TLCS 法測定菊花七味膠囊中膽酸的含量

劉德旺 蔡 敏* 岳秀峰

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010057； 2.呼和浩特市環(huán)境保護(hù)科學(xué)研究所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018)

菊花七味膠囊為蒙成藥，蒙文名為烏達(dá)巴拉-7。收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》蒙藥分冊。按照《藥品注冊管理辦法》(試行)中有關(guān)提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求，參照《中國藥典》2000 年版一部、衛(wèi)生部部標(biāo)準(zhǔn)等文獻(xiàn)資料，對處方中人工牛黃所含的活性成分膽酸進(jìn)行了含量測定的試驗摸索，結(jié)果滿意。

1 儀器與試藥

1.1 儀器: CS-9301 PC 型薄層掃描儀，SPU -1 自動噴霧器，日本島津公司。PBQⅡ自動鋪板器，重慶南岸新力實驗電器廠。

1.2 試藥與試劑: 膽酸對照品(0078—9312 供含量測定用)中國藥品生物制品檢定所;菊花七味膠囊由內(nèi)蒙古惠豐藥業(yè)有限公司提供。所用試劑均為分析純。

2 方法學(xué)考察

2.1 薄層板的制備: 取硅膠G 適量，加0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液(1: 3)，用電動混漿器混勻，鋪成0.4mm 厚薄層板，室溫干燥后，于105℃活化1 小時，置干燥器中備用。

2.2 展開劑: 異辛烷-醋酸丁酯-冰醋酸-甲酸(8: 4: 2: 1)。

2.3 顯色劑: 10%硫酸乙醇溶液。

2.4 薄層掃描條件: 采用雙波長反射法鋸齒掃描，狹縫1.25mm×1.25mm，CH=1;SX=3，掃描速度20mm/min;靈敏度×1。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制: 精密稱取膽酸對照品9.62mg，置10mL 量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，精密吸取膽酸對照品溶液1、2、3、4、5μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以異辛烷-醋酸丁酯-冰醋酸-甲酸(8: 4: 2: 1)為展開劑，展至14cm，取出，晾干，噴以10% 硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法(中國藥典2000 年版一部 附錄ⅥB 薄層掃描法)進(jìn)行掃描，測定面積積分值。以對照品量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=0.700 +54.158X，r =0.9992，n=5。膽酸在0.962μg ～4.81μg 范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.6 穩(wěn)定性試驗: 精密吸取對照品溶液(0. 962mg/mL)3μL、供試品溶液4μL，點于硅膠G 薄層板上，依法操作，每隔30min 掃描測定1 次，結(jié)果表明膽酸在90min 內(nèi)峰面積積分值穩(wěn)定。

2.7 精密度試驗

2.7.1 同板精密度: 取配制好的對照品溶液(0.947mg/mL)與供試品溶液，用進(jìn)樣器精密吸取對照品溶液3μL 和供試品溶液4μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，各點6 個點，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文［含量測定］項下的方法測定峰積分值。膽酸對照品積分值的相對偏差為2.28%，供試品中膽酸積分值的相對偏差為2.92%，結(jié)果見表1。

表1 菊花七味膠囊中膽酸同板精密度試驗結(jié)果

2.7.2 異板精密度: 精密吸取對照品溶液2μL、4μL 和供試品溶液4μL，分別點于5 塊硅膠G 薄層板上，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文［含量測定］項下的方法測定峰面積積分值，供試品中膽酸含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.73%，結(jié)果見表2。

表2 菊花七味膠囊中膽酸異板精密度試驗結(jié)果

2.8 重復(fù)性試驗: 取同一批號供試品(批號: 040401)5 份，各約0.79g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理30min，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，作為供試品溶液。分別按［含量測定］項下方法操作，測定每份含量。5 份供試品的平均含量為36.03mg/g，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.25%。

2.9 加樣回收試驗: 取已知含量的供試品(批號: 040401含量為36.03mg/g)5 份，各約0.4g，精密稱定，分別定量加入膽酸對照品，按上述供試品制備方法和薄層色譜條件操作，測定，計算回收率，結(jié)果見表3。

表3 菊花七味膠囊中膽酸加樣回收試驗結(jié)果

2.10 供試品含量測定: 取本品內(nèi)容物，按擬定方法處理并測定，結(jié)果見表4。

表4 菊花七味膠囊中膽酸含量測定結(jié)果

3 討 論

3.1 本品是由人工牛黃、五靈脂、石膏、紅花、麥冬、苦參、菊花等7 味組成的蒙藥復(fù)方制劑，其中人工牛黃為君藥?！吨腥A人民共和國衛(wèi)生部·部頒標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定: 人工牛黃為貝斯素、膽酸、豬去氧膽酸、膽紅素等配制而成。因此，以人工牛黃中的主要成分膽酸為內(nèi)在質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)，采用TLCS法測定其含量，經(jīng)方法學(xué)考察和3 批供試品的測定結(jié)果表明，本法簡便、靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為本品生產(chǎn)及成品質(zhì)量控制的有效方法。

3.2 掃描波長的選擇: 取未加入人工牛黃配制的模擬制劑，制成陰性供試品膠囊。分別稱取人工牛黃藥材、供試品、陰性供試品，同法操作，制成人工牛黃藥材溶液、供試品溶液、對照品溶液、陰性供試品溶液。按薄層色譜條件依法操作，經(jīng)展開后的斑點，于350 ～700nm 范圍內(nèi)作光譜掃描。從掃描圖譜可以看出供試品中膽酸在380nm 有最大吸收，陰性供試品無吸收。因此，確定380nm 為測定波長，650nm 為參比波長。

3.3 供試品提取條件的選擇

3.3.1 回流提取法［1、2］: 取供試品約0.65g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇50mL，85℃水浴中加熱回流提取6h，回收溶劑，殘渣加甲醇使溶解，置10mL 量瓶中，加甲醇至刻度。按擬定方法測定，結(jié)果回流提取6h 后測定的含量為32.76mg/g (n=5)。

3.3.2 超聲處理法［3］: 取供試品5 份，各約0.65g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，分別超聲處理10、20、30、40、50 分鐘，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，作為供試品溶液。按擬定方法測定。含量分別為18.12、33.97、36.88、35.26、35.59mg/g (n=5)。結(jié)果表明超聲處理30min 時含量最高。

3.3.3 加酸超聲處理法: 取供試品2 份，各約0.65g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50mL 與稀鹽酸2mL(pH4～5)，密塞，稱定重量，超聲處理30min，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，作為供試品溶液。按擬定方法測定。加酸超聲處理30min 后測定含量為32.82g/g。

試驗驗證，3 種提取方法中，超聲處理法的膽酸含量最高，且操作簡便，供試品超聲處理30 分鐘后即可提取完全，因此正文采用超聲處理30min 的條件。

3.3.4 陰性對照試驗: 取供試品約0.79g，按擬定方法制備供試品溶液;另取缺人工牛黃配制成的模擬制劑，同法制備陰性空白供試品溶液，分別點于同一硅膠G 薄層板上，按擬定的薄層色譜條件測定，結(jié)果陰性供試品在與對照品色譜相應(yīng)的Rf 值處無對應(yīng)斑點，試驗確證處方中其他藥味無干擾。

［1］周雪梅，等.一階導(dǎo)數(shù)光譜法測定蒙成藥喜木勒-3 人工牛黃膽酸的含量［J］.中成藥，1997.11(19) ：15.

［2］荀雅書，等. 薄層掃描法測定蒙成藥中膽酸的含量［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，1999.7(5) ：3.

［3］國家藥典委員會.中國藥典［S］.附錄ⅤA.中國醫(yī)藥科技出版社，2010.