆為試材，測定外源Spd對鹽脅迫下植株體內(nèi)多胺含量的影響及膜脂過氧化、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的變化，分析菜用大豆葉中游離Spd的作用，以探究鹽脅迫下Spd在菜用大豆耐鹽性中的作用。

1材料和方法

1.1材料

菜用大豆栽培品種為綠領(lǐng)95-1，由南京綠領(lǐng)種子公司生產(chǎn)，相對耐鹽，表面消毒劑處理后，播種在60 cm×45 cm×45 cm 營養(yǎng)缽中，基質(zhì)為蛭石，每盆3株，使用Hoaglands營養(yǎng)液。試驗(yàn)于2011年9月至11月在南京農(nóng)業(yè)大學(xué)溫室中進(jìn)行，晝/夜平均溫度為33 ℃/20 ℃，相對濕度65%～70%，每3 d澆1次Hoaglands營養(yǎng)液150 mL。

1.2方法

1.2.1試驗(yàn)處理當(dāng)幼苗展開第8～9片真葉時，用含 100 mmol/L NaCl營養(yǎng)液處理，處理如下：（a）對照組：Hoaglands營養(yǎng)液（CK）；（b）Hoaglands營養(yǎng)液+100 mmol/L NaCl（N1）；（c）Spd處理：N1+0.1 mmol/L Spd（N2）。葉面噴施0.1 mmol/L Spd，輔以0.01%（體積分?jǐn)?shù)）吐溫20作為洗滌劑，對照組葉噴0.01%（體積分?jǐn)?shù)）吐溫20。隨機(jī)區(qū)組，3次重復(fù)。

1.2.2測定項(xiàng)目及方法NaCl處理后每3 d，取自上向下數(shù)第4片完全展開葉，按高洪波等方法[7]用日本產(chǎn)Shimadzu LC-10AT 型高效液相色譜儀測定1次多胺含量，層析柱為反向C18柱（150 mm×4.6 mm），64%甲醇為流動相，流速為0.5 mL/min，柱溫為25 ℃，Shimadzu SPD-10A檢測器波長為254 nm，進(jìn)樣為10 μL。腐胺（Put）、亞精胺（Spd）、精胺（Spm）標(biāo)樣購自美國Sigma公司，以Put、Spd、Spm作標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行樣品Put、Spd、Spm含量的定量分析。NaCl處理后每3 d，取自上向下數(shù)第4片完全展開葉測定生理指標(biāo)，共測定5次。每處理5株分別取樣，3次重復(fù)，測定時各樣品重復(fù)測定3次。氮藍(lán)四唑（NBT）光還原法測定超氧化物歧化酶（SOD）活性；愈創(chuàng)木酚法測定過氧化物酶（POD）活性；過氧化氫酶（CAT）活性按Cakmak等方法[8]測定；抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性的測定按照Nakano等方法[9]； O-2· 產(chǎn)生速率的測定參照王愛國等的方法[10]；丙二醛（MDA）含量用硫代巴比妥酸法（TBA）測定；可溶性糖含量用苯酚-硫酸方法測定；可溶性蛋白質(zhì)含量用考馬斯亮藍(lán) G-250 法測定。

1.3統(tǒng)計(jì)分析

用SAS軟件進(jìn)行單因素方差分析，并用Duncans新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。

2結(jié)果與分析

2.1外源噴施Spd對NaCl脅迫下菜用大豆葉片游離態(tài)多胺含量的影響

由表1可知，在游離態(tài)腐胺含量方面，NaCl脅迫后9 d，處理植株（N1）與對照植株（CK）無差異，其余測定時期均顯著低于CK；外施Spd處理植株（N2）在3、6、9 d與CK有顯著性差異，其余測定時期與CK差異不顯著；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1。在游離態(tài)亞精胺含量方面，N1、N2在整個測定期間均顯著高于CK；N2與N1相比，N2在整個測定期間均顯著高于N1。在游離態(tài)精胺含量方面，N1在脅迫后3 d與CK無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于CK；N2在整個測定期間均顯著高于CK和N1。在多胺總量方面，N1在脅迫后9、12、15 d顯著高于CK；N2在整個測定時期均顯著高于CK；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1。

2.2外源噴施Spd對NaCl脅迫下菜用大豆葉片保護(hù)酶活性的影響

由表2可知，在SOD活性方面，NaCl脅迫后3 d，N1顯著高于CK，其余測定時期兩者差異不顯著；N2在整個測定時期均顯著高于CK；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1，這說明鹽脅迫早期對菜用大豆植株SOD活性影響較大，隨著脅迫時期的延長，外施Spd提高SOD活性的效果更突出。在POD活性方面，N1在整個測定時期均顯著低于CK；N2在脅迫后3 d和6 d顯著低于CK，其余測定時期兩者無顯著差異；N2除脅迫后3 d外，其余測定期間均顯著高于N1。在CAT方面，N1除了脅迫后3 d與CK無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于CK；N2在整個測定時期均顯著高于CK；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1。在APX活性方面，N1除了脅迫后9 d顯著高于CK外，其余測定時期兩者無顯著差異；N2在整個測定時期均顯著高于CK；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1。上述變化表明，鹽脅迫下外源噴施Spd的菜用大豆植株酶活性較高，具有較穩(wěn)定的活性氧清除系統(tǒng)，耐鹽性較強(qiáng)。

2.3外源噴施Spd對NaCl脅迫下菜用大豆葉片 O-2· 產(chǎn)生速率和MDA含量的影響

由表3可知，在NaCl脅迫下，N1的 O-2· 產(chǎn)生速率在整表1外源噴施Spd對NaCl脅迫下不同時期菜用大豆植株葉片多胺含量的影響

摘要：以菜用大豆品種綠領(lǐng)95-1為試材，研究外源亞精胺（Spd）對NaCl脅迫下菜用大豆植株不同時期葉片多胺含量、膜脂過氧化、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量等的影響。結(jié)果表明，外施Spd顯著提高NaCl脅迫下菜用大豆葉片中的游離態(tài)腐胺（Put）、亞精胺（Spd）和精胺（Spm）含量；NaCl脅迫下外施Spd的菜用大豆植株葉片超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）和抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性均顯著高于對照植株， O-2· 產(chǎn)生速率及丙二醛（MDA）含量顯著低于對照，植株膜脂過氧化輕于對照；外施Spd植株葉片可溶性糖、可溶性蛋白質(zhì)含量均顯著高于對照。因此，亞精胺在提高菜用大豆耐鹽性方面具有重要作用。

關(guān)鍵詞：亞精胺；NaCl脅迫；膜脂過氧化；滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)；菜用大豆

中圖分類號： S643.701文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）01-0114-03

收稿日期：2013-05-08

基金項(xiàng)目：中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)青年科技創(chuàng)新基金（編號：KJ2010007）。

作者簡介：楊立飛（1980—），男，山東聊城人，副教授，從事蔬菜栽培生理與生物技術(shù)研究。E-mail：lfy@njau.edu.cn。

通信作者：朱月林，教授，博士生導(dǎo)師，從事蔬菜生理與生物技術(shù)研究。 E-mail：ylzhu@njau.edu.cn。土壤鹽漬化是一個世界性的資源環(huán)境和生態(tài)問題[1-2]，全世界每年因鹽堿造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)數(shù)百億美元。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界約有9×108 hm2土地有不同程度的鹽漬化，占耕地面積的20%[3]，我國有1.0×107 hm2 鹽堿地，占耕地面積的6.2%。近年來，隨著我國人口的增加及工業(yè)化程度的快速提高，可耕地面積急劇下降，另外，由于不合理的施肥和灌溉措施造成的良田次生鹽漬化也正在快速蔓延。

菜用大豆是我國的重要大田作物，是當(dāng)今世界上重要的植物蛋白質(zhì)來源之一，對鹽分中度敏感，耐鹽性差，在鹽脅迫條件下造成花莢敗育，落花、落莢率可達(dá)70%～90%，甚至導(dǎo)致絕收，嚴(yán)重影響其產(chǎn)量與品質(zhì)，這阻礙了我國菜用大豆生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展。多胺（PA）是植物中廣泛存在的一種小分子脂肪胺。植物細(xì)胞中主要多胺有亞精胺（Spd）、精胺（Spm）和游離態(tài)腐胺（Put）[4]。目前，普遍認(rèn)為PAs在植物生長發(fā)育中有重要作用，而且能夠抵抗脅迫逆境[5]，在鹽脅迫下PAs含量會增加，這在單子葉和雙子葉植物中均有報道，如水稻和番茄耐鹽栽培品種與鹽敏感品種相比，在鹽脅迫下Spd和Spm的含量增加[6]。然而，鹽脅迫下外施Spd對菜用大豆植株不同時期葉片多胺含量、膜脂過氧化、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量等的影響還鮮見報道。因此，本研究以菜用大豆為試材，測定外源Spd對鹽脅迫下植株體內(nèi)多胺含量的影響及膜脂過氧化、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的變化，分析菜用大豆葉中游離Spd的作用，以探究鹽脅迫下Spd在菜用大豆耐鹽性中的作用。

1材料和方法

1.1材料

菜用大豆栽培品種為綠領(lǐng)95-1，由南京綠領(lǐng)種子公司生產(chǎn)，相對耐鹽，表面消毒劑處理后，播種在60 cm×45 cm×45 cm 營養(yǎng)缽中，基質(zhì)為蛭石，每盆3株，使用Hoaglands營養(yǎng)液。試驗(yàn)于2011年9月至11月在南京農(nóng)業(yè)大學(xué)溫室中進(jìn)行，晝/夜平均溫度為33 ℃/20 ℃，相對濕度65%～70%，每3 d澆1次Hoaglands營養(yǎng)液150 mL。

1.2方法

1.2.1試驗(yàn)處理當(dāng)幼苗展開第8～9片真葉時，用含 100 mmol/L NaCl營養(yǎng)液處理，處理如下：（a）對照組：Hoaglands營養(yǎng)液（CK）；（b）Hoaglands營養(yǎng)液+100 mmol/L NaCl（N1）；（c）Spd處理：N1+0.1 mmol/L Spd（N2）。葉面噴施0.1 mmol/L Spd，輔以0.01%（體積分?jǐn)?shù)）吐溫20作為洗滌劑，對照組葉噴0.01%（體積分?jǐn)?shù)）吐溫20。隨機(jī)區(qū)組，3次重復(fù)。

1.2.2測定項(xiàng)目及方法NaCl處理后每3 d，取自上向下數(shù)第4片完全展開葉，按高洪波等方法[7]用日本產(chǎn)Shimadzu LC-10AT 型高效液相色譜儀測定1次多胺含量，層析柱為反向C18柱（150 mm×4.6 mm），64%甲醇為流動相，流速為0.5 mL/min，柱溫為25 ℃，Shimadzu SPD-10A檢測器波長為254 nm，進(jìn)樣為10 μL。腐胺（Put）、亞精胺（Spd）、精胺（Spm）標(biāo)樣購自美國Sigma公司，以Put、Spd、Spm作標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行樣品Put、Spd、Spm含量的定量分析。NaCl處理后每3 d，取自上向下數(shù)第4片完全展開葉測定生理指標(biāo)，共測定5次。每處理5株分別取樣，3次重復(fù)，測定時各樣品重復(fù)測定3次。氮藍(lán)四唑（NBT）光還原法測定超氧化物歧化酶（SOD）活性；愈創(chuàng)木酚法測定過氧化物酶（POD）活性；過氧化氫酶（CAT）活性按Cakmak等方法[8]測定；抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性的測定按照Nakano等方法[9]； O-2· 產(chǎn)生速率的測定參照王愛國等的方法[10]；丙二醛（MDA）含量用硫代巴比妥酸法（TBA）測定；可溶性糖含量用苯酚-硫酸方法測定；可溶性蛋白質(zhì)含量用考馬斯亮藍(lán) G-250 法測定。

1.3統(tǒng)計(jì)分析

用SAS軟件進(jìn)行單因素方差分析，并用Duncans新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。

2結(jié)果與分析

2.1外源噴施Spd對NaCl脅迫下菜用大豆葉片游離態(tài)多胺含量的影響

由表1可知，在游離態(tài)腐胺含量方面，NaCl脅迫后9 d，處理植株（N1）與對照植株（CK）無差異，其余測定時期均顯著低于CK；外施Spd處理植株（N2）在3、6、9 d與CK有顯著性差異，其余測定時期與CK差異不顯著；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1。在游離態(tài)亞精胺含量方面，N1、N2在整個測定期間均顯著高于CK；N2與N1相比，N2在整個測定期間均顯著高于N1。在游離態(tài)精胺含量方面，N1在脅迫后3 d與CK無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于CK；N2在整個測定期間均顯著高于CK和N1。在多胺總量方面，N1在脅迫后9、12、15 d顯著高于CK；N2在整個測定時期均顯著高于CK；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1。

2.2外源噴施Spd對NaCl脅迫下菜用大豆葉片保護(hù)酶活性的影響

由表2可知，在SOD活性方面，NaCl脅迫后3 d，N1顯著高于CK，其余測定時期兩者差異不顯著；N2在整個測定時期均顯著高于CK；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1，這說明鹽脅迫早期對菜用大豆植株SOD活性影響較大，隨著脅迫時期的延長，外施Spd提高SOD活性的效果更突出。在POD活性方面，N1在整個測定時期均顯著低于CK；N2在脅迫后3 d和6 d顯著低于CK，其余測定時期兩者無顯著差異；N2除脅迫后3 d外，其余測定期間均顯著高于N1。在CAT方面，N1除了脅迫后3 d與CK無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于CK；N2在整個測定時期均顯著高于CK；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1。在APX活性方面，N1除了脅迫后9 d顯著高于CK外，其余測定時期兩者無顯著差異；N2在整個測定時期均顯著高于CK；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1。上述變化表明，鹽脅迫下外源噴施Spd的菜用大豆植株酶活性較高，具有較穩(wěn)定的活性氧清除系統(tǒng)，耐鹽性較強(qiáng)。

2.3外源噴施Spd對NaCl脅迫下菜用大豆葉片 O-2· 產(chǎn)生速率和MDA含量的影響

由表3可知，在NaCl脅迫下，N1的 O-2· 產(chǎn)生速率在整表1外源噴施Spd對NaCl脅迫下不同時期菜用大豆植株葉片多胺含量的影響

摘要：以菜用大豆品種綠領(lǐng)95-1為試材，研究外源亞精胺（Spd）對NaCl脅迫下菜用大豆植株不同時期葉片多胺含量、膜脂過氧化、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量等的影響。結(jié)果表明，外施Spd顯著提高NaCl脅迫下菜用大豆葉片中的游離態(tài)腐胺（Put）、亞精胺（Spd）和精胺（Spm）含量；NaCl脅迫下外施Spd的菜用大豆植株葉片超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）和抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性均顯著高于對照植株， O-2· 產(chǎn)生速率及丙二醛（MDA）含量顯著低于對照，植株膜脂過氧化輕于對照；外施Spd植株葉片可溶性糖、可溶性蛋白質(zhì)含量均顯著高于對照。因此，亞精胺在提高菜用大豆耐鹽性方面具有重要作用。

關(guān)鍵詞：亞精胺；NaCl脅迫；膜脂過氧化；滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)；菜用大豆

中圖分類號： S643.701文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）01-0114-03

收稿日期：2013-05-08

基金項(xiàng)目：中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)青年科技創(chuàng)新基金（編號：KJ2010007）。

作者簡介：楊立飛（1980—），男，山東聊城人，副教授，從事蔬菜栽培生理與生物技術(shù)研究。E-mail：lfy@njau.edu.cn。

通信作者：朱月林，教授，博士生導(dǎo)師，從事蔬菜生理與生物技術(shù)研究。 E-mail：ylzhu@njau.edu.cn。土壤鹽漬化是一個世界性的資源環(huán)境和生態(tài)問題[1-2]，全世界每年因鹽堿造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)數(shù)百億美元。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界約有9×108 hm2土地有不同程度的鹽漬化，占耕地面積的20%[3]，我國有1.0×107 hm2 鹽堿地，占耕地面積的6.2%。近年來，隨著我國人口的增加及工業(yè)化程度的快速提高，可耕地面積急劇下降，另外，由于不合理的施肥和灌溉措施造成的良田次生鹽漬化也正在快速蔓延。

菜用大豆是我國的重要大田作物，是當(dāng)今世界上重要的植物蛋白質(zhì)來源之一，對鹽分中度敏感，耐鹽性差，在鹽脅迫條件下造成花莢敗育，落花、落莢率可達(dá)70%～90%，甚至導(dǎo)致絕收，嚴(yán)重影響其產(chǎn)量與品質(zhì)，這阻礙了我國菜用大豆生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展。多胺（PA）是植物中廣泛存在的一種小分子脂肪胺。植物細(xì)胞中主要多胺有亞精胺（Spd）、精胺（Spm）和游離態(tài)腐胺（Put）[4]。目前，普遍認(rèn)為PAs在植物生長發(fā)育中有重要作用，而且能夠抵抗脅迫逆境[5]，在鹽脅迫下PAs含量會增加，這在單子葉和雙子葉植物中均有報道，如水稻和番茄耐鹽栽培品種與鹽敏感品種相比，在鹽脅迫下Spd和Spm的含量增加[6]。然而，鹽脅迫下外施Spd對菜用大豆植株不同時期葉片多胺含量、膜脂過氧化、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量等的影響還鮮見報道。因此，本研究以菜用大豆為試材，測定外源Spd對鹽脅迫下植株體內(nèi)多胺含量的影響及膜脂過氧化、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的變化，分析菜用大豆葉中游離Spd的作用，以探究鹽脅迫下Spd在菜用大豆耐鹽性中的作用。

1材料和方法

1.1材料

菜用大豆栽培品種為綠領(lǐng)95-1，由南京綠領(lǐng)種子公司生產(chǎn)，相對耐鹽，表面消毒劑處理后，播種在60 cm×45 cm×45 cm 營養(yǎng)缽中，基質(zhì)為蛭石，每盆3株，使用Hoaglands營養(yǎng)液。試驗(yàn)于2011年9月至11月在南京農(nóng)業(yè)大學(xué)溫室中進(jìn)行，晝/夜平均溫度為33 ℃/20 ℃，相對濕度65%～70%，每3 d澆1次Hoaglands營養(yǎng)液150 mL。

1.2方法

1.2.1試驗(yàn)處理當(dāng)幼苗展開第8～9片真葉時，用含 100 mmol/L NaCl營養(yǎng)液處理，處理如下：（a）對照組：Hoaglands營養(yǎng)液（CK）；（b）Hoaglands營養(yǎng)液+100 mmol/L NaCl（N1）；（c）Spd處理：N1+0.1 mmol/L Spd（N2）。葉面噴施0.1 mmol/L Spd，輔以0.01%（體積分?jǐn)?shù)）吐溫20作為洗滌劑，對照組葉噴0.01%（體積分?jǐn)?shù)）吐溫20。隨機(jī)區(qū)組，3次重復(fù)。

1.2.2測定項(xiàng)目及方法NaCl處理后每3 d，取自上向下數(shù)第4片完全展開葉，按高洪波等方法[7]用日本產(chǎn)Shimadzu LC-10AT 型高效液相色譜儀測定1次多胺含量，層析柱為反向C18柱（150 mm×4.6 mm），64%甲醇為流動相，流速為0.5 mL/min，柱溫為25 ℃，Shimadzu SPD-10A檢測器波長為254 nm，進(jìn)樣為10 μL。腐胺（Put）、亞精胺（Spd）、精胺（Spm）標(biāo)樣購自美國Sigma公司，以Put、Spd、Spm作標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行樣品Put、Spd、Spm含量的定量分析。NaCl處理后每3 d，取自上向下數(shù)第4片完全展開葉測定生理指標(biāo)，共測定5次。每處理5株分別取樣，3次重復(fù)，測定時各樣品重復(fù)測定3次。氮藍(lán)四唑（NBT）光還原法測定超氧化物歧化酶（SOD）活性；愈創(chuàng)木酚法測定過氧化物酶（POD）活性；過氧化氫酶（CAT）活性按Cakmak等方法[8]測定；抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性的測定按照Nakano等方法[9]； O-2· 產(chǎn)生速率的測定參照王愛國等的方法[10]；丙二醛（MDA）含量用硫代巴比妥酸法（TBA）測定；可溶性糖含量用苯酚-硫酸方法測定；可溶性蛋白質(zhì)含量用考馬斯亮藍(lán) G-250 法測定。

1.3統(tǒng)計(jì)分析

用SAS軟件進(jìn)行單因素方差分析，并用Duncans新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。

2結(jié)果與分析

2.1外源噴施Spd對NaCl脅迫下菜用大豆葉片游離態(tài)多胺含量的影響

由表1可知，在游離態(tài)腐胺含量方面，NaCl脅迫后9 d，處理植株（N1）與對照植株（CK）無差異，其余測定時期均顯著低于CK；外施Spd處理植株（N2）在3、6、9 d與CK有顯著性差異，其余測定時期與CK差異不顯著；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1。在游離態(tài)亞精胺含量方面，N1、N2在整個測定期間均顯著高于CK；N2與N1相比，N2在整個測定期間均顯著高于N1。在游離態(tài)精胺含量方面，N1在脅迫后3 d與CK無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于CK；N2在整個測定期間均顯著高于CK和N1。在多胺總量方面，N1在脅迫后9、12、15 d顯著高于CK；N2在整個測定時期均顯著高于CK；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1。

2.2外源噴施Spd對NaCl脅迫下菜用大豆葉片保護(hù)酶活性的影響

由表2可知，在SOD活性方面，NaCl脅迫后3 d，N1顯著高于CK，其余測定時期兩者差異不顯著；N2在整個測定時期均顯著高于CK；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1，這說明鹽脅迫早期對菜用大豆植株SOD活性影響較大，隨著脅迫時期的延長，外施Spd提高SOD活性的效果更突出。在POD活性方面，N1在整個測定時期均顯著低于CK；N2在脅迫后3 d和6 d顯著低于CK，其余測定時期兩者無顯著差異；N2除脅迫后3 d外，其余測定期間均顯著高于N1。在CAT方面，N1除了脅迫后3 d與CK無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于CK；N2在整個測定時期均顯著高于CK；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1。在APX活性方面，N1除了脅迫后9 d顯著高于CK外，其余測定時期兩者無顯著差異；N2在整個測定時期均顯著高于CK；N2除了脅迫后3 d與N1無顯著差異外，其余測定時期均顯著高于N1。上述變化表明，鹽脅迫下外源噴施Spd的菜用大豆植株酶活性較高，具有較穩(wěn)定的活性氧清除系統(tǒng)，耐鹽性較強(qiáng)。

2.3外源噴施Spd對NaCl脅迫下菜用大豆葉片 O-2· 產(chǎn)生速率和MDA含量的影響

由表3可知，在NaCl脅迫下，N1的 O-2· 產(chǎn)生速率在整表1外源噴施Spd對NaCl脅迫下不同時期菜用大豆植株葉片多胺含量的影響