三種抗酸染色法檢測(cè)痰結(jié)核分枝桿菌結(jié)果分析

鄭 浩，柳曉金，齊海亮，馮建純，朱桂云，鄭立恒

(1河北省胸科醫(yī)院 功能科，河北 石家莊 050000；2.石家莊市第五醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河北 石家莊 050000)

結(jié)核病是全世界成人因傳染病死亡的主要疾病之一。中國(guó)是全球22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一，活動(dòng)性肺結(jié)核患者數(shù)量居世界第2位，僅次于印度。痰液抗酸染色鏡檢發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌是肺結(jié)核確診的最基本方法，也是發(fā)現(xiàn)傳染源、選擇用藥方案、考核療效、隨訪病情的重要手段，在肺結(jié)核病治療和控制中占有非常重要的地位[1]。本文應(yīng)用涂片法、漂浮集菌法和夾層杯法三種抗酸染色法對(duì)懷疑肺結(jié)核患者的痰液進(jìn)行檢測(cè)并討論它們對(duì)于診斷肺結(jié)核的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料 1 500例痰標(biāo)本來(lái)自2012年1～12月病房和門診高度懷疑肺結(jié)核的患者?；颊吣?28例，女672例，年齡11～76歲，平均(39.8±7.3)歲。標(biāo)本為患者從肺深部咳出的晨痰留于一次性塑料瓶?jī)?nèi)和夾層杯內(nèi)。

1.2 主要試劑和儀器 TQ-12自動(dòng)離心涂片機(jī)、振蕩器、生物安全柜(美國(guó)NUAIRE)、夾層杯、恒溫干片機(jī)、消化滅活液、抗酸染色液、顯微鏡(日本奧林巴斯)。

1.3 方法

1.3.1 涂片法 嚴(yán)格按照《痰涂片鏡檢質(zhì)量保證手冊(cè)》將患者留取的痰首先做直接涂片、干燥[2]，抗酸染色后鏡檢。

1.3.2 漂浮集菌法 將患者痰標(biāo)本加適量無(wú)菌蒸餾水，放入121 ℃高壓蒸汽鍋滅菌30 min，加入二甲苯適量，置振蕩器上震蕩10 min左右，待混合均勻，取出后加蒸餾水至瓶口，靜置15 min，取載玻片(血清處理以增加粘附力)蓋于瓶口，靜置15 min，取下玻片，干燥后抗酸染色。

1.3.3 夾層杯法 湖南懷化天騎醫(yī)學(xué)新技術(shù)有限公司提供夾層杯法配套儀器和試劑。將痰消化液加入裝有3～5 ml痰液的彭氏杯中，在振蕩器上混勻5 min，待消化完全，放入烤片箱內(nèi)滅活結(jié)核菌15 min，置于離心涂片機(jī)上，4 000 r/min，離心 8 min，倒掉上清液，按說(shuō)明書要求進(jìn)行抗酸染色，自然干燥或烘干后，用取片針頂出夾層片，使涂菌面朝下，置載玻片上，用中性樹膠粘牢，油鏡鏡檢。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，三種方法間的比較用兩兩配對(duì)的卡方檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)結(jié)果 1 500份標(biāo)本分別用三種方法進(jìn)行檢測(cè)，涂片法陽(yáng)性份數(shù)244份，漂浮集菌法330份陽(yáng)性，夾層杯法336例陽(yáng)性。

2.2 三種檢測(cè)方法的比較 涂片法與漂浮集菌法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，漂浮集菌法的陽(yáng)性檢出率較高(配對(duì)χ2=78.68，P<0.001，表1)；涂片法和夾層杯法的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，夾層杯法的陽(yáng)性檢出率高(配對(duì)χ2=86.37，P<0.001，表2)；漂浮集菌法和夾層杯法檢測(cè)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(配對(duì)χ2=2.50，P>0.05，表3)。

表1 涂片法與漂浮集菌法檢測(cè)結(jié)果比較

表2 涂片法與夾層杯法檢測(cè)結(jié)果比較

表3 漂浮集菌法與夾層杯法檢測(cè)結(jié)果比較

3 討論

肺結(jié)核的細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷一直是國(guó)內(nèi)外研究的重要課題[3]。痰培養(yǎng)和涂片抗酸染色發(fā)現(xiàn)結(jié)核菌是診斷肺結(jié)核的金標(biāo)準(zhǔn)。但是結(jié)核菌培養(yǎng)比較復(fù)雜和昂貴，所需時(shí)間較長(zhǎng)，一般在4～8周左右，在貧困的地區(qū)難以普及和推廣。涂片法是抗酸菌病原學(xué)檢測(cè)方法中最經(jīng)濟(jì)、快捷、有效的方法，但是其敏感性低，只有大于5 000條菌/ml的痰液才能檢測(cè)到抗酸菌。

近些年發(fā)明的漂浮集菌法和夾層杯法，通過(guò)濃縮在痰液中分散的結(jié)核菌來(lái)提高結(jié)核菌的檢出率。漂浮集菌法先把痰液進(jìn)行高壓滅菌，再加消化液震蕩使結(jié)核菌分散開(kāi)來(lái)，利用結(jié)核菌的密度小于消化液密度的特點(diǎn)，通過(guò)結(jié)核菌漂浮于液體表面來(lái)達(dá)到集菌的目的。夾層杯法使用特制的消化液破壞痰液中的蛋白，并高速震蕩，使痰液中聚集的結(jié)核菌分散開(kāi)來(lái)而有利于通過(guò)高速離心沉淀于夾層杯底部的薄膜上以達(dá)到集菌的目的，再進(jìn)行抗酸染色及鏡檢。此研究的結(jié)果是漂浮集菌法和夾層杯法檢測(cè)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，夾層杯的陽(yáng)性檢出率稍高一些。前者檢測(cè)過(guò)程難以標(biāo)準(zhǔn)化，操作費(fèi)時(shí)、繁瑣，高壓滅菌時(shí)間長(zhǎng)，漂浮到液面的結(jié)核菌也不能保證完全粘附在玻片上，易造成污染，且受操作者的主觀影響因素較多，假陽(yáng)性、假陰性的幾率較高。而后者易于標(biāo)準(zhǔn)化，操作安全、簡(jiǎn)便，整個(gè)實(shí)驗(yàn)在2 h內(nèi)完成，且痰標(biāo)本操作在夾層杯中進(jìn)行，減少了標(biāo)本暴露，在制作烤片過(guò)程中，60 ℃ 20 min可有效殺滅結(jié)核菌，有效提高了實(shí)驗(yàn)室生物安全水平，通過(guò)離心結(jié)核菌完全直接沉淀到薄膜上，標(biāo)本用樹脂封存于載玻片上，避免了交叉污染，陽(yáng)性率也得以提高[4-6]。

綜上所述，涂片法陽(yáng)性率低，給一些肺結(jié)核患者的診斷帶來(lái)一定困難；漂浮集菌法步驟繁瑣，不易于標(biāo)準(zhǔn)化，應(yīng)用受到限制；而夾層杯法易于標(biāo)準(zhǔn)化、安全性高、高效、便捷，較涂片法陽(yáng)性率高，值得適當(dāng)推廣。

【參考文獻(xiàn)】

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