HPLC法測(cè)定婦女痛經(jīng)丸浸膏中丹酚酸B的含量

張妮 王海寧

摘要：

目的：建立婦女痛經(jīng)丸浸膏中丹酚酸B的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜法測(cè)定婦女痛經(jīng)丸浸膏中丹酚酸B的含量。使用C18柱，甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm。結(jié)果：線(xiàn)性關(guān)系良好，平均回收率為98.96%，RSD為0.78%。結(jié)論：本方法精密度高，分離度良好，可用于婦女痛經(jīng)丸浸膏的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法丹酚酸B含量測(cè)定

【中圖分類(lèi)號(hào)】

R453 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1002-3763（2014）05-0039-02

婦女痛經(jīng)丸浸膏為婦女痛經(jīng)丸提取物，處方由丹參 300g、延胡索（醋制）300g、五靈脂（醋炒）300g、蒲黃（炭）300g組成，制法為：取五靈脂100g，用水熱浸，丹參加水煎煮二次，合并浸液及煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.25（60℃），但由于原提取物標(biāo)準(zhǔn)過(guò)于簡(jiǎn)單，僅有鑒別項(xiàng)，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)，無(wú)法控制浸膏的質(zhì)量，針對(duì)廠(chǎng)家提出的要求，增加浸膏的含量測(cè)定，在此，采用高效液相色譜法測(cè)定浸膏中丹參所含有效成份丹酚酸B的含量[1][2]。液相色譜法操作簡(jiǎn)便、精密度好、穩(wěn)定、結(jié)果可靠，采用本法分離度較好，減少誤差。本文采用高效液相色譜法測(cè)定婦女痛經(jīng)丸浸膏中丹酚酸B的含量提高了藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可控制提取物及成品的質(zhì)量。

1儀器與試藥

1.1儀器： LC-10A型高效液相色譜儀（日本島津公司），SPD-10A檢測(cè)器，威馬龍色譜工作站。

1.2材料： 婦女痛經(jīng)丸浸膏及缺陰性樣品由安康制藥有限公司提供，丹酚酸B對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供（供含量測(cè)定用）。甲醇、乙腈均為色譜純，甲酸為分析純，水為二次重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件[1][3][4]： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm，柱溫25℃。理論塔板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2對(duì)照品溶液的制備： 取丹酚酸B對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。對(duì)照品溶液HPLC色譜圖見(jiàn)圖一。

2.3樣品溶液的制備： 取本品約0.2g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶?jī)?nèi)，精密加入70%甲醇50ml，稱(chēng)定重量，超聲處理10分鐘，放冷，用70%甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液。供試品溶液HPLC色譜圖見(jiàn)圖二。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備： 精密吸取丹酚酸B對(duì)照品溶液（0.0551mg/ml）2.5、5、10、15、20μl進(jìn)樣，記錄色譜，以峰面積為橫坐標(biāo)，以進(jìn)樣量（μg）為縱坐標(biāo)作圖，計(jì)算回歸方程為：A=1828347.04C+15748.2195 （r=0.9999），結(jié)果表明丹酚酸B在0.13775μg～1.10200μg之間線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn)： 分別精密吸對(duì)照品溶液（0.0551mg/ml）各10μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜，計(jì)算，RSD為0.11%，說(shuō)明有良好的精密度。

2.6重現(xiàn)性試驗(yàn)： 取一樣品按供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液10μl進(jìn)樣，記錄色譜，計(jì)算，RSD為1.8%，說(shuō)明有良好的重現(xiàn)性。

2.7加樣回收率試驗(yàn)：采用加樣回收，精密吸取已測(cè)定含量的樣品0.1g（11.84mg/g），再加入丹酚酸B對(duì)照品適量，按正文所述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表一，丹酚酸B的回收率為98.96%，RSD為0.78%，說(shuō)明本法有良好的回收率。

2.8空白試驗(yàn)： 按處方比例及生產(chǎn)制備方法制得陰性樣品，按“樣品溶液制備”項(xiàng)下制備陰性溶液，進(jìn)樣10μl，記錄色譜圖，結(jié)果樣品色譜圖在對(duì)照品色譜圖出峰處無(wú)對(duì)應(yīng)的峰，表明陰性樣品溶液在丹酚酸B出峰處沒(méi)有干擾峰。陰性樣品溶液HPLC色譜圖見(jiàn)圖三。

2.9測(cè)定法： 分別精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

3樣品測(cè)定

取所有樣品按樣品溶液制備操作，分別吸取對(duì)照品溶液與樣品溶液各10μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表二。

4討論

本方中丹參為主藥，而丹酚酸B為丹參藥材中主要有效成分^[5]，故選擇丹酚酸B作為本品質(zhì)量控制的成分。

在供試品溶液制備中，對(duì)回流提取和超聲進(jìn)行了比較，結(jié)果回流提取和超聲提取沒(méi)有顯著差異，在此選用超聲提取。對(duì)超聲提取時(shí)間5～30 min進(jìn)行了比較，結(jié)果表明提取10 min后，樣品中丹酚酸B基本提取完全，故在此超聲提取10 min。

經(jīng)參閱資料報(bào)道及實(shí)驗(yàn)后，283nm處無(wú)雜質(zhì)干擾且靈敏度較好，所以采用此波長(zhǎng)。

流動(dòng)相曾采用以甲醇-水-甲酸（55∶45∶2），甲醇-水（55∶45），乙腈-水-甲酸（43∶57∶0.2），乙腈-水（43∶57），甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，在其他條件相同時(shí)，采用甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）為流動(dòng)相，分離效果均較好。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在此色譜條件下，采用高效液相色譜法測(cè)定婦女痛經(jīng)丸浸膏中丹酚酸B的含量，方法簡(jiǎn)便，快速，重現(xiàn)性好。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典2005年版一部[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版式社，2010（一部）：71.

[2] 苗明三，李振國(guó)，陳隋清編.現(xiàn)代實(shí)用中藥質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：190.

[3] 王歡.丹酚酸B的含量測(cè)定方法研究進(jìn)展 [J].江西中醫(yī)藥.2010（6）

[4] 許永，趙成.不同提取方法對(duì)丹參中丹酚酸B含量測(cè)定的影響 [J].安徽醫(yī)藥.2009（13）

[5] 陳發(fā)奎編.常用中草藥有效成分含量測(cè)定[M].人民衛(wèi)生出版社，1997：145.