小鼠吞噬活性實(shí)驗(yàn)研究

馬宇亮

(黑龍江工業(yè)學(xué)院，黑龍江 雞西 158100)

1 實(shí)驗(yàn)原理

在一定范圍內(nèi)，碳顆粒的清除速率即吞噬速度與血碳濃度成正比，而與已吞噬的碳粒量成反比。也就是說在一定范圍內(nèi)，碳顆粒的清除速率與其劑量呈指函數(shù)關(guān)系。

以前后時(shí)間差為橫座標(biāo)，對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的血碳濃度對(duì)數(shù)差值為縱座標(biāo)，做線性方程。此直線斜率為K(公式1)，可表示吞噬速率，亦可稱為未經(jīng)校正的吞噬指數(shù)。因?yàn)镵值的大小受很多因素的影響，比如動(dòng)物肝脾的重量不等，K值不同等。所以，一般用a(公式2)表示校正過的吞噬指數(shù)。公式如下：

公式1

公式2

其中，a反映了每單位組織重量的吞噬活性。

2 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑

分光光度計(jì)(上海將來實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)

計(jì)時(shí)器(廣州?？俗詣?dòng)化設(shè)備有限公司)

血色素吸管(江蘇省姜堰市瑞康醫(yī)療器械有限公司)

注射器(黑龍江省哈泉醫(yī)療器械制品有限公司

墨汁(市售)

黃芪水溶性粉(自制)

樺木水溶性粉 (自制)

Na2CO3(中國藥品生物制品檢定所)

3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)小鼠，體重30g-35g。

4 實(shí)驗(yàn)步驟

4.1 分組給藥。

用黃芪水溶性粉和樺木水溶性粉配制濃度分別為0.5mg/ml、1mg/ml和1.5mg/ml的低、中、高劑量藥液。將小鼠分為7組，分別為空白組,正常給食。黃芪[1]低劑量組，黃芪中劑量組，黃芪高劑量組，樺木[2]低劑量組，樺木中劑量組，樺木高劑量組，每組7只，一天灌胃一次，一次0.5ml，共30天。

4.2 溶液配制。

注射用墨汁的配制：將市售墨汁用0.9%NaCl溶液稀釋3～4倍

Na2CO3溶液的配制：準(zhǔn)確稱量Na2CO3固體0.1g，加蒸餾水，用100ml容量瓶定容。

4.3 注射。

準(zhǔn)確稱量每只實(shí)驗(yàn)小鼠的體重，重復(fù)3-5次取平均。然后按每10g體重0.1ml 計(jì)量計(jì)算給小鼠尾靜脈注射配制好的墨水。注入后馬上開始記時(shí)。

4.4 數(shù)據(jù)的測(cè)定。

記時(shí)2min，從內(nèi)眥靜脈叢取血20μL，將取出的血液立即加到 2ml 配制好的Na2CO3溶液中，充分混合，以配制好的Na2CO3溶液作空白，然后用分光光度計(jì)在600nm波長處測(cè)所得樣品的OD值。

然后解剖小鼠，分別取出肝和脾，用濾紙吸干表面血污，然后分別準(zhǔn)確稱出肝和脾的重量，記錄數(shù)據(jù)。

5 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)論

結(jié)果判斷以計(jì)算出的樣品的吞噬指數(shù)與空白組吞噬指數(shù)的差值為依據(jù)，大于零的為陽性，說明吞噬活性更好，免疫力更強(qiáng)；反之為陰性。每組3只小鼠求平均。

表1 小鼠體重、肝重、脾重?cái)?shù)據(jù)

表2 測(cè)得的樣品OD值及對(duì)應(yīng)的對(duì)數(shù)值

表3 計(jì)算得出相應(yīng)的K值、a值及平均值

由以上表中數(shù)據(jù)計(jì)算出空白組吞噬指數(shù)的平均值為4.98，黃芪低劑量組的平均吞噬指數(shù)為5.57，黃芪中劑量組的平均吞噬指數(shù)為5.50，黃芪高劑量組的平均吞噬指數(shù)為5.17，樺木低劑量組的平均吞噬指數(shù)為4.40，樺木中劑量組的平均吞噬指數(shù)為4.29，樺木高劑量組的平均吞噬指數(shù)為4.49。

由數(shù)據(jù)可以看出，樣品黃芪組與空白組吞噬指數(shù)的差值大于零，陽性；樣品樺木組與空白組吞噬指數(shù)的差值小于零，陰性。結(jié)果說明黃芪組小鼠的吞噬活性更好，免疫力更強(qiáng)。

[1]羅千古, 周玖瑤，等. 黃芪丹參提取液對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的影響[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2011,08 (2).

[2]易金娥, 袁莉蕓，等. 樺木酸對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的影響分析[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2011,42 (1).