益心泰對(duì)慢性心力衰竭大鼠心肌重構(gòu)和心功能的影響

吳華堂，吳剛強(qiáng)，申 思，毛湘屏，劉文頻，范紅輝

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院老年病科，湖南 長沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410007；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410007）

益心泰對(duì)慢性心力衰竭大鼠心肌重構(gòu)和心功能的影響

吳華堂1，吳剛強(qiáng)2，申 思1，毛湘屏3，劉文頻3，范紅輝3

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院老年病科，湖南 長沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410007；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410007）

目的 探討益氣活血利水方益心泰對(duì)慢性心力衰竭大鼠心肌重構(gòu)和心功能的影響。方法 采用冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法建立慢性心力衰竭（CHF)大鼠模型，將造模成功的SD雄性大鼠隨機(jī)分為模型組、益心泰高10.4 g/（kg·d）、中5.2 g/（kg·d）、低2.6 g/（kg·d）劑量組和科索亞組5.21 g/（kg·d），另設(shè)正常對(duì)照組。模型組灌服同等體積的生理鹽水，每天上午灌胃1次，連續(xù)用藥8周。正常對(duì)照組不做任何處理。8周后檢測(cè)心衰大鼠心臟超聲指標(biāo)、心肌重構(gòu)指標(biāo)。同時(shí)采用H-E染色觀察心肌形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果 與模型組比較，益心泰低、中、高劑量組和科索亞組LVIDs、LVIDd均顯著降低，LVEF、LVFS顯著升高(P＜0.05)。與模型組比較，益心泰低、中、高劑量組和科索亞組左心室質(zhì)量指數(shù)、心臟指數(shù)均顯著降低(P<0.05)。光鏡結(jié)果顯示，益心泰高劑量組及科索亞組心肌損害程度較模型組明顯減輕。結(jié)論 益心泰可改善心衰大鼠的心肌重構(gòu)和心功能，延緩心衰的進(jìn)展。

益心泰；慢性心力衰竭；心肌重構(gòu)；心功能

心肌重構(gòu)是慢性心力衰竭發(fā)生發(fā)展的分子基礎(chǔ)。近年來對(duì)心衰的治療發(fā)生了重大的戰(zhàn)略轉(zhuǎn)移，從單純的改善心衰的癥狀，轉(zhuǎn)移到了早期阻斷心肌重構(gòu)這一環(huán)節(jié)。目前臨床上對(duì)心衰的常規(guī)西藥治療存在一定的副作用，如利尿劑可導(dǎo)致低血鉀和電解質(zhì)紊亂，洋地黃可導(dǎo)致洋地黃中毒。這些副作用都給臨床醫(yī)師帶來了一定困擾。益心泰為中藥復(fù)方制劑，功能為益氣活血利水，主治氣虛血瘀水停證。經(jīng)過大量的臨床研究驗(yàn)證，益心泰對(duì)氣虛血瘀水停型慢性心力衰竭療效確切[1-4]。本課題在益心泰的前期研究基礎(chǔ)之上，以慢性心力衰竭大鼠為研究對(duì)象，采用益心泰進(jìn)行干預(yù)，以期為益心泰干預(yù)心肌重構(gòu)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 110只清潔級(jí)SD大鼠（均由湖南斯萊克景實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供），體質(zhì)量180~220 g。動(dòng)物合格證編號(hào)：43004700004535。飼養(yǎng)環(huán)境通風(fēng)良好，飼料和蒸餾水均由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.1.2 藥品與試劑 益心泰顆粒（由黃芪、紅花、豬苓、丹參等組成）由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科提供。每克益心泰顆粒含3.1 g生藥材；科索亞：由杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn)， 批號(hào)：H20000371；規(guī)格：50 mg/片；臨用時(shí)用蒸餾水配制成混懸液。

1.1.3 主要儀器設(shè)備 電子天平TP-2200B（湘儀天平儀器設(shè)備有限公司提供）；荷蘭philips IE33彩色多普勒超聲診斷儀，探頭S12-4（荷蘭生產(chǎn)）；海利士4℃冰箱 （浙江海利士電器有限公司提供）；820 Histo stat切片機(jī)（Reichert公司提供）；MOTIC顯微圖像攝影系統(tǒng)（麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)公司提供）；電熱恒溫干燥箱（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型的建立[5]110只健康SD雄性大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)抽取15只作為空白對(duì)照組，余95只用于造模。采用冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法制備慢性心力衰竭大鼠模型，其方法簡(jiǎn)述如下：5%戊巴比妥鈉(1～2 mL/kg)腹腔注射麻醉大鼠后，沿第3-4肋間隙打開胸腔，暴露心臟，用鑷子輕提左心耳，于左冠狀動(dòng)脈前降支起源點(diǎn)下2～4 mm處用6號(hào)絲線結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈主干造成心肌梗死。隨即逐層縫合胸壁。術(shù)后記錄標(biāo)準(zhǔn)肢導(dǎo)聯(lián)及胸前導(dǎo)聯(lián)心電圖 (紙速50 mm/s)，ST段弓背抬高者為心肌梗死造模成功。待動(dòng)物恢復(fù)自主呼吸狀態(tài)平穩(wěn)后撤離呼吸機(jī)，并注射青霉素鈉4萬IU，每日1次，共1周，防止感染。常規(guī)喂養(yǎng)飼料與水7周后，大鼠逐漸出現(xiàn)呼吸、心跳加快，怕冷少動(dòng)，倦怠無力，食欲不振、紫紺、皮下水腫等癥狀，造模過程中共死亡20只，剩余75只大鼠和15只空白對(duì)照組大鼠行心臟彩超檢查，空白組大鼠心臟彩超顯示左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)均>60%，而模型組大鼠心臟彩超顯示LVEF<50%，結(jié)合大鼠一般情況表現(xiàn)，提示模型組慢性心力衰竭大鼠模型制備成功。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組及處理 將造模成功的75只心衰大鼠按照LVEF分層后隨機(jī)分為5組，模型組，益心泰高、中、低劑量組和科索亞組，每組15只，加上空白對(duì)照組15只，共6組?？瞻捉M不進(jìn)行藥物干預(yù)，模型組灌服同等體積的蒸餾水，益心泰高劑量組灌服10.4 g/（kg·d），中劑量組灌服5.2 g/（kg·d），低劑量組灌服 2.6 g/（kg·d），科索亞組灌服 5.21 mg/（kg·d），灌胃體積為1~2 mL/100 g，均每日1次，連續(xù)用藥8周。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 超聲指標(biāo) 使用GE公司的ViVi7型彩色多普勒超聲診斷儀，探頭選用10 S，圖像深度調(diào)至2~4 cm，頻率為11.4 MHz，測(cè)量大鼠治療前后左心室舒張末內(nèi)徑 （LVIDd）、左心室收縮末內(nèi)徑（LVIDs）、左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左室短軸縮短率（LVFS）。

1.3.2 心肌重構(gòu)指標(biāo) 動(dòng)物稱體質(zhì)量處死后，迅速取分離后的心臟，用生理鹽水沖洗后用干紗布吸干水分，稱取心臟質(zhì)量。除去心房和右室組織，稱取左心室質(zhì)量，計(jì)算心臟指數(shù)（心臟質(zhì)量/體質(zhì)量）和左心室質(zhì)量指數(shù)（左心室質(zhì)量/體質(zhì)量）。

1.3.3 心肌組織病理學(xué)檢查 取各組大鼠心肌組織行H-E染色，光鏡下觀察心肌形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 用藥后各組大鼠LVIDd和LVIDs比較

與空白對(duì)照組比較，模型組LVIDd、LVIDs顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較，益心泰高、中、低劑量組和科索亞組LVIDd、LVIDs均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與低劑量組比較，益心泰高劑量組和科索亞組LVIDd、LVIDs均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而益心泰高劑量組與科索亞組之間LVIDd、LVIDs比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2 用藥后各組大鼠LVEF和LVFS比較

與空白對(duì)照組比較，模型組LVEF和LVFS顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較，益心泰高、中、低劑量組和科索亞組LVEF和LVFS均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與低劑量組比較，益心泰高劑量組和科索亞組LVEF、LVFS均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而益心泰高劑量組與科索亞組之間LVEF和LVFS差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 用藥后各組大鼠LVIDd、LVIDs、LVFS、LVEF變化情況 （±s，n=15）

表1 用藥后各組大鼠LVIDd、LVIDs、LVFS、LVEF變化情況 （±s，n=15）

注：與空白對(duì)照組比較▲P＜0.05；與模型組比較△P＜0.05；與低劑量組比較*P<0.05。

組別空白對(duì)照組模型組益心泰低劑量組益心泰中劑量組益心泰高劑量組科索亞組劑量g/（kg·d）——2.6 5.2 10.4 5.21×10-3LVIDd（mm）5.17±0.58 7.15±0.59▲6.62±0.63△6.57±0.58△6.15±0.55△* 6.11±0.54△* LVIDs（mm）3.61±0.55 6.23±0.61▲5.77±0.44△5.45±0.46△4.98±0.55△* 5.08±0.47△* LVFS（%）44.25±2.96 31.55±2.33▲34.77±1.31△35.89±2.31△39.44±1.75△* 39.39±1.84△* LVEF（%）2.48±10.23 41.84±2.79▲44.49±3.06△49.31±2.49△53.51±4.0△* 66.92±4.11△*

2.3 各組大鼠心肌重構(gòu)指標(biāo)變化情況比較

與正常對(duì)照組比較，模型組心臟指數(shù)和左心室質(zhì)量指數(shù)明顯增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．01)。與模型組比較，益心泰高、中、低劑量組和科索亞組心臟指數(shù)和左心室質(zhì)量指數(shù)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。與低劑量組比較，益心泰高劑量組和科索亞組心臟指數(shù)和左心室質(zhì)量指數(shù)均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。而益心泰高劑量組與科索亞組之間心臟指數(shù)和左心室質(zhì)量指數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)。見表2。

表2 用藥后各組大鼠心臟重構(gòu)指標(biāo)變化情況（±s，mg／g，n=15）

表2 用藥后各組大鼠心臟重構(gòu)指標(biāo)變化情況（±s，mg／g，n=15）

注：與空白對(duì)照組比較▲P＜0.01；與模型組比較△P＜0.05；與低劑量組比較*P<0.05。

組別空白對(duì)照組模型組益心泰低劑量組益心泰中劑量組益心泰高劑量組科索亞組劑量g/（kg·d）——2.6 5.2 10.4 5.21×10-3心臟指數(shù)2.42±0.06 3.09±0.13▲2.87±0.10△2.78±0.10△2.62±0.07△* 2.65±0.06△*左心室重量指數(shù)1.98±0.08 2.60±0.10▲2.54±0.08△2.51±0.07△2.44±0.07△* 2.43±0.06△*

2.4 光鏡下觀察

H-E染色顯示，空白對(duì)照組大鼠的心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰、排列整齊、連接緊密；模空組、益心泰低劑量組、益心泰中劑量組心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)不但疏松且伴有斷裂、排列紊亂、炎細(xì)胞增多，有明顯出血壞死；益心泰高劑量組、科索亞組心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)稍完整，排列稍齊，無炎細(xì)胞增多及出血壞死。見圖1（封三彩圖）。

3 討論

慢性心力衰竭是各種原因引起的心肌損傷，導(dǎo)致心臟結(jié)構(gòu)或功能的改變，伴有心室充盈和/或射血能力受損的一組臨床綜合征。現(xiàn)心衰的發(fā)病率為0.9%，根據(jù)國外和香港的資料示1年內(nèi)病死率在20%~40%。近年來，隨著免疫組織化學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，對(duì)慢性心力衰竭的發(fā)病機(jī)制有了更深一步的認(rèn)識(shí)?，F(xiàn)認(rèn)為心衰發(fā)生的基本機(jī)制是心肌重構(gòu)。心肌重構(gòu)雖然是一種慢性發(fā)展的過程，但及時(shí)和合理的治療和干預(yù)可抑制其進(jìn)展，甚至逆轉(zhuǎn)。

心臟超聲是評(píng)價(jià)心臟結(jié)構(gòu)和功能的一項(xiàng)客觀檢查手段。其中反映心臟功能性的指標(biāo)有左室射血分?jǐn)?shù)、左室短軸縮短率；而反映心臟結(jié)構(gòu)性的指標(biāo)有左心室收縮末內(nèi)徑、左心室舒張末內(nèi)徑。慢性心衰時(shí)，心肌發(fā)生病理性重構(gòu)，即心臟的結(jié)構(gòu)性指標(biāo)進(jìn)一步升高，功能性指標(biāo)逐漸下降。而控制慢性心衰的有效方法就是抑制心肌重構(gòu)，即有效縮小左室，減輕心臟的負(fù)荷，即減小心臟指數(shù)和左心室質(zhì)量指數(shù)，改善心功能，延緩心衰的慢性進(jìn)展過程。

本課題采用的中藥益心泰是由黃芪、紅花、丹參、澤瀉等中藥組成。方中以大劑量黃芪為君藥大補(bǔ)元?dú)猓蛳[?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃芪有效成分不但能夠改善慢性心力衰竭患者心室收縮和舒張功能，糾正血流動(dòng)力學(xué)異常，尚能抑制心室重構(gòu)，從而控制心力衰竭的進(jìn)展[6-7]；方中配以丹參、紅花兩藥行血中瘀滯。近年來研究顯示[8]，丹參的活性成分提取物丹參多酚酸鹽能改善慢性心力衰竭患者的心功能，抑制炎癥因子，減輕心肌損傷；方中澤瀉、豬苓利水滲濕，全方共奏益氣養(yǎng)心、活血利水之功，通過益氣、活血和利水，達(dá)到補(bǔ)其虛祛其瘀利其水而治療慢性心力衰竭的目的。本研究結(jié)果表明，治療8周后，與模型組比較，益心泰低、中、高劑量組LVIDd、LVIDs和心臟指數(shù)、左心室質(zhì)量指數(shù)均明顯降低 (P<0．05)，而LVEF和LVFS水平顯著升高 (P< 0．05)，說明益心泰不僅能改善心功能，而且能抑制心肌重構(gòu)。同時(shí)通過病理切片光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，各治療組心肌細(xì)胞損傷程度均較模型組明顯減輕，膠原沉積也較模型組顯著減少，尤其以益心泰高劑量組改善較為明顯。進(jìn)一步從病理學(xué)的角度驗(yàn)證了益心泰改善慢性心力衰竭的療效。

綜上所述，益心泰可以改善慢性心力衰竭大鼠心肌重構(gòu)，減少膠原沉積。但是其具體的機(jī)制仍需進(jìn)一步深入探討。

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[2]李 慶.益心泰治療慢性心力衰竭160例臨床觀察[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2010，17(3)：557-558.

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（本文編輯 楊 瑛）

Effect of Yixintai on Myocardial Remodeling and Heart Function in Rats with Chronic Heart Failure

WU Huatang1,WU Gangqiang2,SHEN Si1,MAO Xiangping3,LIU Wenpin3,FAN Honghui3
（1.Department of Gerontology,the First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China;
2.Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China;
3.The Second Affiliated Hospital of HUCM,Changsha,Hunan 410007,China）

Objective To explore the effect of Yixintai on myocardial remodeling and heart function in rats with chronic heart failure．Methods A rat model of chronic heart failure was induced by coronary artery ligationin. Then the model rats were divided equally into five groups:model group，high-dose 10.4 g/(kg·d),middle-dose 5.2 g/(kg·d),low-dose 2.6 g/(kg·d) of Yixintai groups and Cozaar group.The normal control was also designed.The model group was

an equal volume of saline by gavage.The medication was given once daily in each treated group for 8 weeks,the normal control group received no medication.Echocardiographic indicesand myocardialremodeling index wasmeasured by echocardiography after8 weeks of medication.Mealwhile we adopted H-E and Massion staining to observe the morphology changes of left ventricular myocardium.Results Compared with the model group，the LVIDs and LVIDd of high-dose， middle-dose， low-dose of Yixintai groups and Cozaar group was significantly decreased,but the LVEF and LVFS was significantly higher (P＜0.05).Compared with the model group,the left ventricular mass index and heart index of high-dose， middle-dose，low-dose of Yixintai groups and Cozaargroup was significantly decreased (P<0.05).As the lightmicroscopy showed,compared with themodelgroup,thedegreeofmyocardialinjury of high-dose Yixintai group and Cozaar group were significantly reduced.Conclusion Yixintai can improve myocardial remodeling in rats with heart failure and delay the progress of heart failure.

Yixintai;chronic heart failure;cardiac remodeling;heart function

R285.5，R541.6

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2014.07.005.023.04

2014－05－13

湖南省科學(xué)技術(shù)廳科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（2012FJ6051）。

吳華堂，男，醫(yī)學(xué)博士，副主任醫(yī)師，主要從事老年病中醫(yī)藥防治研究。