豬流行性腹瀉的病毒分離鑒定與免疫試驗(yàn)

王林鋒+劉寶元+郝常寶

豬流行性腹瀉（PED）是由豬流行性腹瀉病毒引起的豬的一種高度接觸性腸道傳染病，于1977年在比利時(shí)首次被發(fā)現(xiàn)，1982年被命名為豬流行性腹瀉，我國于 1980年首次分離得到PEDV。近年來，山東、河南、湖北等省多個(gè)地區(qū)陸續(xù)發(fā)生，漸呈流行之勢，仔豬死亡率最高，可達(dá)100%，給養(yǎng)豬業(yè)造成非常嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本文就近期流行性腹瀉的流行情況開展調(diào)查，對病毒進(jìn)行分離鑒定后對市場上不同類的疫苗免疫效果進(jìn)行研究，確立了PED的綜合防控技術(shù)，為養(yǎng)豬戶提供參考，以推動養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展。

一、流行病學(xué)

豬流行性腹瀉可單一發(fā)生或與豬傳染性胃腸炎混合感染。豬流行性腹瀉病毒為類冠狀病毒，該病毒在65℃條件下10分鐘左右就可殺死；在陽光下6～8小時(shí)可滅活；在陰暗環(huán)境中7～10天具有感染力；用0.5%苯酚在37℃下處理30分鐘可殺死。康復(fù)豬可排毒2個(gè)月以上，甚至長達(dá)109天。

該病多發(fā)于冬季，山東省2010年冬季就曾發(fā)生，自2013年9月至2014年1月情況越發(fā)嚴(yán)重，表現(xiàn)為傳播速度快，很快波及到所有豬群，已經(jīng)嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)的健康發(fā)展。

目前，市售疫苗種類繁多，有聯(lián)合疫苗，有基因缺失苗，但疫苗質(zhì)量良莠不齊，再加上抗生素的濫用，治療方案五花八門，亂用疫苗的現(xiàn)象非常普遍，導(dǎo)致毒株變異、毒力增強(qiáng)，給養(yǎng)豬業(yè)帶來重大損失。因此，研究一套合理有效的疫苗免疫方案，制定效果確實(shí)的疾病治療方案具有重要意義。

二、臨床癥狀與病理變化

人工感染的潛伏期，新生仔豬為15～30小時(shí)，育肥豬為2天，自然感染可能稍長些。該病的主要臨床癥狀為水樣腹瀉，或者伴隨嘔吐。豬流行性腹瀉病常以暴發(fā)性腹瀉的形式發(fā)生在非免疫斷奶仔豬（I型）或各種年齡的豬（Ⅱ型）?；钾i表現(xiàn)出嘔吐、腹瀉和脫水，與豬傳染性胃腸炎相似，但程度較輕、傳播稍慢；糞稀如水，呈灰黃色或灰色；嘔吐多發(fā)生于吃食或吮乳后。少數(shù)患豬體溫升高1～2℃，精神沉郁，食欲減退或不食，尤其是繁殖種豬。癥狀的輕重隨年齡的大小而有差異，年齡越小，癥狀越重，1周內(nèi)新生仔豬常于腹瀉后2～4天內(nèi)脫水而死，病死率70%～100%。斷奶豬、育肥豬以及母豬常呈現(xiàn)沉郁和厭食癥狀，持續(xù)腹瀉4～7天，逐漸恢復(fù)正常。成年豬僅表現(xiàn)沉郁、厭食、嘔吐等癥狀，如果沒有繼發(fā)感染且護(hù)理得當(dāng)，豬很少發(fā)生死亡。

剖檢可見主要病變?yōu)樾∧c膨脹，充滿淡黃色液體，腸壁變薄，個(gè)別小腸黏膜有出血點(diǎn)，腸系膜淋巴結(jié)水腫，小腸絨毛變短，重癥者絨毛萎縮，甚至消失。胃經(jīng)常是空的，或充滿膽汁樣黃色液體。其他實(shí)質(zhì)性器官無明顯病變。

三、病毒分離鑒定

從2013年9月開始，沂水、莒縣地區(qū)曾有2個(gè)養(yǎng)殖場（豬群總構(gòu)成為母豬1227頭，種公豬40頭，育肥豬6833頭，保育豬和仔豬3817頭）發(fā)生過仔豬腹瀉。隨機(jī)采集臨床有腹瀉癥狀的哺乳仔豬采取小腸內(nèi)容物，共10份，送到山東農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測，證實(shí)該病原為豬流行性腹瀉病毒。

四、疫苗免疫試驗(yàn)

1. 試驗(yàn)材料

①試驗(yàn)豬

本試驗(yàn)于2013年10～12月在沂水錦程畜牧科技發(fā)展有限公司環(huán)保豬場進(jìn)行。隨機(jī)選取同期妊娠健康母豬20頭，隨機(jī)分為A、B、C、D、E共5組，每組5頭，相互分欄隔離飼養(yǎng)管理。

②試驗(yàn)用疫苗

本試驗(yàn)所用的兩種疫苗均從市場購買，分別為TB腹瀉特制二聯(lián)滅活苗、青島易邦PEDV基因缺失苗。

③病毒來源

本試驗(yàn)攻毒所用的病毒液來自本場經(jīng)過病毒分離鑒定的毒株——7日齡仔豬腸道及內(nèi)容物，RT-PCR檢測為PEDV陽性，加入青霉素、鏈霉素研磨，使其終濃度為1000IU/毫升，加入到30%甘油生理鹽水中，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2. 試驗(yàn)方法

①試驗(yàn)前準(zhǔn)備

試驗(yàn)開始前給母豬標(biāo)耳號、仔豬稱重，觀察豬只采食量、糞便和精神狀況等，做好相關(guān)記錄。采用RT-PCR方法對豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬流行性腹瀉、豬傳染性胃腸炎和豬輪狀病毒基因進(jìn)行檢測，確定為陰性。

②疫苗接種。對4組共20頭試驗(yàn)豬按說明后海穴注射疫苗，對照組5頭不進(jìn)行疫苗免疫。A組于產(chǎn)前70天注射TB腹瀉特制二聯(lián)滅活苗，產(chǎn)前40天加強(qiáng)1次；B組于產(chǎn)前60天接種PEDV基因缺失苗，產(chǎn)前40天加強(qiáng)免疫1次；C組于產(chǎn)前70天注射TB腹瀉特制二聯(lián)滅活苗，產(chǎn)前40天加強(qiáng)1次，產(chǎn)前60天接種PEDV基因缺失苗，產(chǎn)前40天加強(qiáng)1次；D組在產(chǎn)前40天，實(shí)行反飼試驗(yàn)，直接飼喂經(jīng)抗生素處理的PEDV陽性仔豬腸道及內(nèi)容物5毫升/天，連續(xù)飼喂3天；E組為空白組。

③攻毒

劑量為5毫升/頭，方法為口服。攻毒后觀察記錄母豬、仔豬的采食量、精神狀態(tài)、排便、發(fā)病和死亡等情況。

3. 結(jié)果

攻毒后，豬只的基本情況見表1。妊娠母豬出現(xiàn)不同程度的腹瀉，糞便呈水樣、惡臭，治療后1～2天康復(fù)，無死亡。哺乳仔豬死亡率較高，仔豬最早出生后2小時(shí)出現(xiàn)腹瀉癥狀，腹水和運(yùn)動僵硬見于接毒后20～30小時(shí)，最晚見于90小時(shí)。腹瀉開始時(shí)排黃色黏稠便，以后變成水樣便，混雜有黃白色的凝乳塊，腹瀉最嚴(yán)重時(shí)糞便幾乎全部為水。嘔吐、腹瀉的同時(shí)患豬伴有精神沉郁、脫水、眼窩下陷、厭食、消瘦和衰竭。癥狀的輕重與年齡大小有關(guān)，年齡越小，癥狀越重。剖檢可見小腸腸壁變薄，呈透明狀，腸系膜淋巴結(jié)水腫、出血，腎臟有出血點(diǎn)。

所選兩類疫苗均為目前市場上所售的中高端產(chǎn)品，通過試驗(yàn)結(jié)果可以看出，此次流行性腹瀉病毒致病性較強(qiáng)，對照組死亡率最高，7日齡內(nèi)死亡率為74%，總死亡率達(dá)85.1%；基因缺失苗的免疫效果優(yōu)于TB二聯(lián)苗免疫效果，而兩者聯(lián)合后免疫效果最好，7日齡以后死亡率僅有3.7%。采用反飼效果比疫苗單用效果稍微好一點(diǎn)，總死亡率達(dá)到35.7%。

五、結(jié)論

通過以上試驗(yàn)，可知產(chǎn)前70天注射TB腹瀉特制二聯(lián)滅活苗，產(chǎn)前40天加強(qiáng)1次，產(chǎn)前60天免疫PEDV基因缺失苗，產(chǎn)前40天加強(qiáng)1次的免疫方案對豬群能夠產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)。

對中大豬、成年母豬發(fā)生該病時(shí)，要采用停食或大幅度限食，停食時(shí)間可持續(xù)2～3天。在停食期間為了防止患豬脫水，可在食槽內(nèi)添加一些補(bǔ)液鹽，有助于降低死亡率。2～3天后患豬開始逐漸恢復(fù)采食，投喂的飼料量要逐步增加，一般經(jīng)過3～7天康復(fù)。

該病是由冠狀病毒引起的，目前尚無有效的治療藥物，但可以使用一些藥物來減輕腹瀉的癥狀，如口服楊樹花口服液或硅鋁酸鹽配合乙酰甲喹（痢菌凈）粉進(jìn)行治療。對個(gè)別腹瀉嚴(yán)重的患豬可肌內(nèi)注射豬干擾素、白細(xì)胞介素或雞新城疫I系苗，配合博落回注射液或阿托品注射液等藥物，可有效控制腹瀉并降低死亡率。由于腹瀉易造成豬脫水死亡，為了降低仔豬的死亡率，可對患豬及時(shí)補(bǔ)充電解質(zhì)和水分（可通過直接飲水、腹腔注射或靜脈注射等方式）。

此外，仔豬對溫度的反應(yīng)非常敏感，冷熱刺激引起仔豬腹瀉，特別是低溫寒冷或高溫潮濕，豬舍的保溫效果不好或濕度過高都會引發(fā)豬流行性腹瀉。所以，我們要綜合考慮才能徹底做好豬流行性腹瀉的防控工作。

（作者聯(lián)系地址：山東省臨沂市沂水縣畜牧局 郵編：276400）