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    泰興地區(qū)乙型肝炎病毒基因型分布與臨床意義

    2014-07-02 01:16:26朱新功何小峰楊建功張會愛
    海南醫(yī)學(xué) 2014年2期
    關(guān)鍵詞:病毒基因泰興乙型肝炎

    黃 兵,朱新功,何小峰,楊建功,張會愛

    (揚州大學(xué)醫(yī)學(xué)院、蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬泰興市人民醫(yī)院感染科,江蘇 泰興 225400)

    泰興地區(qū)乙型肝炎病毒基因型分布與臨床意義

    黃 兵,朱新功,何小峰,楊建功,張會愛

    (揚州大學(xué)醫(yī)學(xué)院、蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬泰興市人民醫(yī)院感染科,江蘇 泰興 225400)

    目的 了解泰興地區(qū)乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布情況,探討HBV基因型與臨床的相關(guān)性。方法 選擇HBV慢性感染者138例,其中慢性乙型肝炎(CHB)病例113例,肝硬化病例25例,采用熒光定量PCR法測定HBV基因型,并結(jié)合臨床資料進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果 138例病例中,基因B型46例(33%),C型89例(65%),B/C混合型1例(0.7%),非B非C型2例(1.4%);CHB組中,B、C基因型在ALT、HBV DNA、HBeAg陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);C基因型在CHB重度占77%、肝硬化中占80%,B基因型在CHB重度占20%,肝硬化中占20%,C基因型在CHB重度、肝硬化中比例明顯升高。結(jié)論 本地區(qū)HBV基因型中以C型為主,其次為B型,有少量B/C混合型及其他類型,C基因型往往較B基因型病情嚴(yán)重。

    乙型肝炎病毒;基因型;熒光定量PCR;分布;臨床意義

    乙型肝炎病毒基因型的概念首先由日本學(xué)者Okamoto等[1]在1988年提出,根據(jù)全基因組序列差異≥8%作為分型標(biāo)準(zhǔn),1992年Noder等[2]又提出了S區(qū)基因序列差異≥4%的分型標(biāo)準(zhǔn),目前,已發(fā)現(xiàn)A-I 9個基因型[3-5]。不同基因型有各自的病毒生物學(xué)特點,感染后與疾病的進展有顯著相關(guān)性。HBV基因型有明顯的地域分布,我國地區(qū)以B、C基因型為主[6],故我們選擇商用乙型肝炎病毒基因分型診斷試劑盒(熒光定量PCR法)對泰興地區(qū)138例HBV慢性感染者進行了檢測,并分析其與臨床相關(guān)性。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 收集2012年1月至2013年3月泰興市人民醫(yī)院感染科部分住院患者共138例,其中男性104例,女性34例,年齡17~66歲,平均(37.9±10.2)歲,其中慢性乙型肝炎(CHB)113例,代償期肝硬化25例,所有病例診斷均符合2000年《病毒性肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)。

    1.2 標(biāo)本采集 采集患者的空腹靜脈血3 ml,試管2 000 g離心10 min,取分離出的血清0.2 ml左右,-20℃凍存待檢,為保證HBV基因型的檢查,入選病例檢測前HBV DNA>1.0×103Coppies/ml。

    1.3 血清生化、病毒標(biāo)志物檢測 血清生化檢測儀器為Olympus Au5800全自動生化分析儀;血清HBV標(biāo)志物采用羅氏診斷試劑盒,電化學(xué)發(fā)光法檢測。

    1.4 HBV基因型測定 美國Stratagen MS3000P PCR擴增儀檢測,HBV基因分型試劑盒(PCR熒光法)購自上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司,具體操作方法嚴(yán)格按照說明書,結(jié)果判斷見表1。

    表1 基因結(jié)果判斷

    1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 -采用Epi info6.0統(tǒng)計軟件,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,均數(shù)比較采用t檢驗,率的比較采用χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 HBV基因型的分布特點 138例HBV慢性感染者中,B基因型46例(33%),C基因型89例(64%),B/C混合基因型1例(0.7%),非B非C型2例(1.4%),提示本地區(qū)以C基因型為主,其次為B基因型,有少量的B/C混合基因型及其他類型的基因型。

    2.2 慢性乙型肝炎患者不同基因亞型臨床特點 慢性乙型肝炎113例,B基因型36例,男性所占比例為75%(27/36),C基因型74例,男性所占比例為78%(58/74),兩組資料在性別上差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.877),同時在ALT水平(P=0.826)、HBeAg陽性率(P=0.257)、HBV DNA載量水平(P=0.848)上,兩組之間差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);B/C混合基因型及非B非C型因樣本量少未列入統(tǒng)計,見表2。

    表2 CHB組中不同基因型臨床資料特點(±s)

    表2 CHB組中不同基因型臨床資料特點(±s)

    注:C基因與B基因比較,aP值均>0.05。

    2.3 不同病情患者各基因型分布情況 CHB輕度、中度兩組資料中,C基因與B基因所占比例相當(dāng),差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。而隨著病情的進展,在CHB重度、代償期肝硬化兩組資料中,C基因型所占比例明顯高于B基因型,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05),見表3。

    表3 不同基因型與臨床診斷之間的關(guān)系[例(%)]

    3 討論

    HBV基因型分析測定方法眾多,我國《慢性乙型肝炎防治指南》上,有直接DNA序列分析法、聚合酶鏈反應(yīng)-限制性長度多態(tài)性分析(RFLP)、單克隆抗體酶聯(lián)免疫法(ELISA)、多對型特異引物巢式PCR基因分型及S基因測序法等,但上述檢測方法或多或少存在操作繁瑣、技術(shù)要求高、費用昂貴等劣勢,較難在臨床工作中廣泛開展。鑒于我國慢性HBV感染者中以B、C基因型為主,故我們采用了商用熒光PCR檢測試劑盒(針對B、C基因型設(shè)計),它有檢測技術(shù)成熟、操作快捷、靈敏度高、費用低廉等優(yōu)勢。

    我國HBV慢性感染者中,北方地區(qū)以C基因型為優(yōu)勢,而隨著地理位置的南移,逐漸以B基因型為主。本地區(qū)為江蘇中部地區(qū),相關(guān)HBV基因型測定工作尚未大樣本量開展,故我們對138例HBV慢性感染者做了檢測,提示本地區(qū)以C基因型為主,次之為B基因型,與經(jīng)繼生等[7]報道一致,當(dāng)然仍需更大樣本量求證。

    更多證據(jù)表明[8-9],HBV基因型與肝臟疾病進展、臨床轉(zhuǎn)歸、治療療效均有一定關(guān)系,C基因型比B基因型HBV感染后更容易導(dǎo)致肝臟炎癥活動、肝纖維化、肝硬化、肝癌的進展,但也有報道認(rèn)為B基因較C基因易導(dǎo)致嚴(yán)重的臨床病情[10-11]。

    本研究CHB患者組中,ALT水平、HBV DNA病毒載量,B、C基因型之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,HBeAg陽性率C基因組較B基因組高,但差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義,與楊家紅等[12]報道一致。從B、C兩種主要基因在疾病譜中分布情況來看,發(fā)現(xiàn)從CHB輕度~重度、肝硬化四組中,B基因比例逐漸下降,而C基因比例逐漸升高,本研究支持C基因更易導(dǎo)致病情進展的觀點。

    [1]Okamoto H,Tsuda F,Sakugawa H,et al.Typing hepatitis B virus by homology in nucleotide sequence:comparison of surface antigen subtypes[J].J Gen Virol,1988,69(10):2575-2583.

    [2]Norder H,Courouce AM,Magnius LO.Complete genomes,phylogenetic relatedness,and structural proteins of six strains of the hepatitis B virus,four of which represent two new genotypes[J].Virology,1994,198(2):489-450.

    [3]CaoGW.ClinicalrelevanceandpublicsignificanceofhepatitisBvirusgenomicvariations[J].WorldJGastroenterol,2009,15(46):5761-5769.

    [4]TranTT,TrinhTN,AbeK.NewcomplexrecombinantgenotypeofhepatitisBvirusidentifiedinVietnam[J].JVirol,2008,82(11):5657-5663.

    [5]Olinger CM,Jutavijittum P,Hubschen JM,et al.Possible new hepatitis B virus genotype,southeast Asia[J].Emerg Infect Dis,2008,14 (11):1777-1780.

    [6]高俊薇,李雅娟,莊 輝,等.中國11城市乙型肝炎病毒慢性感染中乙型肝炎病毒基因型分布[J].中華流行病學(xué)雜志,2007,28(4): 315-318.

    [7]經(jīng)繼生,黃 培,阮成榮,等.江蘇省乙型肝炎病毒基因型分布與臨床相關(guān)性[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2006,16(2):123-126,129.

    [8]Kobayashi MA,Suzuki F,Akuta N,et al.Correlation ofYMDD mutation and breakthrough hepatitis with hepatitis B virus DNA and serum ALT duringlamivudinetreatment[J].HepatolRes,2010,40:125-134.

    [9]丁靜娟,張 權(quán),彭 亮,等.貴州省四城市乙型肝炎病毒感染者病毒基因型調(diào)查研究[J].中華流行病學(xué)雜志,2006,27(11):977-980.

    [10]劉映霞,胡國齡,譚德明,等.湖南省乙肝病毒基因型分布及臨床意義[J].湖南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2002,27(1):29-31.

    [11]趙 紅,李 俊,張躍新,等.乙型肝炎病毒基因型與國產(chǎn)阿德福韋酯片療效相關(guān)性的研究[J].中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志,2007, 21(3):282-284.

    [12]楊家紅,張 浩,張 健,等.四川省德陽地區(qū)慢性乙型肝炎病毒感染者病毒基因型的分布與臨床意義[J].中華傳染病雜志,2011, 29(12):752-755.

    Distribution of hepatitis B virus genotyps in Taixing area and its clinical significance.

    HUANG Bing,ZHU Xin-gong,HE Xiao-feng,YANG Jian-gong,ZHANG Hui-ai.
    Department of Infectious Diseases,Taixing People's Hospital Affiliated to Medical College of Yangzhou University and Bengbu Medical College,Taixing 225400,Jiangsu,CHINA

    Objective To investigate the distribution of hepatitis B virus(HBV)genotypes in Taixing,and explore its clinical relationship.MethodsAtotal of 138 patients with chronic HBV infection,including 113 cases of chronic hepatitis B(CHB)and 25 cases of liver cirrhosis,were enrolled.Quantitative fluorescence PCR was used for determination of serum HBV genotyping,then the results were analyzed by statistical method.ResultsOf the 138 patients,46 (33%)were genotype B,89(65%)were genotype C,1(0.7%)were genotype B/C mixed;2(1.3%)were neither genotype B nor genotype C.In CHB patients,genotype B and genotype C had no significant differences between the ALT value, HBV DNAlevels and HBeAg positivity;genotype C showed a gradual increase in severe CHB and liver cirrhosis patients. Conclusion The predominant HBV genotypes in the district are confirmed to be genotype C,then,genotype B,few genotype B/C mixed and neither genotype B nor genotype C.Genotype C cause more serious hepatic lesion than genotype B.

    Hepatitis B virus;Genotype;Quantitative fluorescence PCR;Distribution;Clinical significance

    R512.6+2

    A

    1003—6350(2014)02—0206—02

    2013-07-17)

    江蘇省泰州市科技局科研項目(編號:TS2010102)

    朱新功。E-mail:zxgccfzyh@sina.com

    10.3969/j.issn.1003-6350.2014.02.0077

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