HPLC 測(cè)定維吾爾藥散寒藥茶丁香酚的含量

司馬義江·阿布都熱西提 阿依努爾·阿木提 阿卜來(lái)海提·阿卜杜瓦伊提

(新疆喀什地區(qū)藥品檢驗(yàn)所，新疆 喀什 844000)

散寒藥茶是新疆維吾爾族名藥之一，具有調(diào)解寒性氣質(zhì)，養(yǎng)胃，助食，爽神等功效。用于濕寒所致的消化不良，關(guān)節(jié)骨痛，腰腿痛，頭痛神疲。維吾爾藥茶由小豆蔻、纈草、茴芹果、肉桂、草果、肉桂子、高良姜、蓽苃、小茴香、丁香、梔子、芹菜籽等12 味藥材混合，粉碎，過(guò)篩，混勻制成。屬部頒標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊(cè)收錄品種［1］。這12 味藥材中丁香具有溫中降逆、補(bǔ)腎助養(yǎng)功能，用于脾胃虛寒，呃逆嘔吐，食少吐瀉，心腹冷痛，腎虛陽(yáng)痿［2］。部頒標(biāo)準(zhǔn)僅采用定性鑒別試驗(yàn)來(lái)控制該制劑的質(zhì)量。研究該成分的含量測(cè)定方法可以更好的反映和控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量。

1 儀器和試藥

儀器: 日本島津公司LC 20AT 高效液相色譜系統(tǒng);島津uv-2450 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì);德國(guó)賽多利斯BP211D型分析天平;上海必能超聲波有限公司CQX25 -12 型超聲波清洗器。

試藥: 丁香酚對(duì)照品(110725 -201213 99.7% ): 中國(guó)藥品生物制品鑒定所;樣品: 散寒藥茶 新疆維吾爾藥業(yè)有限責(zé)任公司(市售品 批準(zhǔn)文號(hào): 國(guó)藥準(zhǔn)字Z65020178、批號(hào): 130728、130933、131245);甲醇: 色譜純(美國(guó)TEDIA 試劑公司);所有色譜用試劑均用O.45μm 微孔濾膜過(guò)濾;水為重蒸餾水;其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件: 色譜柱Inertsil ODS - SP (250 ×4. 6mm 5μm);流動(dòng)相: 甲醇-5%甲醇溶液(50: 50);流速lmL.min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)225 nm;柱溫: 25℃;進(jìn)樣量: l0μL;分析方法: 外標(biāo)法［2］。

2.2 溶液的制備: 精密稱取丁香酚對(duì)照品0.09993g，置50mL 容量瓶中，加流動(dòng)相溶解制成每1mL 中含1.9986mg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL置50mL 容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL 中含0.19986mg 的溶液作為對(duì)照品溶液。取樣品1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動(dòng)相50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30min，擦干，放冷，再稱定重量，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液即得供試品溶液。按散寒藥茶原標(biāo)準(zhǔn)的處方、工藝制備不含丁香的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn): 分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液，在2.1 的色譜條件下測(cè)定。結(jié)果: 供試品溶液相應(yīng)色譜峰與對(duì)照品丁香酚一致。丁香酚對(duì)照品保留時(shí)間為22min，理論塔板數(shù)大于10000。陰性對(duì)照溶液無(wú)相應(yīng)的色譜峰出現(xiàn)。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 丁香酚HPLC 色譜圖

2.3.2 線性關(guān)系考察: 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液(1.9986mg.mL-1)2.0、3.0、4.0、5.0、7.5、10.0mL，置25mL 量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別取10μL，按“2.1”色譜條件下操作，以6 次測(cè)定的峰面積平均值。以峰面積A 為縱坐標(biāo)，丁香酚對(duì)照品溶液濃度(μg. mL-1)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:

2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn): 精密量取對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液(1.9986mg.mL-1)5mL 置25mL 量瓶中加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取10μL，重復(fù)進(jìn)樣5 次，以峰面積計(jì)算RSD(n =5)為0.56%。證明本法及儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn): 取同一批號(hào)本品(批號(hào)為131245)，按“2.2”方法配制溶液，分別于O、1、2、4、6h 進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10μL，測(cè)定丁香酚的峰面積，RSD 為1.2%，表明峰面積基本無(wú)變化，說(shuō)明供試品溶液在12h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn): 精密量取已知含量的樣品(批號(hào)為131245，含量11. 706mg. g-1)稱取1g，精密 稱定，置50mL 容量瓶中，精密加入丁香酚對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液(濃度為1.9986mg.mL-1)5mL，再加流動(dòng)相適量密塞，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30min，放冷，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為加樣回收率樣品。同法制備6 份加樣回收率樣品。按照樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)

3 樣品測(cè)定

取3 批樣品按“2.2”方法制備供試品溶液，按“2.1”色譜條件下測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算丁香酚的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。對(duì)照品和供試品色譜圖見(jiàn)圖1

表2 散寒藥茶中丁香酚的含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討 論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取丁香酚對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并稀釋成0.2mg.mL-1溶液，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于200 ～400nm 處進(jìn)行掃描，從其紫外圖譜中可見(jiàn)其在225nm、280nm 處有最大吸收，但在225nm 處吸收比較強(qiáng)，故選擇225 nm 為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇［3］

報(bào)道的方法試驗(yàn)，流動(dòng)相用甲醇- 水(65: 35)［3］，甲醇-水(58: 42)［4］，由于散寒藥茶處方中有十多味藥材，雜峰較多，丁香酚的分離效果不佳，通過(guò)不斷改變甲醇與水的比例及流速，選定甲醇-5%甲醇溶液(50: 50)及流速lmL.min-1比較合適，分離度及保留時(shí)間適宜。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同批號(hào)的散寒藥茶，以不同的時(shí)間(30min，60min)進(jìn)行超聲處理進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果均能檢出丁香酚，其含量無(wú)明顯差異，所以選擇超聲處理30min。本篇通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，建立了散寒藥茶中丁香酚含量的測(cè)定方法，方法簡(jiǎn)便，快速，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為散寒藥茶的質(zhì)量控制方法。

參考文獻(xiàn)

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊(cè)［S］.1998 ﹕155.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典［M］.一部. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010 ﹕4.

［3］余小平. 高效液相色譜法測(cè)定丁香中丁香酚的含量［J］.中國(guó)藥物分析雜志，2008，6(28)

［4］吳軍俠，趙紅俠，高效液相色譜法測(cè)定蒙藥暖宮七味散中丁香酚含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2010，5(19)