sTn在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達及臨床意義*

郭 琦 陳秀芹 郭尚云 付建紅 翟旭華 楊曉輝 孟 芳

sTn在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達及臨床意義*

郭 琦 陳秀芹△郭尚云 付建紅 翟旭華 楊曉輝 孟 芳

目的 研究腫瘤相關(guān)糖抗原sTn在子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜非典型增生、良性子宮病變患者子宮內(nèi)膜組織中的表達情況，分析其與子宮內(nèi)膜癌患者手術(shù)病理分期、病理分級等的關(guān)系及臨床意義。方法采用免疫組化方法檢測sTn在子宮內(nèi)膜癌組（93例，包括子宮內(nèi)膜樣癌80例，漿液性乳頭狀癌10例，透明細胞癌3例）、子宮內(nèi)膜非典型增生組（50例）、子宮良性病變組（50例）子宮內(nèi)膜組織中的表達。結(jié)果sTn在子宮內(nèi)膜癌組的陽性率為73.1%，與子宮內(nèi)膜非典型增生組（32%）和良性子宮病變組（14%）差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.017）；sTn在子宮內(nèi)膜樣癌組織中表達率為78.8%，明顯高于在其他組子宮內(nèi)膜組織中的表達（P＜0.008）；sTn在低分化的子宮內(nèi)膜癌中的表達率顯著高于高分化的子宮內(nèi)膜癌（P＜0.017）；在腫瘤浸潤深度＞1/2肌層組的子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達率高于≤1/2肌層組（P＜0.05）；在有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結(jié)論sTn的表達可能在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展中起一定的作用。

子宮內(nèi)膜腫瘤；免疫組織化學；抗原,腫瘤；sTn

Tn抗原是最簡單的黏蛋白型O-聚糖,Sialyl-Tn（sTn）抗原是唾液酸化的Tn抗原，是O-連接黏蛋白糖基化過程中糖鏈合成不完全出現(xiàn)的二糖結(jié)構(gòu)，也是腫瘤相關(guān)糖抗原的一種。它在正常組織中分布相當局限，而在上皮來源惡性腫瘤，尤其是腺癌組織中分布廣泛[1]。子宮內(nèi)膜癌是婦科腫瘤中常見的腫瘤之一，發(fā)病率呈逐年上升趨勢。但是關(guān)于sTn在子宮內(nèi)膜癌中的研究卻很少。本研究通過應用抗sTn單克隆抗體3P9[2-3]檢測子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜組織中sTn的表達，旨在探討sTn與子宮內(nèi)膜癌患者的腫瘤臨床分期及病理分級等的關(guān)系，分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有標本均為2007年1月—2012年12月在鄭州大學第五附屬醫(yī)院經(jīng)手術(shù)切除或診刮送檢標本，其中子宮內(nèi)膜癌93例（包括子宮內(nèi)膜樣癌80例，漿液性乳頭狀癌10例，透明細胞癌3例），子宮內(nèi)膜非典型增生50例，子宮良性病變50例（25例子宮肌瘤和25例子宮內(nèi)膜息肉）。子宮內(nèi)膜癌組患者平均年齡（56.57±7.91）歲，初潮年齡（13.98±3.13）歲，平均孕（3.61±2.01）次，平均分娩（2.08±1.02）次，平均體質(zhì)量（67.35±10.67）kg；子宮內(nèi)膜非典型增生及子宮良性病變組患者平均年齡（49.57±9.62）歲，初潮年齡（14.56±2.97）歲，平均孕（3.28±2.52）次，平均分娩（2.47±0.98）次，平均體質(zhì)量（60.35±9.73）kg。兩組患者在年齡、初潮年齡、孕次、產(chǎn)次、體質(zhì)量差別均無統(tǒng)計學意義（t分別為1.251、1.024、0.653、0.594、1.086，均P＞0.05）。入組子宮內(nèi)膜癌患者，術(shù)前均經(jīng)診刮送病理明確診斷，且術(shù)前均未進行過化療、放療及生物治療。對Ⅰ期患者，行筋膜外全子宮切除+雙側(cè)附件切除+盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)。對Ⅱ期患者，行子宮廣泛切除+雙附件切除+盆腔淋巴結(jié)清掃+腹主動脈旁淋巴結(jié)清掃術(shù)。部分Ⅲ期或Ⅳ期患者行腫瘤細胞減滅術(shù)。子宮內(nèi)膜非典型增生標本及子宮良性病變標本則來自于門診診刮或因上述病變手術(shù)切除子宮患者。

1.2 方法 利用抗sTn單克隆抗體3P9（試劑盒由中國科學院生物物理研究所提供）檢測sTn在子宮內(nèi)膜組織中的表達。所有標本均經(jīng)4%甲醛液固定、石蠟包埋，用Leica石蠟切片機將石蠟包埋組織切成5 μm切片，在載玻片上42℃展片，自然干燥后50℃烤片6 h。取出片子，入二甲苯溶液脫蠟3次，每次5 min。再依次入無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇和蒸餾水中水化。0.3%過氧化氫處理30 min，消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性，PBS洗3次。0.01 mmol/L pH 6.0檸檬酸緩沖液100℃水浴30 min抗原修復。體積分數(shù)5%的正常血清封閉1 h。加入PBS稀釋的抗sTn單克隆抗體3P9于4℃過夜。HRP標記的二抗37℃孵育1 h，PBS洗3次。DAB顯色2～7 min，蘇木素復染。各級乙醇（70%、80%、90%、無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ）脫水，每級3 min，取出切片置入二甲苯5 min，3次。晾干，中性樹脂封片；顯微成像系統(tǒng)拍片。對照：采用陜西超英生物科技有限公司提供的已知陽性切片作陽性對照，結(jié)果陽性。用PBS代替一抗作陰性對照，結(jié)果陰性。子宮內(nèi)膜組織中sTn表達的判定標準：每張切片均取5個高倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞，陽性細胞百分率＜5%為（-）；5%～9%為（+）；10%～24%為（++）；25%～49%為（+++）；50%～100%為（++++）。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件包對資料進行分析，計量資料采用均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料采用例或率表示，組間比較采用χ2檢驗。檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 sTn在子宮內(nèi)膜組織中的染色分布情況 在少數(shù)表達的正常組織和非典型增生組織中，染色主要集中在細胞膜上；而在子宮內(nèi)膜癌組織中sTn的陽性著色廣泛分布在細胞膜和細胞漿，并且在sTn強表達（3+/4+）的組織中，sTn有向管腔彌散表達的現(xiàn)象，見圖1。

2.2 sTn陽性表達與子宮內(nèi)膜病理類型的關(guān)系 sTn在子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜非典型增生、良性子宮病變患者子宮內(nèi)膜組織中的陽性率分別為73.1%、32%、14%，且差異有統(tǒng)計學意義（χ2=51.823，P＜0.05）；sTn在子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達率高于其他2組患者（均P＜0.017），見表1。

Table 1 Relationship between sTn expression and pathological type of the endometrium表1 sTn陽性表達與子宮內(nèi)膜病理類型的關(guān)系 （例）

2.3 sTn陽性表達與子宮內(nèi)膜癌病理類型的關(guān)系 將漿液性乳頭狀癌組與透明細胞癌組合并為Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌組，將子宮內(nèi)膜樣癌列為Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組。各組患者子宮內(nèi)膜組織中sTn陽性率差異有統(tǒng)計學意義（χ2=59.107，P＜0.05）；sTn在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達率均高于在其他各組中的表達率（均P＜0.008），見表2。

Table 2 Relationship between sTn expression and pathological type of the endometrial carcinoma表2 sTn陽性表達與子宮內(nèi)膜癌病理類型的關(guān)系例

2.4 sTn陽性表達與子宮內(nèi)膜癌患者病理特征的關(guān)系 93例子宮內(nèi)膜癌患者中，sTn陽性率在手術(shù)病理分期較早組與手術(shù)病理分期較晚組的差異無統(tǒng)計學意義。sTn在低、中、高分化子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達率差異有統(tǒng)計學意義，sTn在低分化組織中的陽性表達率高于高分化組織（χ2=7.299，P＜0.017），低分化與中分化比較，中分化與高分化組織比較差異無統(tǒng)計學意義（χ2分別為2.590、1.487，均P＞0.017）。sTn在腫瘤浸潤深度＞1/2肌層組的子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達率高于≤1/2肌層組。sTn在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達率差異無統(tǒng)計學意義；見表3。

Table 3 Relationship between sTn expression and pathologic staged of the endometrial carcinoma表3 sTn陽性表達與子宮內(nèi)膜癌患者病理特征的關(guān)系例（%）

3 討論

3.1 sTn的研究現(xiàn)狀及其與子宮內(nèi)膜組織的關(guān)系 sTn是近年來倍受矚目的一種腫瘤相關(guān)糖抗原，在多種上皮性腺癌中高表達，如結(jié)直腸癌[4]、乳腺癌[5]、卵巢癌[6]、膀胱癌[7]等，但在各自相對應的正常組織中不表達。另外，其表達情況與腫瘤的侵襲性和不良預后高度相關(guān)；sTn在某些腺癌患者血清和組織中的高表達，甚至被認為是腫瘤不良預后的獨立預測因子，如結(jié)直腸癌[4]、胃癌[8]、乳腺癌[9]。

子宮內(nèi)膜癌目前尚無特異的早期篩查方法及腫瘤標志物。雖然sTn與各種腫瘤的研究起始已久，但其在子宮內(nèi)膜癌中的研究卻很少，僅有的幾篇報道結(jié)果也不盡相同。Numa等[10]報道稱sTn在子宮內(nèi)膜癌組織中不表達。而Semczuk等[11]報道sTn在大多數(shù)子宮內(nèi)膜癌組織中廣泛表達，在正常和增生的子宮內(nèi)膜中表達有限。Ohno等[12]應用單克隆抗體MLS132對子宮內(nèi)膜癌組織中的sTn進行檢測，發(fā)現(xiàn)sTn在44.3%的患者中表現(xiàn)為廣泛陽性，在17.1%的患者中為局灶陽性，而38.6%為陰性。本研究結(jié)果顯示sTn在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達率顯著高于子宮內(nèi)膜非典型增生、良性子宮病變，與以上研究結(jié)果相似，進一步證實了sTn的腫瘤相關(guān)性，且sTn在子宮內(nèi)膜癌組織中呈高表達，提示sTn可能成為子宮內(nèi)膜癌組織學診斷的一個新的輔助分子。

3.2 sTn與子宮內(nèi)膜癌病理類型的關(guān)系 Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌為雌激素依賴型，病理學類型表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜樣癌。Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌為非雌激素依賴型，病理學類型多為漿液性癌、透明細胞癌或分化較差的未分化癌等類型。國內(nèi)安云鶴等[3]研究指出sTn特異性與Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌相關(guān)。本研究也顯示sTn在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組的陽性表達率顯著高于子宮良性病變組、非典型增生內(nèi)膜組及Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌組，與安云鶴等的研究結(jié)果相似。另外，本研究顯示sTn在Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌組中的陽性表達率與其在子宮良性病變組、非典型增生內(nèi)膜組中的表達差異無統(tǒng)計學意義，從而說明sTn在Ⅰ型及Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌中的表達模式不同，提示sTn在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組的發(fā)生、發(fā)展中起著更重要的作用。由于標本的限制，對于一些其他類型的子宮內(nèi)膜癌，如黏液性腺癌、鱗狀細胞癌等未列入研究范圍，尚有待于進一步的研究。

3.3 sTn與子宮內(nèi)膜癌預后的關(guān)系 sTn在高、中分化的腫瘤組織中表達率明顯高于低分化的腫瘤組織，并認為這預示著sTn可能與子宮內(nèi)膜癌的良好預后相關(guān)[3]。但是Ohno等[12]在對70例子宮內(nèi)膜癌患者進行隨訪及分析后，認為sTn的強陽性表達是影響子宮內(nèi)膜癌患者無復發(fā)生存率的危險因素，預示著子宮內(nèi)膜癌患者的較差預后。Ohno等[12]還指出sTn在子宮內(nèi)膜癌組織的過表達與環(huán)氧酶-2（COX-2）的過表達呈正相關(guān)，與CD8+T淋巴細胞的數(shù)量呈負相關(guān)，從而認為sTn可能與COX-2協(xié)同作用，抑制宿主的免疫監(jiān)督，最終導致子宮內(nèi)膜癌患者無復發(fā)生存率的降低。

本研究顯示，不同手術(shù)病理分期及不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移子宮內(nèi)膜癌患者sTn陽性表達率差異無統(tǒng)計學意義，但sTn在低分化的子宮內(nèi)膜癌中的表達率顯著高于高分化的子宮內(nèi)膜癌，sTn在腫瘤浸潤深度＞1/2肌層組的陽性表達率顯著高于≤1/2肌層組，因此認為sTn高表達者可能預后更差。

另一方面，本研究同時顯示sTn在Ⅱ型內(nèi)膜癌中的表達低于Ⅰ型；而臨床上Ⅱ型內(nèi)膜癌預后更差，似乎與前述結(jié)果矛盾。分析其原因，可能與研究對象的構(gòu)成有關(guān)，即入組的Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌患者中手術(shù)病理分期較晚、低分化、腫瘤浸潤深度較深及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者所占比例較Ⅱ型高。本研究中sTn在低、高分化的子宮內(nèi)膜癌中的表達率與中分化者差異均無統(tǒng)計學意義，可能也與此有關(guān)。

Figure 1 Staining of sTn in endometrial tissues（immunohistochemistry,×100）圖1 sTn在子宮內(nèi)膜組織中的分布（免疫組化,×100）

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（2013-09-09收稿 2014-02-10修回）

（本文編輯 李鵬）

The Expression and Clinical Significance of sTn in Endometrial Carcinoma

GUO Qi，CHEN Xiuqin，GUO Shangyun，F(xiàn)U Jianhong，ZHAI Xuhua，YANG Xiaohui，MENG Fang
The Fifth Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of tumor-associated carbohydrate antigen sTn in endometrium from patients with atypical hyperplasia of endometrium,endometrial carcinoma and benign the uterine lesion.And to analyze the association between sTn and the pathologic stage and grade of endometrial carcinoma.Meth?ods sTn was detected by immunohistochemistry in 193 patient samples,including 93 subjects with endometrial carcinoma, 50 subjects with atypical hyperplasia of endometrium and 50 subjects with benign uterine lesions.ResultsThe positive sTn rate in endometrial carcinoma group was 73.1%，which was significantly different from that in atypical hyperplasia endometrium group(32%)and that in benign uterine lesion group(14%),(P＜0.017).sTn positive rate in patients with endometrial carcinoma was 78.8%which is higher than that in patients with other diseases(P＜0.008).The positive rate of sTn in patients with poorly differentiated endometrial carcinoma was significantly higher than that in patients with highly differentiated endometrial carcinoma(P＜0.017).The positive rate of sTn in tissues of tumor infiltration with depth of more than half of myometrial was significantly higher than in tissues of tumor infiltration with depth of equal or less than half of myometrial (P＜0.05).But there was no significant difference in sTn positive rate between the endometrial carcinoma groups with and without lymph node metastasis(P＞0.05).ConclusionsTn may play a role in the tumorigenesis and development of endometrial carcinoma.

endometrial neoplasms；immunohistochemistry；antigens,neoplasm；sTn

R737.33

A

10.3969/j.issn.0253-9896.2014.06.020

*河南省衛(wèi)生廳醫(yī)學科技攻關(guān)計劃項目（項目編號：2011020069）

鄭州大學第五附屬醫(yī)院（郵編450052）

△通訊作者 E-mail：zdwfy@sohu.com