• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    99Tcm標(biāo)記DPZM類右旋糖苷衍生物的淋巴結(jié)攝取

    2014-06-13 01:30:38李洪玉梁積新楊春慧羅洪義孫桂全鄭德強(qiáng)
    同位素 2014年3期
    關(guān)鍵詞:右旋前哨糖苷

    李洪玉,梁積新,楊春慧,羅洪義,莊 玲,陳 陽,孫桂全,鄭德強(qiáng)

    (1.中國原子能科學(xué)研究院 同位素研究所 北京 102413;2.原子高科股份有限公司,北京 102413;3.中國核工業(yè)北京401醫(yī)院,北京 102413)

    早期診斷是控制癌癥的關(guān)鍵手段之一。盡早發(fā)現(xiàn)局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶對腫瘤的臨床分期、治療方案均有極大的意義。前哨淋巴結(jié)(SLN)是接受原發(fā)腫瘤淋巴回流的第一個(gè)或第一組淋巴結(jié),是最早可能發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的特異淋巴結(jié)。前哨淋巴結(jié)活檢(SLNB)是指獲取前哨淋巴結(jié)并進(jìn)行病理學(xué)檢查的技術(shù)手段。采用影像學(xué)手段準(zhǔn)確定位SLN,對于癌癥的診斷和治療具有重要意義[1-2],而SLN的成功檢出率很大程度上取決于顯像劑的選擇。目前臨床上最常用的SLN顯像劑有99Tcm-硫化銻膠體、99Tcm-硫膠體、99Tcm-人血清白蛋白、99Tcm-右旋糖苷等,但顆粒大小不均,每次注入顆粒總數(shù)不易控制。對顯像及活檢時(shí)間要求嚴(yán)格,在注射點(diǎn)高濃集,且大多是非特異性顯像劑,放射性易從SLN向次級淋巴結(jié)(2LN)遷移并使次級淋巴結(jié)顯像[3-5]。

    研究表明[5-7],右旋糖苷分子骨架,可修飾不同的化學(xué)基團(tuán)而表現(xiàn)出不同的分子性質(zhì),另外還具有水溶性較好、低毒性、低免疫原性、在血液中不易降解等優(yōu)點(diǎn)。99Tcm標(biāo)記的甘露糖基化的右旋糖苷可與淋巴結(jié)巨噬細(xì)胞表面的受體結(jié)合,且其分子大小較為確定,體內(nèi)分布性能較好,在SLN顯像方面具有可觀的應(yīng)用前景。LymphoseekTM(99Tcm-tilmanocept,99Tcm-DTPA-甘露糖基右旋糖苷)作為一種具有受體結(jié)合性質(zhì)的右旋糖苷顯像劑被用于SLN檢測,目前已被美國FDA批準(zhǔn)上市[8]。

    本研究擬用99Tcm標(biāo)記連接有吡唑二胺基團(tuán)的甘露糖基化的右旋糖苷衍生物(Dextran-amine-pyrazole-mannose,DPZM)類化合物,該類化合物可通過兩個(gè)氨基及吡唑環(huán)上的氮原子以NNN鍵與羰基锝進(jìn)行螯合,形成穩(wěn)定的配合物99Tcm-(CO)3-DPZM[9],并對99Tcm-(CO)3-DPZM的生物分布和顯像以及不同注射劑量對正常鼠淋巴結(jié)攝取及體內(nèi)分布的影響進(jìn)行研究。

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1 主要儀器

    99Mo-99Tcm發(fā)生器:原子高科股份有限公司產(chǎn)品;FH463A自動定標(biāo)器、FT-603型閃爍探頭:北京核儀器廠;CRC 15R放射性活度計(jì):美國CAPINTEC公司;微量注射器:美國 Hamilton公司;高效液相系統(tǒng):ProStar 210型,美國Varian公司;HPLC放射性檢測器:德國Raytest公司;Milli-Q高純水制備系統(tǒng):MILLIPORE公司。

    1.2 主要試劑

    Isolink藥盒:由Mallinckrodt-Tyco公司生產(chǎn)并贈送;右旋糖苷衍生物DPZM-4、DPZM-8:由葡萄牙里斯本技術(shù)大學(xué)化學(xué)系的Isabel Rego Dos Santos教授提供;其他實(shí)驗(yàn)所用試劑均為國產(chǎn)分析純,實(shí)驗(yàn)用水均為去離子純化水。

    1.3 實(shí)驗(yàn)動物

    BALB/c小白鼠:30 只,隨機(jī)分組,每組5 只,雌雄兼用,18~22 g;Wistar大鼠:50 只,隨機(jī)分組,每組3~5只,雌雄兼用,180~220 g;清潔級,均由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所提供。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 [99Tcm(CO)3(H2O)3]+的制備

    向Isolink藥盒中加入1 mL 新鮮的Na99TcmO4洗脫液(37~370 MBq),于95 ℃反應(yīng)25~30 min,間歇振蕩,反應(yīng)結(jié)束后,冷卻到室溫,用PBS-HCl緩沖液(0.64 mol/L,pH為2.5)調(diào)節(jié)pH為7.5~8.5。

    2.2 DPZM-4、DPZM-8的99Tcm標(biāo)記[10]

    右旋糖苷衍生物DPZM-4、DPZM-8的化學(xué)結(jié)構(gòu)示于圖1。本研究對兩種甘露糖化右旋糖苷衍生物DPZM-4、DPZM-8進(jìn)行了99Tcm標(biāo)記。將1 mL [99Tcm(CO)3(H2O)3]+溶液(37~370 MBq)分別加入到含有400 μg DPZM-4或DPZM-8凍干品的注射劑瓶中,搖勻,于98 ℃反應(yīng)30 min,即制得標(biāo)記物99Tcm-(CO)3-DPZM-4或99Tcm-(CO)3-DPZM-8。

    2.3 99Tcm-(CO)3-DPZM-4與99Tcm-(CO)3-DPZM-8的放化純度

    采用高效液相色譜(HPLC)和放射性快速薄層層析法(ITLC)分析測定標(biāo)記物的放化純度。HPLC分析條件:C18色譜柱(Hypersil ODS2,φ4.6 mm×250 mm),紫外檢測器波長選擇254 nm,流速為1 mL/ min。淋洗液組成:流動相A 為 0.1%三氟乙酸的水溶液(TFA/H2O),流動相B為 0.1%三氟乙酸的甲醇溶液(TFA/MeOH);淋洗梯度:0~4 min,100% A,0 B;4~6 min,100%~75% A,0~25% B;6~17 min,75%~0 A,25%~100% B;17~25 min,0 A,100% B;25~30 min,0~100% A,100%~0% B;30~35 min,100% A,0% B。

    ITLC分析以ITLC-SG層析紙(Gelman Sciences公司產(chǎn)品)為支持體,采用上行色譜法。展開體系1以2-丁酮為展開劑,展開體系2 以V(HCl)∶V(甲醇)=1∶20為展開劑,展開體系3以V(吡啶)∶V(乙酸)∶V(水)=3∶5∶1 為展開劑。

    2.4 99Tcm-(CO)3-DPZM-4和99Tcm-(CO)3-DPZM-8的穩(wěn)定性

    將標(biāo)記溶液用生理鹽水稀釋50 倍,于室溫下靜置5 h,用HPLC和ITLC分析放化純度,考察其體外穩(wěn)定性。將99Tcm-(CO)3-DPZM-4、99Tcm-(CO)3-DPZM-8由小鼠腳墊皮下注射,給藥后1 h取尿液離心,取上清液進(jìn)行HPLC分析,考察其體內(nèi)穩(wěn)定性。

    2.5 標(biāo)記物在正常鼠體內(nèi)的生物分布

    取健康BALB/c小鼠,隨機(jī)分組,每組 5 只;Wistar大鼠,隨機(jī)分組,每組 5 只。標(biāo)記物溶液用生理鹽水稀釋至放射性濃度為3~37 GBq/L,pH為6~7.5,由正常鼠的右后足腳墊皮下進(jìn)行不同劑量的注射。注射后按摩腳掌30 s以利于藥物吸收,分別于處死前10 min在給藥同側(cè)的腳墊處皮下注入專利藍(lán)溶液,再按摩腳掌30 s。分別于給藥后1、4 h處死,取前哨淋巴結(jié)SLN(即腘窩淋巴結(jié))、次級淋巴結(jié)2LN(即腰淋巴結(jié))、注射點(diǎn)(即右后足)、肝、脾、血等,對肝、脾、血稱重,測量各器官或組織的放射性計(jì)數(shù),計(jì)算放射性攝取率(SLN、2LN、注射點(diǎn)單位為%ID,肝、脾、血的單位為%ID·g-1),并計(jì)算SLN提取率(popliteal extraction rate,PE%),公式如下:

    PE%=[(SLN攝取率-2LN攝取率)/SLN攝取率]×100%

    2.6 正常大鼠體內(nèi)的淋巴結(jié)顯像

    取Wistar大鼠,每組3 只,分為 4 組,于每只右后足腳墊皮下注射不同劑量的標(biāo)記物,分別在給藥后不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行顯像,顯像前10 min腹腔注射0.8 mL 10%水合氯醛溶液對大鼠進(jìn)行麻醉。顯像數(shù)據(jù)在計(jì)算機(jī)系統(tǒng)128×128 矩陣中進(jìn)行記錄與分析,放大倍數(shù)1,采集放射性計(jì)數(shù)50 K/只。

    3 結(jié)果與討論

    3.1 99Tcm-(CO)3-DPZM-4、99Tcm-(CO)3-DPZM-8的制備及穩(wěn)定性

    對于ITLC分析,在展開體系1中,99TcmO4-在前沿,其余組分在原點(diǎn);在展開體系2 中,99Tcm-(CO)3-DPZM類標(biāo)記物在原點(diǎn),其余組分在前沿;而在展開體系3中,99TcmO4-、 [99Tcm(H2O)3(CO)3]+、99Tcm-(CO)3-DPZM類標(biāo)記物均在前沿。

    99Tcm-(CO)3-DPZM-4、99Tcm-(CO)3-DPZM-8及標(biāo)記物稀釋50 倍后的HPLC 譜圖示于圖2(a、b、d、e)。由圖2可知,99Tcm-(CO)3-DPZM-4、99Tcm-(CO)3-DPZM-8的放化純度>90%。

    a——99Tcm-(CO)3-DPZM-4;b——99Tcm-(CO)3-DPZM-4 (稀釋50 倍,靜置);c——99Tcm-(CO)3-DPZM-4小鼠代謝的尿樣品;d——99Tcm-(CO)3-DPZM-8;e——99Tcm-(CO)3-DPZM-8 (稀釋50 倍,靜置);f——99Tcm-(CO)3-DPZM-8小鼠代謝的尿樣品.圖2 各種樣品的放射性HPLC分析圖a——99Tcm-(CO)3-DPZM-4;b——99Tcm-(CO)3-DPZM-4 (50 times dilution,on standing);c——the urine sample from 99Tcm-(CO)3-DPZM-4 metabolism in mice;d——99Tcm-(CO)3-DPZM-8;e——99Tcm-(CO)3-DPZM-8 (50 times dilution,on standing);f—— the urine sample from 99Tcm-(CO)3-DPZM-8 metabolism in mice Fig.2 Radio-HPLC profiles of the samples

    由圖2b、e可見,將99Tcm-(CO)3-DPZM-4、99Tcm-(CO)3-DPZM-8溶液用生理鹽水稀釋50 倍,于室溫下靜置5 h,標(biāo)記物緩慢分解(放化純度下降約10%),有雜質(zhì)和聚合物(ITLC分析)生成。

    給藥后1 h,尿液的HPLC主峰保留時(shí)間未變(圖2c、f),表明標(biāo)記物在小鼠體內(nèi)未發(fā)生分解,具有良好的體內(nèi)穩(wěn)定性。

    3.2 標(biāo)記物在正常鼠體內(nèi)的生物分布

    將99Tcm-(CO)3-DPZM-4經(jīng)右后足腳墊皮下以注射劑量2 μg/25 μL(注射化學(xué)量/注射體積)注入正常BALB/c小白鼠體內(nèi),研究99Tcm-(CO)3-DPZM-4在正常小鼠體內(nèi)的生物分布,并與99Tcm-(CO)3-DCM(Dextran-S-Cysteine-Mannose)(注射劑量2 μg/25 μL)在正常小鼠體內(nèi)的生物分布結(jié)果[11]進(jìn)行對比(見表1)。

    將99Tcm-(CO)3-DPZM-4和99Tcm-(CO)3-DPZM-8經(jīng)右后足腳墊皮下分別以注射劑量0.006 μg / 5 μL注入BALB/c小白鼠體內(nèi),得到相同注射劑量下,兩種標(biāo)記物的SLN攝取及體內(nèi)分布影響的實(shí)驗(yàn)對比結(jié)果(見表2)。

    將99Tcm-(CO)3-DPZM-4和99Tcm-(CO)3-DPZM-8分別以不同注射劑量0.06 μg / 50 μL、0.05 μg / 10 μL注入Wistar大鼠體內(nèi),分別得到兩種標(biāo)記物在不同注射劑量時(shí)的SLN攝取及體內(nèi)分布的影響(見表3)。

    根據(jù)淋巴結(jié)分布結(jié)果計(jì)算前哨淋巴結(jié)提取率PE%,PE%體現(xiàn)了藥物在前哨淋巴結(jié)滯留的比率,該值越大,說明藥物向下一級淋巴結(jié)遷移的可能性越小。

    表1 99Tcm-(CO)3-DPZM-4與99Tcm-(CO)3-DCM在BALB/c小鼠體內(nèi)的生物分布結(jié)果對比

    注:SLN、2LN、注射點(diǎn)攝取率的單位為%ID;肝、脾、血攝取率的單位為%ID·g-1

    99Tcm-(CO)3-DPZM-4與連接有半胱氨酸基團(tuán)的甘露糖基化的右旋糖苷類衍生物99Tcm-(CO)3-DCM(Dextran-S-Cysteine-Mannose)的生物分布數(shù)據(jù)[11]比較可以看出,99Tcm-(CO)3-DPZM-4的SLN攝取和PE%均比99Tcm-(CO)3-DCM高。主要由于兩種配合物結(jié)構(gòu)上的差異,DCM類化合物含有半胱氨酸基團(tuán)支鏈提供了锝的配位點(diǎn)。

    DPZM類標(biāo)記物顯示了較理想的生物分布特征,而99Tcm-(CO)3-DPZM-8又略優(yōu)于99Tcm-(CO)3-DPZM-4(見表2、表3)。DPZM-4與DPZM-8的化合物結(jié)構(gòu)中每摩爾右旋糖苷螯合的吡唑基-二胺單元的數(shù)量不同,DPZM-4含有4個(gè)吡唑二胺螯合單元,DPZM-8含有8個(gè)吡唑二胺螯合單元,螯合的甘露糖基等基團(tuán)的數(shù)量也略有不同。有研究[9]表明,99Tcm標(biāo)記的DPZM類化合物的穩(wěn)定性隨每摩爾右旋糖苷所螯合的吡唑基-二胺單元的數(shù)量的增加而增加,因此,99Tcm-(CO)3-DPZM-8的穩(wěn)定性要優(yōu)于99Tcm-(CO)3-DPZM-4。

    表2 99Tcm-(CO)3-DPZM-4與99Tcm-(CO)3-DPZM-8在BALB/c小鼠體內(nèi)的生物分布結(jié)果對比

    注:SLN、2LN、注射點(diǎn)攝取率的單位為%ID;肝、脾、血攝取率的單位為%ID·g-1

    表3 不同注射劑量對99Tcm-(CO)3-DPZM-4與99Tcm-(CO)3-DPZM-8生物分布的影響

    注:SLN、2LN、注射點(diǎn)攝取率的單位為%ID;肝、脾、血攝取率的單位為%ID·g-1

    99Tcm-(CO)3-DPZM-4、99Tcm-(CO)3-DPZM-8在Wistar大鼠體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果(表3)顯示,注射劑量會影響此類衍生物的體內(nèi)行為,當(dāng)注射劑量 (包括注射化學(xué)量和注射體積) 減少時(shí),SLN的攝取率顯著提高,SLN提取率也相應(yīng)提高。注射體積由50 μL減少到10 μL而注射化學(xué)量接近時(shí)(0.06 μg和0.05 μg),SLN的攝取增加一倍,SLN的提取率也顯著提高,存在顯著差異(P<0.01),但也并不是注射劑量越低越好,注射劑量0.006 μg / 5 μL時(shí)的SLN攝取比0.06 μg / 50 μL和0.05 μg / 10 μL均低,差異顯著(P<0.005)。

    在某些注射劑量及時(shí)相,DPZM化合物SLN 的攝取率并不算太高,但值得注意的是,SLN提取率基本都在70%以上,注射劑量為0.06 μg / 50 μL 時(shí),注射后1 h到4 h,2LN攝取率呈下降趨勢,SLN的提取率隨之增加。

    以上結(jié)果表明,DPZM類標(biāo)記物生物分布較理想,具有較高的SLN攝取率,在肝、脾、血等重要組織或器官中攝取較低,且血清除較快。

    3.3 Wistar大鼠的淋巴結(jié)SPECT顯像

    99Tcm-(CO)3-DPZM-4分別以劑量a:0.5 μg / 50 μL,2.4×106Bq和劑量b:1.3 μg / 50 μL,6.3×106Bq注射入Wistar大鼠的體內(nèi),進(jìn)行SPECT顯像研究,顯像結(jié)果示于圖3。99Tcm-(CO)3-DPZM-8的注射劑量與99Tcm-(CO)3-DPZM-4相同,SPECT顯像結(jié)果示于圖4。

    由圖3、圖4可以看出,顯像結(jié)果與生物分布結(jié)果基本一致,99Tcm-(CO)3-DPZM類化合物具有較高的SLN攝取,給藥后5 min,SLN即已顯影,在隨后的各個(gè)不同時(shí)相,SLN顯像均非常清晰;雖然在注射點(diǎn)仍有較強(qiáng)滯留,但并不影響對SLN的觀察;在肝脾等重要臟器中濃集少,全身放射性本底較低。減少注射劑量可以提高SLN的攝取,有利于得到清晰的顯像效果。

    a—0.5 g / 50 L,2.4×106 Bq;b—1.3 g / 50 L,6.3×106 Bq圖3 99Tcm-(CO)3-DPZM-4在Wistar大鼠體內(nèi)顯像結(jié)果a—0.5 g / 50 L,2.4×106 Bq;b—1.3 g / 50 L,6.3×106 BqFig.3 SPECT images of 99Tcm-(CO)3-DPZM-4 in Wistar rats

    c—0.5 μg / 50 μl,2.4×106 Bq;d—1.3 μg / 50 μl,6.3×106 Bq圖4 99Tcm-(CO)3-DPZM-8在Wistar大鼠體內(nèi)顯像結(jié)果c—0.5 μg / 50 μl,2.4×106 Bq;d—1.3 μg / 50 μl,6.3×106 BqFig.4 SPECT images of 99Tcm-(CO)3-DPZM-8 in Wistar rats

    4 結(jié)論

    用[99Tcm(CO)3(H2O)3]+標(biāo)記DPZM類甘露糖基化的右旋糖苷衍生物DPZM-4與DPZM-8,放化純度均>90%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,99Tcm標(biāo)記的DPZM類右旋糖苷衍生物在正常鼠體內(nèi)可獲得較高的SLN攝取率和SLN提取率,在肝脾等主要器官的攝取低,血清除較快;另外,其生物分布對注射劑量較為敏感,當(dāng)注射劑量(包括注射化學(xué)量和注射體積)減少時(shí),SLN的攝取率和SLN提取率都相應(yīng)提高。顯像實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明適當(dāng)減少99Tcm標(biāo)記的DPZM右旋糖苷衍生物的注射劑量可以提高SLN的顯像效果。綜上所述,99Tcm標(biāo)記的DPZM右旋糖苷衍生物具有優(yōu)良的前哨淋巴結(jié)攝取及體內(nèi)分布性質(zhì),具有應(yīng)用于前哨淋巴結(jié)顯像的潛在價(jià)值,值得進(jìn)一步研究。

    參考文獻(xiàn):

    [1] Mariani G, Moresco L, Viale G, et al. Radioguided sentinel lymph node biopsy in breast cancer suegery[J]. J Nucl Med, 2001, 42: 1 198-1 215.

    [2] Easson AM, Rotstein LE, McCready DR. Lymph node assessment in melanoma[J]. J Surg Oncol, 2009, 99: 176-185.

    [3] 李艷,李囡,翟士楨,等.特異性前哨淋巴結(jié)顯像劑99Tcm-rituximab藥盒的制備及生物評價(jià)[J].同位素,2011,24(增刊):85-89.

    Li Yan, Li Nan, ZhaiI Shizhen, et al. Preparation and Evaluation of a Freeze-dried Kit of99Tcm-rituximab for Sentinel Lymph Node Imaging[J]. Journal of Isotopes, 2011, 24(S1):85-89(in Chinese).

    [4] 李洪玉,梁積新,羅洪義,等.99Tcm-硫化錸膠體用于前哨淋巴結(jié)檢測的生物實(shí)驗(yàn)――注射劑量與明膠濃度的影響[J].同位素,2011,24(2):72-76.

    Li Hongyu, Liang Jixin, Luo Hongyi, et al. Biodistribution of99TcmLabelled Colloidal Rhenium Sulphide for Sentinel Node Detection: the Effects of Dosage and Concentration of Gelatin[J]. Journal of Isotopes, 2011, 24(2):72-76(in Chinese).

    [5] Kyoko T, Tomoya U, Emi K, et al.99Tcm-labeled mannosyl-neoglycoalbumin for sentinel lymph node identification[J]. Nucl Med Biol, 2004, 31(7): 893-900.

    [6] Hoh CK, Wallace AM, Vera DR. Preclinical studies of [99Tcm]DTPA-mannosyl-dextran[J]. Nucl Med Biol, 2003, 30(5):457-464.

    [7] Antonia Woehnl, Carl K Hoh, Jeanette Méndez, et al. Molecular Imaging of the Sentinel Lymph Node via Lymphoseek[J]. Current Clinical Oncology, 2009, 4:123-133.

    [8] Wallace AM, Han LK, Povoski SP,et al. Comparative evaluation of [99Tcm]tilmanocept for sentinel lymph node mapping in breast cancer patients: results of two phase 3 trials[J]. Ann Surg Oncol, 2013, 20(8):2 590-2 599.

    [9] Alves S, Paulo A, Correia J,et al. Pyrazolyl derivatives as bifunctionalchelators for labeling tumor- seeking peptides with the fac-[M(CO)3]+ Moiety(M ) =99Tcm, Re): synthesis, characterization, and biological behavior[J]. Bioconjugate Chem, 2005, 16: 438-449.

    [10] PirmettisI, Arano Y, Tsotakos T, et al. New (99m)Tc(CO)(3) Mannosylated Dextran Bearing S-Derivatized Cysteine Chelator for Sentinel Lymph Node Detection[J]. Mol Pharm, 2012, 9(6):1 681-1 692.

    [11] 李洪玉,梁積新,楊春慧,等.99Tcm標(biāo)記右旋糖苷衍生物DCM-1的淋巴結(jié)攝取和顯像[J].同位素,2013,26(1):16-22.

    Li Hongyu, Liang Jixin, Yang Chunhui, et al. Lymph Nodes Distribution and Imaging Study of99TcmLabeled Dextran Conjugate DCM-1[J]. Journal of Isotopes, 2013, 26(1):16-22(in Chinese).

    猜你喜歡
    右旋前哨糖苷
    淺談自然界的左右旋現(xiàn)象
    中紡院海西分院 服務(wù)產(chǎn)業(yè)的“前哨”
    前哨淋巴結(jié)切除術(shù)在對早期乳腺癌患者進(jìn)行治療中的應(yīng)用效果分析
    紅其拉甫前哨班退伍兵向界碑告別
    國防(2016年12期)2017-01-10 06:31:50
    甜葉菊及其糖苷的研究與發(fā)展探索
    食品界(2016年4期)2016-02-27 07:36:47
    利用烷基糖苷遷移和擴(kuò)張共軛亞油酸囊泡pH窗口
    右旋美托咪定靜脈泵注治療麻醉誘導(dǎo)后陰莖勃起的效果分析
    固體超強(qiáng)酸催化合成丁基糖苷
    右旋美托咪啶增強(qiáng)局麻藥對坐骨神經(jīng)的阻滯作用
    納米炭在腹腔鏡下宮頸癌前哨淋巴結(jié)檢測中的應(yīng)用
    欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 最好的美女福利视频网| 日本成人三级电影网站| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 欧美bdsm另类| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 男人和女人高潮做爰伦理| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产成人欧美在线观看| 波多野结衣高清作品| 精品不卡国产一区二区三区| 国产真实乱freesex| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 最新在线观看一区二区三区| 久久精品国产清高在天天线| 18+在线观看网站| 国产精品久久视频播放| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| a在线观看视频网站| 国产精品日韩av在线免费观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 美女免费视频网站| 色在线成人网| av在线蜜桃| 全区人妻精品视频| 99国产精品一区二区三区| 色综合婷婷激情| 99久久成人亚洲精品观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 很黄的视频免费| 可以在线观看的亚洲视频| 午夜福利视频1000在线观看| 男女视频在线观看网站免费| 男女之事视频高清在线观看| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产高清视频在线观看网站| 高清日韩中文字幕在线| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产三级在线视频| 1000部很黄的大片| 九九在线视频观看精品| 国产视频一区二区在线看| 黄色配什么色好看| 国产精品99久久久久久久久| 国产亚洲精品av在线| 国产精品野战在线观看| 欧美潮喷喷水| 淫妇啪啪啪对白视频| 久久人妻av系列| 精品人妻一区二区三区麻豆 | av专区在线播放| 日本在线视频免费播放| 一级av片app| 亚洲人与动物交配视频| 欧美乱妇无乱码| 欧美乱妇无乱码| 夜夜爽天天搞| 午夜福利在线观看吧| av视频在线观看入口| 欧美性感艳星| 久久久久久大精品| 国产私拍福利视频在线观看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 色吧在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 精品久久久久久久久av| 我的女老师完整版在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 一区福利在线观看| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产欧美日韩一区二区三| 美女大奶头视频| 村上凉子中文字幕在线| netflix在线观看网站| 能在线免费观看的黄片| 国产成人福利小说| 三级国产精品欧美在线观看| 国产av不卡久久| 少妇高潮的动态图| 国产精品久久久久久久久免 | 欧美日韩乱码在线| 少妇被粗大猛烈的视频| 国语自产精品视频在线第100页| av专区在线播放| 网址你懂的国产日韩在线| 国产老妇女一区| 亚洲经典国产精华液单 | 国产黄色小视频在线观看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产伦人伦偷精品视频| 天美传媒精品一区二区| 亚洲av熟女| 久久久久国内视频| 在现免费观看毛片| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 女人被狂操c到高潮| 中出人妻视频一区二区| 国产av一区在线观看免费| 国产精品一区二区免费欧美| 99热精品在线国产| 淫妇啪啪啪对白视频| 中文字幕高清在线视频| 成人永久免费在线观看视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 激情在线观看视频在线高清| 国产黄片美女视频| 国产精品久久久久久久电影| 国产一区二区三区视频了| 国产极品精品免费视频能看的| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲精品亚洲一区二区| 成人国产一区最新在线观看| 成人三级黄色视频| 久久这里只有精品中国| 亚洲av.av天堂| 哪里可以看免费的av片| 精品久久久久久久久av| 日本a在线网址| 免费搜索国产男女视频| 国产精华一区二区三区| 国产麻豆成人av免费视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | xxxwww97欧美| 精品午夜福利视频在线观看一区| 又爽又黄a免费视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产精品99久久久久久久久| .国产精品久久| 男人舔奶头视频| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久亚洲精品不卡| 黄片小视频在线播放| 亚洲精品色激情综合| 欧美一区二区国产精品久久精品| 欧美在线一区亚洲| 在线观看午夜福利视频| 在线观看午夜福利视频| 国产精品精品国产色婷婷| 十八禁人妻一区二区| 国产美女午夜福利| 国产单亲对白刺激| 日韩欧美国产在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 一个人免费在线观看电影| 毛片一级片免费看久久久久 | 国产av不卡久久| 久久久久久久午夜电影| 免费人成视频x8x8入口观看| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲一区高清亚洲精品| 中文字幕免费在线视频6| 男女那种视频在线观看| 国产精品人妻久久久久久| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产毛片a区久久久久| 亚洲中文字幕日韩| 999久久久精品免费观看国产| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲成人精品中文字幕电影| 婷婷色综合大香蕉| 久久久久久久久大av| 一二三四社区在线视频社区8| 99国产综合亚洲精品| 99国产精品一区二区蜜桃av| 在现免费观看毛片| 国产成人欧美在线观看| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 少妇高潮的动态图| 国产三级黄色录像| 亚洲性夜色夜夜综合| 69人妻影院| 给我免费播放毛片高清在线观看| 女人被狂操c到高潮| 国产精品一区二区免费欧美| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 麻豆成人av在线观看| 亚洲真实伦在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 国产成人福利小说| 18禁在线播放成人免费| 欧美乱妇无乱码| 成年免费大片在线观看| 国内精品久久久久久久电影| 日韩欧美在线二视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 午夜福利18| 波多野结衣高清作品| 日韩av在线大香蕉| 欧美xxxx性猛交bbbb| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 午夜视频国产福利| 亚洲经典国产精华液单 | 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲av免费高清在线观看| 成人亚洲精品av一区二区| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲av五月六月丁香网| 久久精品人妻少妇| 一区福利在线观看| 丰满乱子伦码专区| 久久九九热精品免费| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 中文字幕高清在线视频| 国产午夜福利久久久久久| 精品久久久久久久久亚洲 | 波多野结衣高清作品| 18美女黄网站色大片免费观看| 日本黄色片子视频| 窝窝影院91人妻| 小说图片视频综合网站| 午夜福利欧美成人| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产精华一区二区三区| 如何舔出高潮| 看片在线看免费视频| 成年女人看的毛片在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 中文字幕熟女人妻在线| 国产亚洲精品久久久com| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 国产大屁股一区二区在线视频| 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美一区二区精品小视频在线| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久6这里有精品| 很黄的视频免费| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产精品亚洲一级av第二区| 免费看a级黄色片| 99在线人妻在线中文字幕| 毛片女人毛片| 首页视频小说图片口味搜索| 日日夜夜操网爽| 成年版毛片免费区| 久久国产乱子免费精品| 免费高清视频大片| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产精品伦人一区二区| 午夜日韩欧美国产| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲av免费在线观看| 丝袜美腿在线中文| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 免费观看人在逋| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲激情在线av| 久久伊人香网站| 日本黄色片子视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲电影在线观看av| 国内揄拍国产精品人妻在线| 制服丝袜大香蕉在线| 又爽又黄无遮挡网站| 99久久99久久久精品蜜桃| 免费av不卡在线播放| 欧美+亚洲+日韩+国产| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 91在线精品国自产拍蜜月| 久久久久性生活片| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 嫩草影院入口| 最新在线观看一区二区三区| 男女那种视频在线观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产精品av视频在线免费观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 久久久色成人| 国产高清三级在线| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲国产精品999在线| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲国产精品sss在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 简卡轻食公司| 欧美一级a爱片免费观看看| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产主播在线观看一区二区| 免费看美女性在线毛片视频| 美女高潮的动态| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产真实伦视频高清在线观看 | 天堂动漫精品| 久9热在线精品视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 午夜两性在线视频| 99热只有精品国产| 久久久久国内视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲av二区三区四区| 深夜a级毛片| 亚洲av一区综合| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产亚洲精品av在线| 午夜免费成人在线视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 无人区码免费观看不卡| 在线观看舔阴道视频| 国产乱人视频| 淫秽高清视频在线观看| 成人鲁丝片一二三区免费| 757午夜福利合集在线观看| 久久精品国产自在天天线| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产精品久久电影中文字幕| h日本视频在线播放| www.色视频.com| 欧美日韩福利视频一区二区| netflix在线观看网站| 午夜影院日韩av| 欧美成人性av电影在线观看| 精品久久久久久成人av| av天堂中文字幕网| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲欧美日韩高清专用| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 两个人的视频大全免费| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 成年免费大片在线观看| 国产精品99久久久久久久久| avwww免费| 亚洲精品久久国产高清桃花| 高潮久久久久久久久久久不卡| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲无线在线观看| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲专区国产一区二区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产麻豆成人av免费视频| 中文字幕av在线有码专区| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 69人妻影院| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲自偷自拍三级| 一进一出抽搐动态| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 热99re8久久精品国产| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 男女做爰动态图高潮gif福利片| 午夜老司机福利剧场| 国产精品野战在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 乱人视频在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看 | 美女高潮的动态| h日本视频在线播放| 丰满人妻一区二区三区视频av| 好男人在线观看高清免费视频| 免费黄网站久久成人精品 | 一区福利在线观看| 波多野结衣高清作品| 欧美色视频一区免费| 人人妻人人看人人澡| 亚洲国产精品sss在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 1000部很黄的大片| 色哟哟·www| 美女高潮的动态| 九九在线视频观看精品| 波多野结衣高清作品| 99热这里只有是精品在线观看 | 国产精品爽爽va在线观看网站| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 天天一区二区日本电影三级| 国产精品av视频在线免费观看| 1024手机看黄色片| 赤兔流量卡办理| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 日韩亚洲欧美综合| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 欧美bdsm另类| 国产精华一区二区三区| 国产精品人妻久久久久久| 国产不卡一卡二| 欧美成人一区二区免费高清观看| 可以在线观看毛片的网站| 美女大奶头视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产av麻豆久久久久久久| 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久九九热精品免费| 日韩欧美在线乱码| 国产免费av片在线观看野外av| 亚洲人成电影免费在线| 特级一级黄色大片| 亚洲自偷自拍三级| xxxwww97欧美| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲内射少妇av| 国产精品伦人一区二区| 国产老妇女一区| 欧美性猛交黑人性爽| 婷婷丁香在线五月| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 久久久精品欧美日韩精品| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲专区中文字幕在线| 天天躁日日操中文字幕| 午夜精品一区二区三区免费看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 精品久久国产蜜桃| 亚洲美女搞黄在线观看 | 精品人妻熟女av久视频| 国产精品国产高清国产av| 长腿黑丝高跟| 欧美成人免费av一区二区三区| 国内精品美女久久久久久| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 一级av片app| 全区人妻精品视频| 亚洲最大成人av| 亚洲久久久久久中文字幕| 好男人电影高清在线观看| 亚洲av电影在线进入| 精品欧美国产一区二区三| 久久草成人影院| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 国产高潮美女av| 99在线人妻在线中文字幕| 男插女下体视频免费在线播放| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲成人中文字幕在线播放| 日本免费a在线| 亚洲成a人片在线一区二区| 18+在线观看网站| 精品人妻偷拍中文字幕| 床上黄色一级片| 真人一进一出gif抽搐免费| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲av二区三区四区| 午夜a级毛片| 制服丝袜大香蕉在线| 色视频www国产| 成人永久免费在线观看视频| 久久人人精品亚洲av| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 十八禁网站免费在线| 五月玫瑰六月丁香| 女人被狂操c到高潮| 午夜两性在线视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 午夜精品一区二区三区免费看| www日本黄色视频网| 99热6这里只有精品| 全区人妻精品视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 免费一级毛片在线播放高清视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 我要搜黄色片| 精品国内亚洲2022精品成人| 婷婷色综合大香蕉| 99久久精品国产亚洲精品| 12—13女人毛片做爰片一| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 波多野结衣巨乳人妻| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 男女视频在线观看网站免费| 91狼人影院| 十八禁网站免费在线| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 日本与韩国留学比较| 99在线视频只有这里精品首页| 黄色日韩在线| a级毛片a级免费在线| 真实男女啪啪啪动态图| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产日本99.免费观看| 国产精品一区二区性色av| av视频在线观看入口| 9191精品国产免费久久| 国产精品,欧美在线| 色综合欧美亚洲国产小说| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 欧美成人一区二区免费高清观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 久久久久久久午夜电影| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 一级av片app| 久久久久亚洲av毛片大全| 久久久色成人| 一级黄色大片毛片| 一级毛片久久久久久久久女| 99精品在免费线老司机午夜| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 男人狂女人下面高潮的视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 夜夜爽天天搞| 欧美+日韩+精品| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品野战在线观看| 久久久久久久久久黄片| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产三级在线视频| 久久久久九九精品影院| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产在线男女| 久久精品影院6| 国产在线精品亚洲第一网站| 日本 av在线| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲精品在线观看二区| 好男人在线观看高清免费视频| 在线a可以看的网站| 欧美黑人巨大hd| 国内精品一区二区在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 老女人水多毛片| 久久中文看片网| 精品久久久久久久久久久久久| www日本黄色视频网| 成人鲁丝片一二三区免费| av天堂在线播放| 日韩有码中文字幕| 麻豆久久精品国产亚洲av| 男人的好看免费观看在线视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 两个人视频免费观看高清| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久久久久国产a免费观看| 国产成人a区在线观看| 丰满的人妻完整版| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲国产精品999在线| 一级av片app| 精品人妻视频免费看| 99久国产av精品| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 亚洲精品456在线播放app | 大型黄色视频在线免费观看| 久久久色成人| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99精品久久久久人妻精品| 精品人妻偷拍中文字幕| 99热6这里只有精品| 无遮挡黄片免费观看| 中国美女看黄片| 激情在线观看视频在线高清| 91久久精品国产一区二区成人| 国产乱人伦免费视频| 成人午夜高清在线视频| 黄色一级大片看看| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久香蕉精品热| 一本久久中文字幕| 国产一区二区三区视频了| 精品一区二区三区视频在线| 成人国产一区最新在线观看| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲真实伦在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 欧美一区二区国产精品久久精品| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产精品久久久久久精品电影| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚州av有码| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲精品粉嫩美女一区| 中文字幕高清在线视频| 99国产综合亚洲精品| 一个人看视频在线观看www免费| 免费大片18禁| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲av一区综合| 99国产精品一区二区三区| 一个人观看的视频www高清免费观看| 麻豆成人av在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 日本免费一区二区三区高清不卡| aaaaa片日本免费| 搡老岳熟女国产| 亚洲第一电影网av| 欧美黑人欧美精品刺激| 成人一区二区视频在线观看| 嫩草影院精品99| 91在线观看av| 91在线精品国自产拍蜜月| 在线a可以看的网站| 久久午夜亚洲精品久久| 中文字幕av成人在线电影| 美女高潮的动态| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 免费电影在线观看免费观看|