梔子種子檢驗規(guī)程研究

顏升等

摘要：為了規(guī)范中藥藥材種子市場，保證梔子種子的質量，研究建立梔子種子的檢驗方法。參考國際種子檢驗規(guī)程和中國農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程的方法，對梔子種子扦樣、真實性、凈度、發(fā)芽率、含水量、生活力及千粒質量7項指標進行研究，確定可控指標的標準檢驗方法。結果表明：扦樣時種子批的最大總質量可選為5 000 g，送檢樣品的質量為 800 g；在進行凈度、水分和真實性分析時扦樣樣品的質量不應超過100 g。其中的真實性鑒定可利用梔子種子外觀結構、大小和顏色等形態(tài)特征進行；凈度分析可按照GB/T 3543.1—1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程 總則》中的相關方法進行；發(fā)芽率的測定用濾紙，在30 ℃下進行恒溫處理；種子含水量的測定在將未粉碎的種子高溫烘干1.5 h后進行；生活力的測定用BTB法，浸種時間為2 h，濃度為0.1%，顯色時間為40 min；千粒質量的測定用五百粒法。綜合研究結果，本規(guī)程可用作梔子種子質量檢驗的依據(jù)。

關鍵詞：梔子；種子；檢驗規(guī)程

中圖分類號： S339.3 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）03-0248-04

梔子又名黃梔子、山梔，為茜草科植物梔子（Gardenia jasminoides Ellis）的成熟干燥果實，具有瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒等功效，有著非常廣闊的市場前景[1-2]。梔子果實為倒卵形或橢圓形蒴果，熟時為金黃色或橘紅色，有5～8條翅狀縱棱，頂端有5～8條長度與果體幾乎相等的窄披針形宿存花萼。梔子蒴果中含有種子多數(shù)，并與果肉緊密相連。梔子的繁殖方法主要為壓條或扦插，也可用種子繁殖。

中藥材種子大多是藥材生產(chǎn)中的副產(chǎn)品。由于我國無種子的質量監(jiān)督、檢驗和管理機構[3]，絕大多數(shù)中藥材種子缺乏質量檢驗規(guī)程和質量分級標準，而種子的檢驗和質量分級又是保證種子質量的主要手段。本研究在綜合分析當前種子檢驗研究成果的基礎上，參照《1996國際種子檢驗規(guī)程》[4]和GB/T 3543.1—1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程 總則》對梔子種子的扦樣方法以及代表種子質量的一系列指標（包括種子真實性、凈度、發(fā)芽率、含水量、生活力、千粒質量等）進行了檢驗和鑒定方法的研究，并在此基礎上制定了梔子種子的檢驗規(guī)程。根據(jù)本檢驗規(guī)程的試驗結果，能夠達到對梔子種子質量進行客觀、科學評價的目的，從而可以為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中梔子的栽培與種植提供指導。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

本試驗各個部分中所用的儀器及試劑材料見表1。

試驗用藥材樣品為作者于2012年10—11月從江西省樟樹市、安徽省亳州市采集或直接從藥農(nóng)處購買所得，經(jīng)過江西中醫(yī)藥大學中藥資源學科組葛菲教授鑒定為茜草科植物梔子的干燥成熟果實。

1.2 試驗方法

1.2.1 扦樣 根據(jù)梔子種子的市場流通情況、生產(chǎn)水平和單次可能交易量，以及種子的形狀、大小、表面光滑度、散落性等因素[5]，查找并參照GB/T 3543.1—1995《農(nóng)作物檢驗規(guī)程 總則》中所列的124種作物品種，確定梔子種子批的最大質量和送驗樣品的最小質量，其中送驗樣品的質量因檢測項目的不同而不同。

1.2.2 真實性鑒定 手工隨機選取400粒種子，設4個重復，每個重復100粒。采用種子外觀形態(tài)法[6]，通過對種子形態(tài)、大小、顏色等特征的觀察來鑒定檢驗種子的真實性，結果用平均值表示，并保留1位小數(shù)。

1.2.3 凈度分析 凈度分析參照GB/T 3543.1—1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程 總則》的方法執(zhí)行。所遵循的基本原則為：大于原大小的一半，并附著種皮的種子定義為凈種子；質量大于種子質量10倍以上的雜質，定義為重型雜質，其他破損或受損碎片列為雜質。試樣稱重和百分率的計算精確度參照《1996國際種子檢驗規(guī)程》[4]。

1.2.4 發(fā)芽試驗 以2批不同產(chǎn)地的種子為試驗材料，設計不同溫度、不同發(fā)芽床的發(fā)芽試驗，觀察種子的發(fā)芽規(guī)律，總結得出最適的發(fā)芽溫度和發(fā)芽床種類[7]。處理過程為：將2個產(chǎn)地的梔子種子于25 ℃恒溫浸種1 d后置于光照培養(yǎng)箱中，分別設置30、25、20、15 ℃恒溫處理和30 ℃/20 ℃、25 ℃/15 ℃變溫處理共6個發(fā)芽溫度處理。分別采用蛭石、紗布、濾紙、沙子等4種材料作為發(fā)芽床。每個處理重復3次，每次25粒種子。相關計算公式為：

發(fā)芽率=發(fā)芽種子數(shù)/供測種子數(shù)×100%

發(fā)芽勢=發(fā)芽過程中日發(fā)芽種子數(shù)的最高峰數(shù)/供測種子數(shù)×100%

1.2.5 水分的測定 種子含水量是按規(guī)定程序把種子樣品烘干后所失去的質量占供檢樣品原始質量的比例。本試驗對比了低溫整粒法與高溫整粒法、整粒法與初磨法對梔子種子含水量測定的影響。

低溫整粒法：用小匙充分攪拌樣品，并從中取出2份種子樣品，對2份種子樣本均設9個時間處理：15、30、45、60、90、120、180、240、300 min，各3次重復，每個重復5 g。預先將樣品盒烘干、冷卻、稱重，并記下盒號，然后放入試樣，再稱重（精確至0.001 g）；使烘箱通電并預熱至110～115 ℃，將樣品攤平放入烘箱內(nèi)的上層，迅速關閉烘箱門，使箱溫在5～10 min內(nèi)回至（103±2） ℃時開始計時；到預定時間后，戴上手套在箱內(nèi)蓋好盒蓋，取出后放入干燥器內(nèi)冷卻至室溫并稱重；根據(jù)烘干后失去的質量計算種子水分，并通過所得數(shù)據(jù)選擇烘干時間。

高溫整粒法：方法步驟與低溫整粒法基本相同，區(qū)別是高溫整粒法要將烘箱預熱至140～145 ℃，打開并關閉箱門5～10 min 后，烘箱內(nèi)的溫度須保持在130～133 ℃。對2份種子樣品共設置了8個時間處理：15、30、45、60、90、120、180、400 min，根據(jù)烘干后失去的質量計算種子的水分百分率。

整粒法和初磨法的步驟分別為：隨機稱取5 g梔子種子，1份進行研磨處理，記為粗磨法；另1份不作處理，記為整粒法。采用低溫整粒法測定水分，設置3個重復。endprint

1.2.6 生活力的測定 分別取2批不同產(chǎn)地的梔子種子 2 g，用濃硫酸酸蝕5min后去除外種皮，以避免種皮表面色素對染色觀察的干擾。處理后的種子分別用四氮唑染色法（TTC法） 、溴麝香草酚藍法（BTB法）、紅墨水染色法進行生活力的測定。

TTC法：用單面刀片沿種胚中心線將種子縱切為兩半，取帶種胚的一半放入盛有四氮唑溶液的小燒杯中，四氮唑的濃度分別為0.1%、1.0%；放入30 ℃恒溫箱中，在黑暗下染色，染色時間分別為4、11、16、25 h。另外分別取2組種子，每組25粒，沸水蒸煮10 min后分別在四氮唑濃度0.1%、1.0% 條件下染色，作為空白對照。染色結束后，倒去四氮唑溶液，用雙蒸水清洗。由于TTC能夠將活種子的胚染成紅色，對照死種子則不能著色，因此根據(jù)種子胚的著色程度、部位與空白對照的比較來鑒定種子的生活力，并計算有生活力種子的百分率。每個處理設4個重復。

BTB法：將經(jīng)濃硫酸處理的2批種子均隨機分為2組，每組25粒，一組用沸水蒸煮10 min，作為空白對照（死種子），另一組則不作處理。在培養(yǎng)皿中備好0.1% BTB凝膠，分別把2組種子整齊地包埋于凝膠中后放入30 ℃恒溫箱中染色，染色時間分別為10、20、40、60 min。觀察種子周圍出現(xiàn)黃色暈圈的情況，出現(xiàn)暈圈表示有活力[8]。每個處理設4個重復。

紅墨水法：將經(jīng)濃硫酸處理的2批種子均隨機分為2組，每組25粒，取一組用沸水蒸煮10 min，作為空白對照（死種子），將2組種子用單面刀片沿種胚中心線縱切為二半，取帶種胚的一半放入盛有5%紅墨水溶液的小燒杯中。將燒杯放入30 ℃恒溫箱中染色，染色時間分別為10 min、30 min、1 h、2 h。由于活種子胚不著色或著色很淺，而死種子種胚的著色度和胚乳相同，根據(jù)這個原理鑒定種子的生活力，并計算百分率。每個處理設4個重復。

1.2.7 質量測定 對梔子種子試樣采用百粒法、五百粒法和千粒法進行質量測定[9]。將凈度分析后所得的全部凈種子混勻后進行如下分組：100粒種子，8個重復；500粒種子，3個重復；1000粒種子，2個重復。分組后稱重，小數(shù)位數(shù)的規(guī)定按照ISTA的相關標準[10]。分別計算百粒法、五百粒法、千粒法的平均質量、標準差及變異系數(shù)，并計算出各方法換算成 1 000 粒種子的質量，重復10次。

2 結果與分析

2.1 扦樣

本研究采用的各批次種子批的最大總質量為5 000 g，送檢樣品的質量為800 g，進行凈度分析、水分測定和真實性分析時扦樣質量分別為80、50、80 g。

2.2 真實性鑒定

通過種子外觀形態(tài)法，筆者總結出梔子種子的形態(tài)特征，詳見表2。這些特征可以用作梔子種子真實性鑒定的形態(tài)指標。

2.3 凈度分析

梔子種子凈度分析的主要難點在于劃分凈種子、重型雜質、雜質、其他植物種子。通過檢測發(fā)現(xiàn)，本研究所檢驗的樣品中均無其他植物種子，因此不用記錄此項檢測。檢測結果表明，各批次凈種子比率97.82%，雜質比率2.18%，增失差0.05%<5%，因此認為凈度分析結果有效，本分析方法和程序切實可行。

2.4 發(fā)芽試驗

不同溫度和發(fā)芽床對梔子種子的萌發(fā)有影響，統(tǒng)計結果見表3。由表3可見：梔子種子在較高溫度時的萌發(fā)效果較好，在25 ℃以上的溫度時有較高的發(fā)芽率；在25 ℃以下時，發(fā)芽勢很低，且溫度越低，發(fā)芽率也越低。對比30 ℃/20 ℃變溫處理和30 ℃恒溫處理，兩者的發(fā)芽率大都比較接近，但發(fā)芽勢相差較大。此外，研究發(fā)現(xiàn)恒溫處理的出芽比較早，能大致反映出梔子種子的整體發(fā)芽狀況。因此綜合研究結果，梔子種子發(fā)芽的適宜溫度條件為30 ℃恒溫。

2.5 水分測定

用低溫整粒法和高溫整粒法對種子水分進行測定的結果見圖1。由圖1可知，整粒梔子種子在低溫下烘干4～5 h后，失水量保持穩(wěn)定，綜合2個產(chǎn)地各批次種子的情況，低溫烘干法的時間以4h為宜。整粒梔子種子在高溫烘干1.5 h后，失水量保持穩(wěn)定，且在1.5～4 h的烘干條件下失水量變化不明顯。綜合2個產(chǎn)地的種子情況，高溫烘干法的時間以1.5 h為宜。

整粒法和初磨法對梔子種子水分進行測定的結果見圖2。由圖2可知，雖然粗磨之后的種子失水量略高于不處理的種子，但差異不顯著。

此外，整粒法和初磨法檢測到的梔子種子失水量約為10%，與整粒種子經(jīng)高溫烘干1.5 h和低溫烘干4 h的種子失水量相近，且?guī)追N方法的測定值之間差異不顯著?？紤]到低溫烘干法所需時間較長，且粉碎種子工作量較大，因此選擇整粒種子高溫烘干1.5 h作為梔子種子含水量測定方法。

2.6 生活力測定

分別用1%TTC法、0.1%TTC法、0.1%BTB法、5%紅墨水法對梔子種子生活力進行檢測，染色效果見表4，結果表明這幾種方法均能成功地將活的梔子種子染色。

2.6.1 有生活力種子的比率 用不同方法測定梔子種子生活力的比率見表4。檢測結果表明，1%TTC染色法最靈敏，但需要較長時間才能將梔子的活種子著色；其次為0.1%TTC；5%紅墨水染色法和0.1%BTB染色法所需時間較短。

2.6.2 最佳生活力測定方法的確定 以種子生活力測定數(shù)值高低作為衡量染色法效果的標準。表4結果表明：用TTC染色法測定生活力時，最佳TTC濃度為0.1%，染色的最適溫度為30 ℃，時間16 h；濃度為0.1% BTB法染色的最佳染色時間為40 min；濃度為5%紅墨水法染色的最適染色時間為 1 h。但是在利用紅墨水法對種子生活力進行檢測時，對活種子的判斷受操作過程中種子切口的影響，因為切口處的種子細胞很容易被染成紅色，并且由于梔子種子較小，因此容易造成判斷失誤而不宜采用。對比“2.4”節(jié)的相關數(shù)據(jù)，BTB 法所測的生活力數(shù)據(jù)均高于發(fā)芽率，而TTC法所測的生活力數(shù)據(jù)則低于發(fā)芽率，因此本試驗采用BTB法，取0.1% BTB染色40 min為最佳方案。endprint

2.7 質量測定

對各梔子種子質量測定方法的比較分析見表5。由于梔子種子體積比較小，在用百粒法測定梔子種子千粒質量時，10組當中有5組變異系數(shù)大于4.0，系統(tǒng)誤差比較大。而利用五百粒法和千粒法進行測定時，系統(tǒng)誤差影響較小，因此排除百粒法。進一步比較千粒法和五百粒法可知，變異系數(shù)均較小，且所得千粒質量很接近。用SPSS 11.0軟件分析五百粒法和千粒法測定的種子千粒質量結果，沒有顯著性差異，但是由于五百粒法更易操作，因此考慮到工作量和梔子種子屬于小種子的特點，選擇采用500粒法測定梔子種子千粒質量。

3 討論與結論

梔子種皮呈棕紅色，為果肉中所含的色素成分，用清水不易洗凈，因此在進行生活力測定時，會影響TTC法和紅墨水法染色結果的觀察。筆者采用濃硫酸酸蝕5 min的方法去除梔子外種皮便可以消除其影響，但此方法較為繁瑣，且濃硫酸處理有可能殺死種子而造成種子腐爛。BTB法測定梔子種子生活力的原理是種子活細胞通過呼吸作用產(chǎn)生的CO2溶于水，從而增加了胚周圍環(huán)境的酸度，因此BTB試劑可以測定酸度的變化，使活種子周圍的瓊脂凝膠出現(xiàn)黃暈現(xiàn)象，從而可以檢測出有生活力的種子；同時BTB法不需要濃硫酸酸蝕，簡便了操作，測定結果與種子發(fā)芽試驗結果基本一致，因此采用BTB染色法作為最佳生活力測定方法。

種子中的水分按特性可分為自由水、束縛水和化合水[11]。自由水最易分離，它是種子貯藏時影響種子壽命的一個重要因素，因此在進行種子含水量測定時主要測定自由水。種子形成過程中的水分來自植株，但被采收后，如果種子所處環(huán)境中的空氣相對濕度高，種子便從空氣中吸收水分使含水量上升。因此在進行含水量測定時，應選擇在空氣相對濕度低的房間內(nèi)進行。在放冷至室溫的過程中應把樣品放在干燥器中，且每次冷卻至室溫的時間應保持一致。

種子凈度分析后的樣品將被用于測定種子生活力、發(fā)芽率、純度、重量[12]。由于某些種子存在缺陷，明顯小于正常種子，甚至小于正常種子的一半，在篩理的過程中與細小雜質同時被篩下來，因此認為此類種子為一般雜質。為了確保樣品凈度分析的準確性，在篩理之后，將篩內(nèi)物質嚴格地逐粒區(qū)分，同時借助放大鏡、毛刷等工具對區(qū)分后的不同部分進行嚴格檢查，以減少誤差，避免樣品中各成分的缺失。不同大小、質量的種子，重型雜質的大小和質量標準也不一樣，在本試驗中，將質量大于種子10倍以上的雜質列為重型雜質[13]。總的來說，操作人員必須熟悉種子知識，嚴格按照操作規(guī)程操作[14]。

筆者利用本研究建立的梔子種子檢驗規(guī)程，先后測定了其他幾份不同產(chǎn)地梔子種子的發(fā)芽率、凈度和生活力，盡管結果表明不同產(chǎn)地和成熟度的種子，在發(fā)芽率、凈度和生活力等指標上的測定結果有較大差異，但本檢驗規(guī)程中各項指標的檢測方法廣泛適用于梔子種子的質量控制，能夠為中藥材梔子的規(guī)范化生產(chǎn)提供依據(jù)。

本研究通過一系列試驗確定了梔子種子檢驗規(guī)程的合理操作方法，包括扦樣、真實性、凈度、發(fā)芽率、含水量、生活力和千粒質量7項指標。其中扦樣時種子批的最大總質量可選為 5 000 g，送檢樣品質量800 g；凈度、水分和真實性分析時扦樣樣品的質量應不超過100 g。在試驗中可利用梔子種子外觀結構、大小和顏色等形態(tài)特征進行真實性鑒定，凈度分析可按照按國家標準GB/T 3543.1—1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程 總則》的方法進行。發(fā)芽率測定最佳方法為用濾紙作為發(fā)芽床，30 ℃恒溫處理。種子含水量測定用不粉碎的種子高溫烘干1.5 h。生活力測定用BTB法，浸種時間2 h，濃度0.1%，顯色時間40 min。千粒質量的測定用五百粒法。

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[14]馬玉光，曹改萍. 對部分農(nóng)作物《種子質量標準》修訂的商榷[J]. 中國種業(yè)，2013（2）：37-38.endprint

2.7 質量測定

對各梔子種子質量測定方法的比較分析見表5。由于梔子種子體積比較小，在用百粒法測定梔子種子千粒質量時，10組當中有5組變異系數(shù)大于4.0，系統(tǒng)誤差比較大。而利用五百粒法和千粒法進行測定時，系統(tǒng)誤差影響較小，因此排除百粒法。進一步比較千粒法和五百粒法可知，變異系數(shù)均較小，且所得千粒質量很接近。用SPSS 11.0軟件分析五百粒法和千粒法測定的種子千粒質量結果，沒有顯著性差異，但是由于五百粒法更易操作，因此考慮到工作量和梔子種子屬于小種子的特點，選擇采用500粒法測定梔子種子千粒質量。

3 討論與結論

梔子種皮呈棕紅色，為果肉中所含的色素成分，用清水不易洗凈，因此在進行生活力測定時，會影響TTC法和紅墨水法染色結果的觀察。筆者采用濃硫酸酸蝕5 min的方法去除梔子外種皮便可以消除其影響，但此方法較為繁瑣，且濃硫酸處理有可能殺死種子而造成種子腐爛。BTB法測定梔子種子生活力的原理是種子活細胞通過呼吸作用產(chǎn)生的CO2溶于水，從而增加了胚周圍環(huán)境的酸度，因此BTB試劑可以測定酸度的變化，使活種子周圍的瓊脂凝膠出現(xiàn)黃暈現(xiàn)象，從而可以檢測出有生活力的種子；同時BTB法不需要濃硫酸酸蝕，簡便了操作，測定結果與種子發(fā)芽試驗結果基本一致，因此采用BTB染色法作為最佳生活力測定方法。

種子中的水分按特性可分為自由水、束縛水和化合水[11]。自由水最易分離，它是種子貯藏時影響種子壽命的一個重要因素，因此在進行種子含水量測定時主要測定自由水。種子形成過程中的水分來自植株，但被采收后，如果種子所處環(huán)境中的空氣相對濕度高，種子便從空氣中吸收水分使含水量上升。因此在進行含水量測定時，應選擇在空氣相對濕度低的房間內(nèi)進行。在放冷至室溫的過程中應把樣品放在干燥器中，且每次冷卻至室溫的時間應保持一致。

種子凈度分析后的樣品將被用于測定種子生活力、發(fā)芽率、純度、重量[12]。由于某些種子存在缺陷，明顯小于正常種子，甚至小于正常種子的一半，在篩理的過程中與細小雜質同時被篩下來，因此認為此類種子為一般雜質。為了確保樣品凈度分析的準確性，在篩理之后，將篩內(nèi)物質嚴格地逐粒區(qū)分，同時借助放大鏡、毛刷等工具對區(qū)分后的不同部分進行嚴格檢查，以減少誤差，避免樣品中各成分的缺失。不同大小、質量的種子，重型雜質的大小和質量標準也不一樣，在本試驗中，將質量大于種子10倍以上的雜質列為重型雜質[13]?？偟膩碚f，操作人員必須熟悉種子知識，嚴格按照操作規(guī)程操作[14]。

筆者利用本研究建立的梔子種子檢驗規(guī)程，先后測定了其他幾份不同產(chǎn)地梔子種子的發(fā)芽率、凈度和生活力，盡管結果表明不同產(chǎn)地和成熟度的種子，在發(fā)芽率、凈度和生活力等指標上的測定結果有較大差異，但本檢驗規(guī)程中各項指標的檢測方法廣泛適用于梔子種子的質量控制，能夠為中藥材梔子的規(guī)范化生產(chǎn)提供依據(jù)。

本研究通過一系列試驗確定了梔子種子檢驗規(guī)程的合理操作方法，包括扦樣、真實性、凈度、發(fā)芽率、含水量、生活力和千粒質量7項指標。其中扦樣時種子批的最大總質量可選為 5 000 g，送檢樣品質量800 g；凈度、水分和真實性分析時扦樣樣品的質量應不超過100 g。在試驗中可利用梔子種子外觀結構、大小和顏色等形態(tài)特征進行真實性鑒定，凈度分析可按照按國家標準GB/T 3543.1—1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程 總則》的方法進行。發(fā)芽率測定最佳方法為用濾紙作為發(fā)芽床，30 ℃恒溫處理。種子含水量測定用不粉碎的種子高溫烘干1.5 h。生活力測定用BTB法，浸種時間2 h，濃度0.1%，顯色時間40 min。千粒質量的測定用五百粒法。

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2.7 質量測定

對各梔子種子質量測定方法的比較分析見表5。由于梔子種子體積比較小，在用百粒法測定梔子種子千粒質量時，10組當中有5組變異系數(shù)大于4.0，系統(tǒng)誤差比較大。而利用五百粒法和千粒法進行測定時，系統(tǒng)誤差影響較小，因此排除百粒法。進一步比較千粒法和五百粒法可知，變異系數(shù)均較小，且所得千粒質量很接近。用SPSS 11.0軟件分析五百粒法和千粒法測定的種子千粒質量結果，沒有顯著性差異，但是由于五百粒法更易操作，因此考慮到工作量和梔子種子屬于小種子的特點，選擇采用500粒法測定梔子種子千粒質量。

3 討論與結論

梔子種皮呈棕紅色，為果肉中所含的色素成分，用清水不易洗凈，因此在進行生活力測定時，會影響TTC法和紅墨水法染色結果的觀察。筆者采用濃硫酸酸蝕5 min的方法去除梔子外種皮便可以消除其影響，但此方法較為繁瑣，且濃硫酸處理有可能殺死種子而造成種子腐爛。BTB法測定梔子種子生活力的原理是種子活細胞通過呼吸作用產(chǎn)生的CO2溶于水，從而增加了胚周圍環(huán)境的酸度，因此BTB試劑可以測定酸度的變化，使活種子周圍的瓊脂凝膠出現(xiàn)黃暈現(xiàn)象，從而可以檢測出有生活力的種子；同時BTB法不需要濃硫酸酸蝕，簡便了操作，測定結果與種子發(fā)芽試驗結果基本一致，因此采用BTB染色法作為最佳生活力測定方法。

種子中的水分按特性可分為自由水、束縛水和化合水[11]。自由水最易分離，它是種子貯藏時影響種子壽命的一個重要因素，因此在進行種子含水量測定時主要測定自由水。種子形成過程中的水分來自植株，但被采收后，如果種子所處環(huán)境中的空氣相對濕度高，種子便從空氣中吸收水分使含水量上升。因此在進行含水量測定時，應選擇在空氣相對濕度低的房間內(nèi)進行。在放冷至室溫的過程中應把樣品放在干燥器中，且每次冷卻至室溫的時間應保持一致。

種子凈度分析后的樣品將被用于測定種子生活力、發(fā)芽率、純度、重量[12]。由于某些種子存在缺陷，明顯小于正常種子，甚至小于正常種子的一半，在篩理的過程中與細小雜質同時被篩下來，因此認為此類種子為一般雜質。為了確保樣品凈度分析的準確性，在篩理之后，將篩內(nèi)物質嚴格地逐粒區(qū)分，同時借助放大鏡、毛刷等工具對區(qū)分后的不同部分進行嚴格檢查，以減少誤差，避免樣品中各成分的缺失。不同大小、質量的種子，重型雜質的大小和質量標準也不一樣，在本試驗中，將質量大于種子10倍以上的雜質列為重型雜質[13]?？偟膩碚f，操作人員必須熟悉種子知識，嚴格按照操作規(guī)程操作[14]。

筆者利用本研究建立的梔子種子檢驗規(guī)程，先后測定了其他幾份不同產(chǎn)地梔子種子的發(fā)芽率、凈度和生活力，盡管結果表明不同產(chǎn)地和成熟度的種子，在發(fā)芽率、凈度和生活力等指標上的測定結果有較大差異，但本檢驗規(guī)程中各項指標的檢測方法廣泛適用于梔子種子的質量控制，能夠為中藥材梔子的規(guī)范化生產(chǎn)提供依據(jù)。

本研究通過一系列試驗確定了梔子種子檢驗規(guī)程的合理操作方法，包括扦樣、真實性、凈度、發(fā)芽率、含水量、生活力和千粒質量7項指標。其中扦樣時種子批的最大總質量可選為 5 000 g，送檢樣品質量800 g；凈度、水分和真實性分析時扦樣樣品的質量應不超過100 g。在試驗中可利用梔子種子外觀結構、大小和顏色等形態(tài)特征進行真實性鑒定，凈度分析可按照按國家標準GB/T 3543.1—1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程 總則》的方法進行。發(fā)芽率測定最佳方法為用濾紙作為發(fā)芽床，30 ℃恒溫處理。種子含水量測定用不粉碎的種子高溫烘干1.5 h。生活力測定用BTB法，浸種時間2 h，濃度0.1%，顯色時間40 min。千粒質量的測定用五百粒法。

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