卵巢癌相關(guān)腫瘤睪丸抗原的研究進(jìn)展

江敬紅 昌曉紅 崔 恒

作者單位：100044 北京 北京大學(xué)人民醫(yī)院婦科腫瘤中心

專家論壇

卵巢癌相關(guān)腫瘤睪丸抗原的研究進(jìn)展

江敬紅 昌曉紅 崔 恒

作者單位：100044 北京 北京大學(xué)人民醫(yī)院婦科腫瘤中心

崔恒，教授、主任醫(yī)師、博士研究生導(dǎo)師?，F(xiàn)任北京大學(xué)人民醫(yī)院婦科腫瘤中心主任，中華醫(yī)學(xué)會(huì)婦科腫瘤學(xué)分會(huì)副主任委員、婦產(chǎn)科學(xué)分會(huì)常委、婦科內(nèi)鏡學(xué)組成員，中國(guó)生物醫(yī)藥技術(shù)協(xié)會(huì)理事，《中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜志》副主編，《中華婦產(chǎn)科雜志》、《現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展》、《中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志》等多種期刊編委或常務(wù)編委。從事婦科腫瘤臨床和基礎(chǔ)研究工作近30年，主要研究方向?yàn)槁殉舶┑拿庖咴\斷和免疫治療。2007年獲教育部高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)發(fā)明獎(jiǎng)一等獎(jiǎng)，2008年獲中華醫(yī)學(xué)科技獎(jiǎng)三等獎(jiǎng)，2011年獲國(guó)家科技進(jìn)步獎(jiǎng)二等獎(jiǎng) (第三完成人)。已獲國(guó)家專利授權(quán)3項(xiàng)。主持和參與了國(guó)家級(jí)和省部級(jí)科研基金資助項(xiàng)目20余項(xiàng)，發(fā)表學(xué)術(shù)論文200余篇，主編或副主編專著多部。中國(guó)常見婦科惡性腫瘤診治規(guī)范《卵巢癌》編著之一。

卵巢癌從本質(zhì)上來說是一種免疫原性腫瘤，以免疫治療為主的生物治療已成為備受人們關(guān)注的一種新的輔助治療卵巢癌的方法。腫瘤睪丸抗原參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，可以作為腫瘤標(biāo)志物或治療靶標(biāo)，是當(dāng)前腫瘤免疫診斷和免疫治療的研究熱點(diǎn)。多項(xiàng)研究表明，腫瘤睪丸抗原對(duì)卵巢癌的早期診斷和治療具有較好的前景。本文綜述目前在卵巢癌中研究較為廣泛的3種腫瘤睪丸抗原（cancer testis antigen，CTA）NY-ESO-1、精子蛋白17（sperm protein 17，Sp17）和精子相關(guān)抗原9（sperm associated antigen 9，SPAG9）的研究進(jìn)展。

卵巢腫瘤；腫瘤睪丸抗原；免疫治療

卵巢癌是女性常見的惡性腫瘤之一，其病死率居?jì)D科惡性腫瘤之首［1］。傳統(tǒng)的三大治療模式，即手術(shù)、化療和放療并不能使所有卵巢癌患者，尤其是晚期或復(fù)發(fā)性、難治性的卵巢癌患者達(dá)到臨床完全緩解，研究者們亟待尋求其他更好的治療手段。近年來，隨著貝伐珠單抗藥物在卵巢癌治療中的應(yīng)用，以免疫治療為主的生物治療已成為備受人們關(guān)注的一種新的輔助治療方法［2］。免疫治療的宗旨在于通過提高機(jī)體的免疫識(shí)別能力（或提高腫瘤抗原的免疫原性）和免疫介導(dǎo)的腫瘤殺傷能力（免疫反應(yīng)性），打破患者的免疫耐受和免疫抑制狀態(tài)。貝伐珠單抗作為一種單克隆抗體，屬于被動(dòng)免疫治療，其在體內(nèi)維持作用的時(shí)間短，難以長(zhǎng)久或終生保持。腫瘤抗原疫苗作為主動(dòng)免疫治療的方式，可以刺激機(jī)體產(chǎn)生自身抗體，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應(yīng)。越來越多的研究表明卵巢癌從本質(zhì)上來說是一種免疫原性腫瘤［1，3］。免疫系統(tǒng)可通過識(shí)別卵巢癌抗原與卵巢癌發(fā)生相互作用。根據(jù)腫瘤抗原的結(jié)構(gòu)和來源，卵巢癌抗原主要分為分化抗原、過表達(dá)抗原、突變抗原、癌胚抗原和腫瘤睪丸抗原等［4，5］。

腫瘤睪丸抗原（cancer testis antigen，CTA）是一類在多種腫瘤組織中表達(dá)而在正常組織除睪丸外不表達(dá)的抗原［6］。該類抗原可分為兩大類，一類由X染色體編碼稱作CT-X抗原；另一類由常染色體編碼，稱為非CT-X抗原［7］。至今為止，通過重組cDNA文庫血清學(xué)分析技術(shù)（serological analysis of recombinant cDNA expression libraries，SEREX）、代表性差異分析法（representational difference analysis，RDA）、T細(xì)胞表位克隆等分子生物學(xué)技術(shù)已鑒定出約70類、140余種該類抗原［6，8］。

CTA參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程，可以作為腫瘤標(biāo)志物或治療靶標(biāo)，是當(dāng)前腫瘤免疫診斷和免疫治療的研究熱點(diǎn)。多項(xiàng)研究表明，CTA對(duì)卵巢癌的早期診斷和治療具有較好的前景。本文綜述目前在卵巢癌中研究較為廣泛的3種CTA。

1 NY-ESO-1

NY-ESO-1是由美國(guó)學(xué)者Chen等［9］使用SEREX技術(shù)篩選發(fā)現(xiàn)的腫瘤抗原。NY-ESO-1基因定位于染色體Xp28，其基因轉(zhuǎn)錄的mRNA最長(zhǎng)為747bp，表達(dá)的蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量為17 999道爾頓，由180個(gè)氨基酸組成，其C端存在一疏水性氨基酸尾，在NYESO-1蛋白上有潛在的跨膜區(qū)域，說明其可能是一個(gè)跨膜蛋白。

在CTA中，NY-ESO-1是免疫原性最強(qiáng)的抗原之一，也是目前用于腫瘤免疫治療研究最多且最有前景的抗原。在NY-ESO-1卵巢癌患者中，NY-ESO-1可以誘導(dǎo)產(chǎn)生較高抗體滴度及CD4+/CD8+T細(xì)胞免疫應(yīng)答。Odunsi等［10］通過RT-PCR技術(shù)和免疫組化方法檢測(cè)190例卵巢癌標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)82例（43.2%）標(biāo)本中NY-ESO-1的表達(dá)陽性，抗NY-ESO-1抗體在卵巢癌患者中的表達(dá)約為30%（11/37），抗體滴度最長(zhǎng)持續(xù)3年，提示NY-ESO-1可以作為卵巢癌免疫治療的靶點(diǎn)。

在一項(xiàng)Ⅰ期臨床試驗(yàn)中，輔以不完全福氏佐劑和CpG 7909脫氧胞嘧啶寡聚脫氧核苷酸（deoxycytidyldeoxyguanosin oligodeoxy-nucleotides，ODN）的NYESO-1肽（P157～165）疫苗免疫HLA-A2陽性的Ⅲ期或Ⅳ期晚期腫瘤患者，以檢測(cè)該疫苗的安全性及免疫后體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)與疫苗相關(guān)的毒性反應(yīng)，患者體內(nèi)可以檢測(cè)到持續(xù)且理想的T細(xì)胞免疫反應(yīng)，作者非常樂觀地指出聯(lián)合恰當(dāng)佐劑的NY-ESO-1肽疫苗有望抑制腫瘤生長(zhǎng)，減輕患者荷瘤負(fù)擔(dān)［11］。另一項(xiàng)Ⅰ期臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，卵巢癌患者體內(nèi)可同時(shí)產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫，并且免疫接種后12個(gè)月該免疫反應(yīng)仍持續(xù)存在［12］。

新近，Odunsi等［13］對(duì)22例Ⅲ期或Ⅳ期晚期卵巢癌患者進(jìn)行一項(xiàng)Ⅱ期臨床試驗(yàn)。這些納入的患者在接受rV-NY-ESO-1+rF-NY-ESO-1免疫治療前，都進(jìn)行了理想的腫瘤減滅手術(shù)和以鉑類為基礎(chǔ)的輔助化療。受試者首先接受3.1×107PFU劑量的rV-NY-ESO-1單次皮內(nèi)注射，隨后每月1次予7.41×107PFU劑量的rFNY-ESO-1皮下注射，持續(xù)接種6個(gè)月。平均隨訪時(shí)間為48個(gè)月（23～66個(gè)月）。研究的終點(diǎn)是無腫瘤進(jìn)展生存期（PFS）。22例受試者中除了接種部位暫時(shí)性疼痛外，無明顯治療相關(guān)的毒性反應(yīng)。研究者對(duì)比22例患者免疫治療前和治療后抗體反應(yīng)狀態(tài)及CD4+/CD8+的水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，免疫治療后上述指標(biāo)均明顯提高，11例（50.0%）患者獲得血清抗NY-ESO-1抗體陽性，20例（90.9%）患者出現(xiàn)CD4+T細(xì)胞反應(yīng)陽性，10例（45.5%）患者產(chǎn)生CD8+T細(xì)胞反應(yīng)陽性，提示rVNY-ESO-1+rF-NY-ESO-1疫苗可誘導(dǎo)機(jī)體抗腫瘤反應(yīng)。22例卵巢癌患者中位無腫瘤進(jìn)展生存期為21個(gè)月（16～29個(gè)月），中位總生存時(shí)間為48個(gè)月。同時(shí)研究者比較了免疫治療后反應(yīng)陰性與反應(yīng)陽性患者的生存期，前者中位生存期為14.5個(gè)月，后者為52.4個(gè)月，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.0001）［13］。該結(jié)果與患者的臨床病理參數(shù)如年齡、病理分級(jí)、臨床分期、病史和臨床表現(xiàn)等均無關(guān)。Odunsi等［13］的研究雖然病例數(shù)較少，但研究結(jié)果較為樂觀，可為晚期卵巢癌尤其是復(fù)發(fā)性、難治性卵巢癌患者提供治療的可能性，也為卵巢癌的免疫治療提供有力的證據(jù)。

2 精子蛋白17（sperm protein 17，Sp17）

人類Sp17（hSp17）基因定位于11號(hào)染色體上，其分子由151個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量約為17 500道爾頓，整個(gè)分子可分為3個(gè)功能區(qū)域：其N端部分同源于cAMP依賴的Ⅱ型蛋白激酶α調(diào)節(jié)亞單位（RⅡ）；羧基端含有1個(gè)鈣調(diào)素結(jié)合蛋白上特有的“IQ”motif；分子的中間部分存在能結(jié)合碳水化合物的區(qū)域，該區(qū)域參與細(xì)胞-細(xì)胞間的黏附。

Dong等［14］最先在惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)Sp17的表達(dá)，隨后陸續(xù)有研究報(bào)道Sp17異常表達(dá)于卵巢癌、肺癌、多發(fā)性骨髓瘤和食管癌等多種惡性腫瘤中。在原發(fā)性卵巢癌腫瘤組織中，通過RT-PCR法檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞系和組織切片，發(fā)現(xiàn)Sp17陽性率高達(dá)83%。在卵巢癌患者中，外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞可產(chǎn)生特異性的抗Sp17的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL），提示Sp17具有成為卵巢癌疫苗的潛力［15］。

2010年，Chiriva-Internati等［16］進(jìn)行了一項(xiàng)臨床前期研究，對(duì)荷瘤鼠分別以Sp17疫苗、CpG疫苗及Sp17疫苗+CpG疫苗進(jìn)行免疫接種，每3周觀察腫瘤生長(zhǎng)和（或）腹水生成的情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)接種Sp17疫苗+CpG疫苗的荷瘤鼠生存期超過300 d者占80%，明顯高于單獨(dú)接種Sp17疫苗和CpG疫苗的對(duì)照組（P＜0.0001），且腫瘤大小及腹水生成的時(shí)間明顯晚于兩個(gè)對(duì)照組，差異比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.0001）。該研究進(jìn)一步以ELISA法檢測(cè)Sp17疫苗特異性抗體反應(yīng)及細(xì)胞因子表達(dá)的變化，以ELISPOT法檢測(cè)特異性IFN-α分泌頻數(shù)以評(píng)估CTL抗腫瘤的功能。結(jié)果表明，接種Sp17疫苗+CpG疫苗的實(shí)驗(yàn)組中抗Sp17 IgG的水平、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF等細(xì)胞因子產(chǎn)生量及抗腫瘤功能均顯著優(yōu)于單獨(dú)接種Sp17疫苗和CpG疫苗的對(duì)照組。該研究證實(shí)了Sp17疫苗治療卵巢癌的可行性，其不僅可以抑制腫瘤的生長(zhǎng)和進(jìn)展，而且對(duì)預(yù)防腫瘤的發(fā)生也具有較大的作用。

有研究指出Sp17基因還可能與卵巢透明細(xì)胞癌的耐藥機(jī)制有關(guān)。通過siRNA干擾技術(shù)，沉默Sp17基因，觀察卵巢癌Es2細(xì)胞對(duì)紫杉醇化療的耐藥性和增殖情況。結(jié)果表明，Sp17基因抑制后，Es2細(xì)胞對(duì)紫杉醇化療的耐藥性大大減低［17］。

3 精子相關(guān)抗原9（sperm associated antigen 9，SPAG 9）

1998年，Jagadish等［18］從人類睪丸cDNA庫中篩選獲得精子相關(guān)抗原9（sperm associated antigen 9，SPAG 9）基因，SPAG 9基因蛋白參與精卵融合，在線粒體激活蛋白激酶信號(hào)通路中發(fā)揮作用，是c-JunNH2-末端激酶蛋白家族的成員。

SPAG 9為單拷貝基因，定位于17號(hào)染色體上，其cDNA全長(zhǎng)為2 523 bp，SPAG 9編碼蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量為84 000道爾頓。該蛋白含有JNK結(jié)合域（JNK-bindingdomain，JBD），可與JNK進(jìn)行相互作用，參與JNK信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，進(jìn)而通過MAPKS途徑參與人體許多生理功能的調(diào)控，其中包括細(xì)胞增殖、凋亡與腫瘤發(fā)生等［19］。

Garg等［20］學(xué)者采用反轉(zhuǎn)錄PCR法、免疫組織化學(xué)、Western blot技術(shù)及ELISA法檢測(cè)SPAG 9在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)及抗SPAG 9抗體的表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)上皮性卵巢癌患者SPAG 9 mRNA和蛋白的表達(dá)均為90%，且有67%的患者血清中檢出抗SPAG 9抗體存在。更有意義的是，在早期卵巢癌患者（Ⅰ期或Ⅱ期）中SPAG 9血清抗體高達(dá)62.5%，提示其可以作為卵巢癌早期診斷的標(biāo)志物。

Kanojia等［21］通過RT-PCR法、原位RNA雜交技術(shù)和免疫組化法檢測(cè)SPAG 9在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)情況，同時(shí)采用siRNA干擾技術(shù)沉默SPAG 9基因，在體內(nèi)和體外研究腫瘤消長(zhǎng)情況。研究結(jié)果表明，SPAG 9陽性表達(dá)率為74.4%（58/78），其中在Ⅰ期或Ⅱ期結(jié)腸癌患者中，SPAG 9陽性表達(dá)率為88.5%（23/26），在Ⅲ期或Ⅳ期患者中，SPAG 9陽性表達(dá)率為67.3%（35/52）。下調(diào)SPAG 9基因的表達(dá)，在體外可抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力，體內(nèi)可抑制裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)。該研究進(jìn)一步證實(shí)，SPAG 9可抑制腫瘤的發(fā)生和早期轉(zhuǎn)移，是理想的腫瘤早期篩查標(biāo)志物，可以作為免疫治療的候選基因。

理想的卵巢癌抗原應(yīng)特異、廣泛、穩(wěn)定地表達(dá)于腫瘤細(xì)胞，且不存在個(gè)體差異，同時(shí)又具有強(qiáng)免疫原性、在正常組織中不表達(dá)、對(duì)腫瘤細(xì)胞生存至關(guān)重要等特點(diǎn)［22］。但目前尚未發(fā)現(xiàn)符合上述標(biāo)準(zhǔn)的抗原。迄今為止，已發(fā)現(xiàn)的卵巢癌抗原均為相關(guān)抗原。傳統(tǒng)的卵巢癌標(biāo)志物，如CA125在卵巢癌診斷、分析病程、指導(dǎo)治療、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移、判斷預(yù)后等方面具有重要作用，但其特異性和敏感性均不令人滿意，缺乏早期診斷和治療的價(jià)值。目前雖然大部分CTA的功能尚未完全闡明，尤其與腫瘤的發(fā)生機(jī)制亦不明確，但CTA的限制性表達(dá)及高免疫原性為卵巢癌的早期診斷和治療帶來了新的希望，CTA有望成為卵巢癌免疫治療的新靶點(diǎn)［23］。有關(guān)方面值得深入研究。

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［2013-12-15收稿］［2014-02-10修回］［編輯 阮萃才］

R737.31

A

1674-5671（2014）02-04

10.3969/j.issn.1674-5671.2014.02.01

崔 恒。E-mail：cuiheng20@163.com