Ghrelin對大鼠消化間期胃腸肌電活動的影響及其受體在消化道的分布特征

王 燕，董 蕾，鄒百倉，史海濤，姜 炅，宋亞華

(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，陜西西安 710004)

Ghrelin是生長激素促分泌素受體(growth hormone secretagogue receptor, GHS-R)的內(nèi)源性配體[1]，主要由胃黏膜組織中的泌酸細(xì)胞分泌，在胃腸道和中樞神經(jīng)系統(tǒng)均有分布。Ghrelin與調(diào)節(jié)消化道運(yùn)動的激素胃動素在結(jié)構(gòu)上具有高度相似性，其受體GHS-R與胃動素受體也有同源性，又被稱為胃動素相關(guān)肽[2]。由于胃動素和消化道運(yùn)動關(guān)系密切，可促進(jìn)胃腸消化間期移行性復(fù)合肌電活動(migrating myoelectrical complex, IMC)，加速小腸轉(zhuǎn)運(yùn)，ghrelin與消化道運(yùn)動的關(guān)系也開始受到關(guān)注。以往研究證實ghrelin及其受體GHS-R在中樞和外周都有表達(dá)。BRON等[3]通過原位雜交等方法證實GHS-R存在于大鼠的下丘腦、延髓、心臟、胃腸道等處，DASS和XU等[4-6]利用熒光免疫組織化學(xué)方法在人、大鼠和豚鼠的胃和結(jié)腸也發(fā)現(xiàn)ghrelin及其受體。然而，關(guān)于GHS-R在完整消化道(包括胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、近端結(jié)腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸)的免疫組織化學(xué)研究以及表達(dá)量的比較尚未見報道。以往研究發(fā)現(xiàn)，ghrelin可加速胃排空，改善術(shù)后腸梗阻，促進(jìn)胃和十二指腸IMC[7-10]。但是，關(guān)于ghrelin對胃腸IMC的作用及確切機(jī)制尚不清楚。本研究采用免疫組織化學(xué)及圖像分析方法觀察大鼠消化道GHS-R的分布特征和表達(dá)量的變化，探討ghrelin對禁食大鼠IMC的影響及其與胃動素的關(guān)系，為闡明ghrelin的促胃腸動力作用提供理論依據(jù)，為治療胃腸運(yùn)動障礙性疾病提供新思路。

1材料與方法

1.1實驗動物健康純種Sprague-Dawley大鼠，雌雄不拘，體質(zhì)量220～240 g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。

1.2儀器和試劑Ghrelin由美國鳳凰肽公司提供；兔抗人GHS-R抗體由美國Santa Cruz公司提供；胃動素放免試劑盒由中國人民解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所提供；聚四氟乙烯薄膜包繞的AF-250A醫(yī)用線纜由上海信息產(chǎn)業(yè)部電子第23研究所特種線纜部提供；多道生理記錄儀RM-6280C由成都儀器廠提供。

1.3GHS-R在大鼠消化道的分布特征①組織制備。大鼠每組8只，給予100 g/L水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉，經(jīng)左心室穿刺至主動脈，用生理鹽水快速沖血管，用40 g/L多聚甲醛緩沖液經(jīng)升主動脈灌注。分別剪取胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、近端結(jié)腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸，經(jīng)多聚甲醛緩沖液后固定8 h，20～30 g/L蔗糖溶液梯度脫水，液氮速凍后，組織包埋劑包埋，恒冷冰凍切片機(jī)切片。②免疫組織化學(xué)染色。用SABC法進(jìn)行GHS-R的免疫組化染色。用0.01 mol/L PBS代替第一抗體做陰性對照。用Q550CW圖像采集與分析系統(tǒng)對各組織的灰度值進(jìn)行統(tǒng)計分析。③實驗結(jié)果的觀察。神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)呈棕黃色染色者為陽性細(xì)胞。消化道陽性細(xì)胞多成簇分布在腸肌叢和黏膜下叢，陽性細(xì)胞呈胞漿和胞膜都著色，相對分界不明顯，所以采用灰度分析的方法分析兩者的陽性表達(dá)。消化道陽性表達(dá)的圖像分析：在高倍鏡下，每只大鼠計數(shù)5張切片，每張切片隨機(jī)選取5個視野，利用Q550CW型圖像采集與分析系統(tǒng)分析，得出灰度值并進(jìn)行比較。

1.4觀察ghrelin對IMC的影響①埋置電極。將每根導(dǎo)線距末端1 cm處小心去除1 mm長度的聚四氟乙烯外膜，裸露出的銀絲作為電極使用。實驗大鼠禁食18 h，100 g/L水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉，外科無菌操作下沿腹正中線剪開腹壁肌肉以及腹膜，以24 G針頭作套針穿過腸壁漿肌層，使每根導(dǎo)線的裸露段(約1 mm)停在漿肌層里作為記錄電極。分別在大鼠的胃竇、十二指腸、空腸各埋置一對電極，每對電極距幽門的距離分別是5 mm、5 cm和15 cm。每對電極相距約2 mm，其連線與空腔臟器長軸垂直。將導(dǎo)線用絲線扎緊，防止電極移動脫落。在肩胛間區(qū)及右上腹之間做皮下隧道，將導(dǎo)線固定于體外。術(shù)后大鼠分籠單獨(dú)清潔飼養(yǎng)，恢復(fù)1周可用于實驗。②肌電活動的記錄。術(shù)后第7天將已造好的大鼠動物模型禁食16 h，在清醒狀態(tài)下進(jìn)行實驗。用大鼠固定器束縛大鼠，將銀絲電極與多道生理記錄儀連接，記錄胃腸肌電活動。時間常數(shù)設(shè)為0.2 s，采樣頻率為1 kHz，低頻濾波和高頻濾波分別為0.8 Hz和100 Hz，信號幅度以μV記。大鼠隨機(jī)分為2組，每組8只，每只大鼠先記錄胃腸肌電活動1 h，其間至少記錄到3個IMC，然后經(jīng)尾靜脈注入ghrelin 20 μg/kg。對照組給予生理鹽水靜脈注射。所有大鼠肌電信號通過模數(shù)轉(zhuǎn)換儲存于硬盤，數(shù)據(jù)經(jīng)計算機(jī)分析處理。分析指標(biāo)：IMC周期(min，測量從前一個IMC的結(jié)束處到下一個IMC的結(jié)束處)，Ⅲ相出現(xiàn)的頻率(次/min)、振幅(μV)、時相(min)及Ⅲ相時相占IMC周期的百分比。

1.5觀察胃動素對ghrelin的影響①埋置銀絲電極。具體步驟同前。②頸靜脈插管。在銀絲電極置入3 d后，大鼠恢復(fù)良好，可進(jìn)行頸靜脈插管。以100 g/L水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉，將大鼠四肢及頭部固定于鼠臺，暴露右側(cè)頸部，去毛、消毒、鋪巾，打開皮膚，逐層分離至頸靜脈，將其游離，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，在近心端剪開切口，將準(zhǔn)備好的導(dǎo)管插入至上腔靜脈，固定并用肝素帽封管。固定好后通過皮下隧道至頸背部穿出體外，以防鼠咬損壞。術(shù)后每天經(jīng)腹腔給予青霉素鈉13萬單位抗感染，共注射3 d。③胃動素水平的檢測。大鼠禁食16 h，將銀絲電極與多道生理記錄儀連接，在監(jiān)測IMC的同時抽取靜脈血。在IMC的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ相分別抽取靜脈血1 mL，經(jīng)頸靜脈注射ghrelin(20 μg/kg)，當(dāng)觀測到IMC運(yùn)動出現(xiàn)變化時，在IMC的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ相分別抽取靜脈血1 mL，每份置于含100 g/L的EDTA二鈉30 μL和抑肽酶30 μL的塑料管中混勻，4 ℃離心(3 000 r/min，15 min)后，取血漿放-80 ℃保存。應(yīng)用放射免疫法測定血漿胃動素水平。

1.6統(tǒng)計學(xué)處理免疫組化及IMC結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤，血漿胃動素水平結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，數(shù)據(jù)經(jīng)方差齊性及正態(tài)分布檢驗，IMC數(shù)據(jù)采用獨(dú)立樣本t檢驗，免疫組化數(shù)據(jù)采用多樣本比較方差分析，血漿胃動素水平采用重復(fù)測量方差分析和配對t檢驗(SPSS 13.0 軟件)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1GHS-R免疫陽性細(xì)胞的形態(tài)及分布特點(diǎn)在胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、近端結(jié)腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸均有GHS-R陽性表達(dá)，位于腸肌叢和黏膜下叢，在胞質(zhì)和胞膜表達(dá)，呈淡黃色或棕黃色，胞核無表達(dá)(圖1)。胃腺體均有GHS-R免疫強(qiáng)陽性廣泛表達(dá)，在腸腺體GHS-R免疫陽性表達(dá)很少，其在平滑肌細(xì)胞和上皮細(xì)胞呈陰性表達(dá)。

圖1 GHS-R免疫陽性細(xì)胞在消化道的表達(dá)

2.2GHS-R免疫陽性細(xì)胞在消化道表達(dá)量的比較GHS-R在消化道不同部位的灰度值見圖2?；叶仍酱?，代表陽性反應(yīng)越弱。GHS-R免疫陽性在胃和十二指腸最多，兩者之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義；在近端結(jié)腸、空腸、遠(yuǎn)端結(jié)腸、回腸、盲腸呈遞減趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.3大鼠胃腸IMC的特征IMC可分為4個時相，第Ⅰ相為靜止期，無肌電活動；第Ⅱ相有少量弱而不規(guī)則的肌電活動；第Ⅲ相有密集而較強(qiáng)的肌電活動和收縮波；第Ⅳ相肌電活動突然減少，是由第Ⅲ相轉(zhuǎn)入新周期的過渡階段。本次研究統(tǒng)計的正常大鼠胃竇IMC周期為(9.8±0.4)min，Ⅲ相持續(xù)時間為(2.6±0.2)min，占IMC周期的百分比是(26.7±2.3)%。Ⅲ相頻率和振幅分別為(13.3±0.5)次/min和(133.9±13.5)μV。正常大鼠十二指腸IMC周期為(10.9±0.4)min，Ⅲ相持續(xù)時間、頻率和振幅及Ⅲ相占IMC周期百分比分別為(3.3±0.2)min、(18.1±0.6)次/min、(369.5±26.2)μV和(29.9±1.1)%。正常大鼠空腸IMC周期為(12.3±0.6)min，Ⅲ相持續(xù)時間、頻率和振幅及Ⅲ相占IMC周期百分比分別為(3.7±0.2)min、(19.3±0.7)次/min、(347.6±18.7)μV和(30.6±1.5)%。

圖2 GHS-R在消化道不同部位灰度值的比較

2.4Ghrelin對胃腸IMC的影響注射ghrelin后，大鼠胃竇、十二指腸和空腸的肌電活動均有不同程度的增加。與對照組相比，胃竇IMC周期變短(P<0.01)，Ⅲ相振幅和頻率增加(P<0.01)，Ⅲ相時程縮短(P<0.01)，Ⅲ相占IMC周期百分比無顯著變化。十二指腸的IMC周期和Ⅲ相時程顯著縮短(P<0.01，P<0.05)，Ⅲ相振幅和頻率增加(P<0.05，P<0.01)，Ⅲ相占IMC周期百分比無顯著變化。空腸的IMC周期和Ⅲ相時程變短(P<0.01)，Ⅲ相振幅增加(P<0.01)，但Ⅲ相頻率和III相占IMC周期百分比均無顯著變化(圖3，表1)?？傮w來看，ghrelin的促動力作用主要表現(xiàn)在縮短胃腸IMC的周期和Ⅲ相時程，增加Ⅲ相振幅，對Ⅲ相頻率的影響在胃竇和十二指腸較明顯，在空腸不明顯，對胃腸IMC III相時程占IMC周期百分比均無明顯影響。

圖3 注射ghrelin后大鼠消化間期IMC的改變

2.5血漿胃動素對ghrelin的影響注射ghrelin前大鼠血漿胃動素水平隨IMC發(fā)生周期性波動，IMC Ⅲ相時血漿胃動素水平較IMC Ⅰ、Ⅱ相時明顯增高，有顯著性差異，IMC Ⅰ、Ⅱ相之間血漿胃動素水平亦具有顯著性差異，Ⅱ相高于Ⅰ相；注射ghrelin后，血漿胃動素濃度仍呈現(xiàn)周期性波動，即Ⅲ相最高，Ⅱ相高于Ⅰ相。然而，IMC各對應(yīng)時相血漿胃動素濃度與注射前相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，表2)。

3討論

以往研究證實，ghrelin和GHS-R在中樞和外周均有表達(dá)[3-4]，用熒光免疫組織化學(xué)方法在人、大鼠和豚鼠的胃和結(jié)腸腸神經(jīng)叢也發(fā)現(xiàn)ghrelin及其受體[4-6]。但是，關(guān)于GHS-R在完整消化道的分布特征及表達(dá)量的比較尚未見報道。本研究觀察了大鼠消化道GHS-R的分布特征，并對表達(dá)量進(jìn)行比較。研究結(jié)果顯示，大鼠的GHS-R在消化道主要分布于腸肌叢和黏膜下叢。由于GHS-R為胞膜受體，其染色以胞膜為主。然而，也有部分染色結(jié)果中出現(xiàn)了同時存在的胞漿著色，分析其原因為：GHS-R受體位于細(xì)胞膜，其染色主要為環(huán)形的胞膜著色帶，同時GHS-R受體又是在胞質(zhì)內(nèi)生物合成的，其抗體可能也與胞漿內(nèi)產(chǎn)生的一些具有同一結(jié)構(gòu)(配基)的受體半成品相結(jié)合，從而引起部分胞漿著色。本研究發(fā)現(xiàn)，GHS-R在胃和十二指腸表達(dá)量高，表現(xiàn)為胞漿和胞膜表達(dá)，胞核無表達(dá)。胃腺體有GHS-R免疫強(qiáng)陽性表達(dá)，在腸腺體GHS-R免疫陽性表達(dá)很少，其在平滑肌細(xì)胞和上皮細(xì)胞呈陰性表達(dá)。因此，我們推測在生理條件下，胃中釋放的ghrelin可能通過激活腸神經(jīng)叢的GHS-R發(fā)揮作用。此外，本研究發(fā)現(xiàn)，大鼠GHS-R免疫陽性在胃和十二指腸呈強(qiáng)表達(dá)，兩者之間無顯著性差異，在近端結(jié)腸、空腸、遠(yuǎn)端結(jié)腸、回腸、盲腸呈遞減趨勢。這些特點(diǎn)可能與ghrelin的促胃腸運(yùn)動作用密切相關(guān)，在今后的實驗中可進(jìn)一步研究探討。

表1 注射ghrelin后大鼠IMC特征的參數(shù)變化

Tab.1 IMC characteristics of rats after injection of ghrelin

表1 注射ghrelin后大鼠IMC特征的參數(shù)變化

IMC時相胃竇十二指腸空腸IMC周期(min) 鹽水對照組10.1±0.511.2±0.412.0±0.6 Ghrelin組6.8±0.2#7.5±0.5#8.1±0.4#Ⅲ相頻率(次/min) 鹽水對照組15.1±0.317.3±0.818.8±0.5 Ghrelin組17.2±0.4#21.2±1.0#21.1±1.0Ⅲ振幅(μV) 鹽水對照組135.7±12.4349.4±24.4335.7±20.9 Ghrelin組250.8±19.1#432.4±29.1?447.4±22.7#Ⅲ相時程(min) 鹽水對照組2.8±0.23.4±0.33.8±0.2 Ghrelin組2.1±0.1#2.5±0.3?2.7±0.2#Ⅲ相占IMC周期百分比(%) 鹽水對照組27.3±1.530.9±2.031.6±1.1 Ghrelin組30.6±1.533.0±2.233.1±1.9

與鹽水對照組比較，*P<0.05;#P<0.01。每組n=8。

表2 注射ghrelin前后IMC不同時相血漿胃動素質(zhì)量濃度的比較

與Ⅰ相比較，*P<0.05,**P<0.01；與Ⅱ相比較，#P<0.05。每組n=8。

IMC是一種禁食狀態(tài)下存在的周期性、時相性肌電活動，從胃或小腸上部開始，向小腸末端移行，可促進(jìn)胃排空及腸道食物轉(zhuǎn)運(yùn)，起著“腸道清潔夫”的作用。IMC的發(fā)生和移行主要受中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腸神經(jīng)系統(tǒng)、自主神經(jīng)系統(tǒng)及胃腸激素等多水平調(diào)控[11-12]。Ghrelin作為胃動素相關(guān)肽[2]，其前體結(jié)構(gòu)及氨基酸序列與胃動素有36%的同源性，其受體與胃動素受體有44%的同源性，跨膜區(qū)同源性高達(dá)87%。由于胃動素和消化道運(yùn)動關(guān)系密切，可促進(jìn)胃腸IMC，加速胃排空及小腸轉(zhuǎn)運(yùn)，ghrelin與消化道運(yùn)動的關(guān)系也開始受到關(guān)注。國內(nèi)研究提示，ghrelin可促進(jìn)豚鼠的胃竇平滑肌收縮，增加平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣濃度，加速糖尿病小鼠的胃排空[13-14]。國外研究發(fā)現(xiàn)，ghrelin可加速小腸轉(zhuǎn)運(yùn)，誘發(fā)進(jìn)食大鼠的禁食期肌電活動，通過膽堿能機(jī)制縮短小腸IMC周期，刺激禁食期胃腸動力[7-10]。本研究在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討了ghrelin對消化間期IMC的影響。研究結(jié)果顯示，ghrelin促進(jìn)胃腸IMC，使IMC周期縮短，Ⅲ相時程縮短，Ⅲ相占周期百分比無顯著性改變；使胃和十二指腸Ⅲ相頻率和振幅增加，空腸Ⅲ相振幅增加，對空腸的Ⅲ相頻率無顯著影響。由于GHS-R主要分布在胃，在腸道的分布顯著減少[1,4]。因此，我們推測，與胃和十二指腸相比，ghrelin對空腸的促動力作用相對減弱，可能是由于空腸的GHS-R分布減少所致。

以往研究發(fā)現(xiàn)，血漿胃動素水平和IMC Ⅲ相之間關(guān)系密切，胃動素被認(rèn)為是胃竇起源的IMC Ⅲ相的始動因子[15-16]，是公認(rèn)的以激素形式作用于胃腸道的胃腸激素。消化間期血漿胃動素濃度隨IMC發(fā)生周期性波動，其峰值出現(xiàn)在IMC III相[16-17]。生理劑量的胃動素可激發(fā)胃腸區(qū)域IMC的出現(xiàn)，抗胃動素血清可抑制IMC的發(fā)生[18]。本研究結(jié)果顯示，大鼠血漿胃動素水平隨IMC呈周期性波動，IMC Ⅰ相時濃度最低，Ⅱ相時逐漸增高，在Ⅲ相開始時達(dá)到最高峰，這與大多數(shù)研究者的結(jié)論一致，也充分證實了胃動素在IMC啟動和調(diào)節(jié)中的重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，給予ghrelin后，血漿胃動素濃度仍隨IMC發(fā)生周期性波動。但是，各相應(yīng)時相濃度與ghrelin作用前相比無顯著性差異。因此，可以推測ghrelin可能不是通過提高血漿胃動素濃度而發(fā)揮促胃腸動力作用，其對IMC的影響與胃動素沒有明顯關(guān)系。

綜上所述，GHS-R主要分布于大鼠消化道的腸肌叢和黏膜下叢，在胃腺體呈強(qiáng)陽性表達(dá)，在小腸腺有少量陽性表達(dá)。這提示在生理條件下，胃中釋放的ghrelin可能通過激活腸神經(jīng)叢的GHS-R發(fā)揮作用。Ghrelin可促進(jìn)消化間期IMC，其促動力作用可能與血漿胃動素濃度無關(guān)。這些或許為闡明ghrelin及其受體的分布和作用機(jī)制提供有價值的研究資料，為胃腸動力障礙性疾病的治療提供一定的理論基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1] KOJIMA M, HOSODA H, DATE Y, et al. Ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach[J]. Nature, 1999, 402(6762):656-660.

[2] CHEN CY, TSAI CY. Ghrelin and motilin in the gastrointestinal system[J]. Curr Pharm Des, 2012, 18(31):4755-4765.

[3] BRON R, YIN L, RUSSO D, et al. Expression of the ghrelin receptor gene in neurons of the medulla oblongata of the rat[J]. J Comp Neurol, 2013, 521(12):2680-2702.

[4] DASS NB, MUNONYARA M, BASSIL AK, et al. Growth hormone secretagogue receptors in rat and human gastrointestinal tract and the effects of ghrelin[J]. Neuroscience, 2003, 120(2):443-453.

[5] XU L, DEPOORTERE I, TOMASETTO C, et al. Evidence for the presence of motilin, ghrelin, and the motilin and ghrelin receptor inneurons of the myenteric plexus[J]. Regul Pept, 2005, 124(1-3):119-125.

[6] RUCHALA M, RAFINSKA L, KOSOWICZ J, et al. The analysis of exogenous ghrelin plasma activity and tissue distribution[J]. Neuro Endocrinol Lett, 2012, 33(2):191-195.

[7] FUJINO K, INUI A, ASAKAWA A, et al. Ghrelin induces fasted motor activity of the gastrointestinal tract in conscious fed rats[J]. J Physiol, 2003, 550(Pt 1):227-240.

[8] CHEUNG CK, WU JC.Role of ghrelin in the pathophysiology of gastrointestinal disease[J]. Gut Liver, 2013, 7(5):505-512.

[9] FUJIMIYA M, ATAKA K, ASAKAWA A, et al. Ghrelin, des-acyl ghrelin and obestatin on the gastrointestinal motility[J]. Peptides, 2011, 32(11):2348-2351.

[10] MONDAL A, XIE Z, MIYANO Y, et al. Coordination of motilin and ghrelin regulates the migrating motor complex of gastrointestinal motility in Suncus murinus[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 2012, 302(10):G1207-G1215.

[11] DELOOSE E, JANSSEN P, DEPOORTERE I, et al. The migrating motor complex: control mechanisms and its role in health and disease[J]. Nat Rev Gastroenterol Hepatol, 2012, 9(5):271-285.

[12] 張建忠，王雁，袁申元．消化間期移行性復(fù)合運(yùn)動產(chǎn)生的機(jī)制和臨床意義[J]．中華內(nèi)科雜志, 1998, 37(1)：57-59．

[13] 信芳杰，徐 珞. Ghrelin對豚鼠胃竇平滑肌細(xì)胞鈣離子濃度的影響及與NO關(guān)系研究[J]．現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2010, 10(2) :216-220.

[14] 邱文才，王維剛，王志剛，等. Ghrelin對糖尿病小鼠胃排空的影響及機(jī)制[J]. 世界華人消化雜志, 2007, 15(34):3617- 3620.

[15] TOMITA R. Relationship between interdigestive migrating motor complex and gut hormones in human[J]. Hepatogastroenterology, 2009, 56(91-92):714-717.

[16] WANG L, ZHOU L, TIAN R. Role of the area postrema of medulla oblongata in the regulation of canine interdigestive migrating motor complex[J]. Chin Med J(Engl), 2002, 115(3): 384-388.

[17] TAKAHASHI T. Mechanism of interdigestive migrating motor complex[J]. J Neurogastroenterol Motil, 2012, 18(3):246-257.

[18] LEE KY, CHANG TM, CHEY WY. Effect of rabbit antimotilin serum on myoelectric activity and plasma motilin concentration in fasting dog[J]. Am J Physiol, 1983, 245(4): G547-G553.