GC法測定維吾爾藥阿育魏果中麝香草酚的含量

穆 建, 佟瑞敏， 蘇來曼·哈力克

(新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所， 烏魯木齊 830004)

阿育魏果為傘形科植物細(xì)葉糙果芹[Trachyspermumammi(L.)Sprague.]的成熟果實(shí)，維吾爾語名稱“Juwine”,音譯為“居維納”，漢語通用名稱為“阿育魏果”[1-2]，是維吾爾醫(yī)常用的藥材品種，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)：維吾爾藥分冊》[3]。阿育魏果所含的麝香草酚對口腔、咽喉黏膜細(xì)菌和真菌有抑制作用，對齲齒有防腐、局麻作用，還可用于皮膚化膿性感染及真菌和放線菌病，此外有驅(qū)鉤蟲作用。阿育魏果油可毒害蚯蚓，其醇提取物(10%)對葡萄糖球菌、大腸桿菌有抑制作用，稀釋后可作祛痰劑[4-5]。有關(guān)研究表明阿育魏果乙醇提取物中含有麝香草酚、槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、胡蘿卜苷、東莨菪內(nèi)酯、山奈素、羥基桂皮酸、4-羥基薄荷-l-烯-7-酸、6-羥基麝香草酚6-O-β-D葡萄糖等[6-14]。阿育魏果中槲皮素的HPLC含量測定已見報(bào)道[15]，但未見麝香草酚含量測定的相關(guān)報(bào)道。本研究首次采用毛細(xì)管柱程序升溫的分離檢測方法對不同產(chǎn)地的阿育魏果中揮發(fā)性成分麝香草酚進(jìn)行含量測定，為建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器Agilent 7890A氣相色譜儀(美國)，KLZ-UP超純水儀,KUDOS SK7210LHC型超聲儀。

1.2試劑麝香草酚對照品(含量：99.9%，批號：100508-200902)購自中國食品藥品檢定研究院。乙醇為無水乙醇，甲醇等其他試劑均為分析純。

1.3樣品不同產(chǎn)地阿育魏果樣品10批(批號分別為20130301、20120501、20121115、 20130301、20130516、20130515、20130511、20130520、20130512、20111111)，經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所蘇來曼·哈力克主任藥師鑒定均為傘形科植物植物細(xì)葉糙果芹[Trachyspermumammi(L.)Sprague.]的成熟干燥果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的制備精密稱取麝香草酚對照品適量，加無水乙醇制成每1 mL含1.20 mg的溶液，即得。

2.2供試品溶液的制備精密稱取經(jīng)粉碎過3號篩(50目)的阿育魏果粉末1 g,置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇20 mL,密塞，搖勻，稱重，超聲處理(功率350 kW，59 KHz)20 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用無水乙醇補(bǔ)齊減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)以Agilent HP-5(30 m×0.32 mm,0.25 μm)為色譜柱，柱溫50 ℃，恒溫2 min,以10 ℃/min 升溫至230 ℃保持10 min。進(jìn)樣口溫度200 ℃, 柱流速1 mL/min，進(jìn)樣量1 μL，采用FID檢測器，檢測器溫度250 ℃，分流比為20∶1；載氣為氮?dú)?；理論塔板?shù)以麝香草酚計(jì)應(yīng)不低于100 000，樣品色譜圖中麝香草酚的分離度>1.5，見圖1。

A：對照品溶液； B：供試品溶液； 1：麝香草酚

2.4線性關(guān)系考察精密稱定麝香草酚對照品適量，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成麝香草酚的對照品貯備溶液。精密吸取不同體積的對照品貯備溶液，稀釋成不同濃度的系列溶液: 0.20、0.40、1.00、1.20、2.00 mg/mL各進(jìn)樣1 μL，按上述色譜條件測定峰面積。以對照品的濃度(Y)對峰面積(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=743.71X-2.41,r=0.999 9，結(jié)果表明麝香草酚在0.20～2.00 mg/mL范圍內(nèi)與其峰面積線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn)取同一樣品(批號：20130515)，按照“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。在24 h內(nèi)重復(fù)進(jìn)樣6次，測定麝香草酚峰面積。結(jié)果峰面積的RSD為0.22%，表明日內(nèi)精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一樣品(批號：20130515)，按照“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。分別在0、5、11、17、24 h進(jìn)樣，測定麝香草酚的峰面積，結(jié)果峰面積的RSD為1.38%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一樣品(批號：20130515)，按照“2.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6份，測定麝香草酚峰面積，結(jié)果峰面積的RSD為1.65%，并計(jì)算麝香草酚的含量，其含量為2.58%、2.47%、2.60%、2.55%、2.55%、2.61%，平均值為2.56%，RSD=1.98%(n=6),表明方法重現(xiàn)性良好。

2.8加樣回收率試驗(yàn)取麝香草酚對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成12.63 mg/mL的溶液。精密稱定同一樣品(批號：20100515)粉末過3號篩(50目)約0.5 g，稱取6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入1 mL對照品溶液，再精密加入無水乙醇19 mL，稱定重量，超聲處理(功率350 kW，59 KHz)20 min，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補(bǔ)齊減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。照“2.3”項(xiàng)下色譜法測定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果麝香草酚平均回收率為100.47%，RSD為1.60%，見表1。

表1 麝香草酚加樣回收率結(jié)果

2.9樣品含量測定取不同產(chǎn)地的10 批樣品，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。按“2.3”含量項(xiàng)下色譜條件測定樣品麝香草酚的峰面積，代入回歸方程，計(jì)算樣品中麝香草酚的含量。結(jié)果表明10 批阿育魏果麝香草酚含量較為接近，10批樣品麝香草酚含量為1.884%～3.311%,平均含量為2.444%,見表2。

表2 10批阿育魏果藥材麝香草酚含量測定結(jié)果

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)嘗試?yán)貌煌V柱(Agilent HP-5型及Agilent HP-Innowax型氣相色譜柱)、不同檢測方法(200 ℃恒溫及程序升溫)來檢測分離麝香草酚，最終確定的方法雖然空白有噪聲干擾，但并不影響麝香草酚與其他成分的分離及測定，而其他方法均達(dá)不到分離的目的。因此，本研究最終選擇了程序升溫的色譜條件并將阿育魏果揮發(fā)油中含量較高、藥理活性明確、對照品容易分離純化的麝香草酚作為含量控制指標(biāo)，對阿育魏果藥材的質(zhì)量進(jìn)行量化。

供試品溶液制備溶液分別采用無水乙醇和無水乙醇為提取溶劑、并分別采用不同提取時間(10、20、30 min)以及不同提取溶劑用量(20、40 mL)進(jìn)行了樣品提取方法考察，結(jié)果以加入20 mL無水乙醇為溶劑，超聲處理20 min提取效果最佳。

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