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    坤安煎劑對(duì)去卵巢大鼠體質(zhì)量及皮質(zhì)酮的影響*

    2014-06-11 03:38:40傅金英于勝男徐萌萌李瑞麗
    關(guān)鍵詞:煎劑皮質(zhì)醇皮質(zhì)

    傅金英,于勝男,徐萌萌,李瑞麗,杜 蕾

    (河南中醫(yī)學(xué)院,鄭州 450008)

    絕經(jīng)后婦女由于卵巢功能衰退,雌激素分泌減少,機(jī)體出現(xiàn)糖脂代謝紊亂、脂肪分布改變及骨鈣丟失增加,容易患高血壓、冠心病、糖尿病、骨質(zhì)疏松等疾病[1]。我們?cè)谏钪邪l(fā)現(xiàn),許多女性進(jìn)入中年以后出現(xiàn)腹型肥胖;長(zhǎng)期臨床觀察也發(fā)現(xiàn),中年女性隨著卵巢功能衰退,容易出現(xiàn)脂代謝紊亂,而受腎上腺調(diào)控的皮質(zhì)激素與脂代謝異常及肥胖關(guān)系密切。本實(shí)驗(yàn)采用去卵巢雌鼠模型,通過(guò)觀察“坤安煎劑”對(duì)去卵巢大鼠體質(zhì)量及血清皮質(zhì)酮水平的影響,驗(yàn)證卵巢功能衰退后是否會(huì)影響腎上腺軸(HPA軸),并探討中藥對(duì)其干預(yù)作用機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 動(dòng)物及分組

    選用SPF級(jí)雌性成年Wister大鼠40只,體質(zhì)量200±10 g,由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司提供(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量許可證號(hào)SCXK(魯)20080002)。實(shí)驗(yàn)室溫度18±3℃,相對(duì)濕度70%。

    動(dòng)物適應(yīng)喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為4組:空白組不予任何處理;模型組摘除大鼠雙側(cè)卵巢,術(shù)后7 d給予生理鹽水灌胃,10 ml/kg/次,連續(xù)8周;中藥組摘除大鼠雙側(cè)卵巢,術(shù)后7 d給予中藥“坤安煎劑”灌胃,10 ml/kg/次,相當(dāng)于成人等效劑量的6倍,連續(xù)8周;補(bǔ)佳樂(lè)組摘除大鼠雙側(cè)卵巢,術(shù)后7 d給予補(bǔ)佳樂(lè)生理鹽水混懸液(0.01 mg/ml)灌胃,10 ml/kg/次,相當(dāng)于成人等效劑量的6倍,連續(xù)8周。

    1.2 藥品和試劑

    坤安煎劑組成:北沙參15 g,山茱萸15 g,枸杞20 g,地骨皮 15 g,女貞子15 g,旱蓮草 30 g,知母 15 g,黃柏 12 g,黃芪 30 g,茯苓15 g,杜仲20 g,淫羊藿30 g,煅龍骨 30 g,煅牡蠣 30 g,丹參30 g,酸棗仁 30 g,由河南省中醫(yī)院制藥室提供,1 ml相當(dāng)于3.52 g生藥,4℃冰箱保存?zhèn)溆?鹽酸氯胺酮注射液2 ml,0.1 g/支,由福建古田藥業(yè)有限公司提供(生產(chǎn)批號(hào)H35020148)。注射用青霉素鈉80萬(wàn)單位/支,由華北制藥股份有限公司提供(生產(chǎn)批號(hào)H13020657);生理鹽水500 ml/瓶,由河南太龍藥業(yè)股份有限公司提供(生產(chǎn)批號(hào)H41023506);補(bǔ)佳樂(lè)戊酸雌二醇片由法國(guó)Delpharm Lille SAS提供(生產(chǎn)批號(hào)J20080036);皮質(zhì)酮(CORT)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒,由伊萊瑞特生物技術(shù)有限公司提供。

    1.3 儀器

    AG204型電子天平,動(dòng)物天平(上海精密儀器儀表有限公司),80-2型離心機(jī)(上海云樓醫(yī)用儀器廠),電熱恒溫水浴箱(HI-I·W21·Cu660型上海醫(yī)療器械廠),-80℃超低溫冰箱(美國(guó)),光學(xué)顯微鏡(上海光學(xué)儀器廠)。

    1.4 動(dòng)物模型復(fù)制

    用5%鹽酸氯胺酮注射液將大鼠腹腔注射麻醉(用量100 mg/kg),切開皮膚及肌肉層1-1.5 cm,找到雙角管狀子宮,沿子宮可找到卵巢,將雙側(cè)卵巢摘除止血,再將牽拉出的輸卵管及子宮輕輕放回腹腔。縫合腹肌和皮膚,術(shù)后肌肉注射青霉素每只每天20萬(wàn)U,連續(xù)3 d。大鼠摘除卵巢后3 d,逐只進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞涂片檢查,每天1次,連續(xù)5 d,顯示動(dòng)情周期紊亂,證明去卵巢成功。

    1.5 大鼠稱重及血清皮質(zhì)酮(CORT)水平測(cè)定方法

    末次給藥24 h后稱取各大鼠體質(zhì)量。腹腔麻醉后腹主動(dòng)脈取血5 ml,分離出血清,-80℃保存,用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清皮質(zhì)酮(CORT)水平,檢測(cè)方法嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,組間比較采用單因素方差分析,所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    結(jié)果表明,大鼠卵巢切除后體質(zhì)量明顯升高,與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);補(bǔ)佳樂(lè)組大鼠體質(zhì)量有降低趨勢(shì),但與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);中藥組大鼠體質(zhì)量明顯降低,與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);中藥組與補(bǔ)佳樂(lè)組比較體質(zhì)量降低,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

    表1 各組大鼠體質(zhì)量及血清CORT比較(s)

    表1 各組大鼠體質(zhì)量及血清CORT比較(s)

    注:與空白組比較:▲P<0.01;與模型組比較:*P<0.05,**P<0.01;與補(bǔ)佳樂(lè)組比較:△P<0.01。

    組 別 例數(shù) 體質(zhì)量(g)血清CORT(pg/ml)10 318.70±27.29 102.92± 3.93模 型 組 10 390.88±38.92▲ 205.62± 3.54▲△中 藥 組 10 357.30±36.05* 170.79± 4.36**▲△補(bǔ)佳樂(lè)組 10 378.50±24.05▲ 151.52±25.51空白組**▲

    大鼠卵巢切除后血清皮質(zhì)酮(CORT)水平明顯升高,與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);中藥組及補(bǔ)佳樂(lè)組大鼠血清CORT水平明顯降低,與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);中藥組與補(bǔ)佳樂(lè)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

    3 討論

    更年期綜合征(Climacteric Syndrome,CS)是臨床常見(jiàn)病、多發(fā)病,是婦女在絕經(jīng)前后因卵巢功能逐漸衰退以致雌激素水平下降所引起的以植物神經(jīng)功能紊亂代謝障礙為主的一系列證候群,屬于中醫(yī)“絕經(jīng)前后諸癥”范疇[2]?!端貑?wèn)·上古天真論》曰:“……七七任脈虛,太沖脈衰少,天癸竭,地道不通,故形壞而無(wú)子也?!敝嗅t(yī)認(rèn)為,婦女49歲左右,腎氣漸衰,天癸將竭,任沖二脈虛衰,腎陰虧虛,陰不斂陽(yáng),陽(yáng)浮于外,陰陽(yáng)平衡失調(diào),所以主要表現(xiàn)為腎陰虛,而“陰累及于陽(yáng)”,致陰陽(yáng)兩虛影響心、肝、脾等臟,從而發(fā)生一系列的病理變化而引起絕經(jīng)前后諸癥。近期主要表現(xiàn)為潮熱、出汗、心悸、抑郁、失眠等,遠(yuǎn)期可致骨質(zhì)疏松、泌尿生殖道改變、老年癡呆及心血管疾病發(fā)病率增加[3,4]。治療以補(bǔ)腎滋陰為主,兼以溫陽(yáng)養(yǎng)血、益精填髓。本次研究所用方“坤安煎劑”是導(dǎo)師傅金英教授在基礎(chǔ)研究及大量臨床經(jīng)驗(yàn)中總結(jié)出的經(jīng)驗(yàn)方,由經(jīng)方“知柏地黃丸”合“二至丸”加減化裁而來(lái)。方中北沙參、知母、黃柏滋陰降火;地骨皮退虛熱;山茱萸、杜仲、枸杞、女貞子、旱蓮草補(bǔ)益肝腎、益精填髓;淫羊藿補(bǔ)腎壯陽(yáng);丹參活血化瘀;煅龍骨、煅牡蠣斂汗固精、鎮(zhèn)靜安神;酸棗仁養(yǎng)心安神;黃芪、茯苓益氣健脾。諸藥合用切中病機(jī),共奏補(bǔ)腎填精、調(diào)理氣血、平衡陰陽(yáng)之功效。

    皮質(zhì)醇(cortisol,CORT)是從腎上腺皮質(zhì)中提取出的對(duì)糖類代謝具有最強(qiáng)作用的腎上腺皮質(zhì)激素,屬于糖皮質(zhì)激素的一種,鼠類皮質(zhì)醇含量較少,而以皮質(zhì)酮為主。CORT的分泌水平受HPA軸調(diào)控,HPA軸活性被認(rèn)為與肥胖等的發(fā)生有關(guān),且CORT可以拮抗生長(zhǎng)激素和性激素對(duì)外周脂肪組織的作用,促進(jìn)腹部脂肪的堆積,可見(jiàn)中心性脂肪堆積,即腹型肥胖多數(shù)是CORT分泌增加的結(jié)果。Phillips[5]等報(bào)道,早晨血皮質(zhì)醇水平升高,并與糖耐量異常、胰島素抵抗、高脂血癥、高血壓相關(guān),脂肪組織和肝臟皮質(zhì)醇代謝異常可能在中心型肥胖和代謝綜合征發(fā)病中發(fā)揮重要作用。代謝綜合征(metabolic syndrome,MS)為臨床綜合征,包含多方面的要素:腹型肥胖、胰島素抵抗、血脂異常、血壓異常、糖耐量異常等[6]。殷元萬(wàn)等[7]研究中發(fā)現(xiàn),代謝綜合征患者午夜血清皮質(zhì)醇水平與腰圍、體質(zhì)量指數(shù)、收縮壓、空腹血糖、甘油三酯呈正相關(guān),與高密度脂蛋白、膽固醇呈負(fù)相關(guān)。另外,CORT在各種應(yīng)激狀態(tài)下大量釋放,能直接影響糖、蛋白質(zhì)、脂肪等三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝,通過(guò)“許可作用”保持血管平滑肌對(duì)去甲腎上腺素的敏感性,從而對(duì)心血管系統(tǒng)產(chǎn)生影響[8]。葉林秀等[9]在冠心病患者唾液皮質(zhì)醇水平與糖代謝狀況的研究中發(fā)現(xiàn),冠心病患者皮質(zhì)醇水平顯著升高。湯圓圓等[10]研究發(fā)現(xiàn),急性心肌缺血大鼠CORT含量明顯升高??傊?,皮質(zhì)酮水平與血脂代謝紊亂、心血管疾病的發(fā)生密切相關(guān)。

    本研究發(fā)現(xiàn),大鼠去卵巢后可引起血清皮質(zhì)酮水平的升高和體質(zhì)量的增加,驗(yàn)證了我們之前提出的關(guān)于女性絕經(jīng)后由于卵巢功能衰退進(jìn)而影響到HPA軸的一個(gè)假說(shuō),提示益腎填精中藥“坤安煎劑”可能通過(guò)調(diào)節(jié)血清皮質(zhì)酮水平改善去卵巢大鼠血脂代謝紊亂等情況,為臨床研究提供了實(shí)驗(yàn)支持。但連接HPO-HPA軸的紐帶及其機(jī)制尚待進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)。

    [1]張賢莉.對(duì)絕經(jīng)后婦女激素替代治療的認(rèn)識(shí)[J].臨床合理用藥,2010,3(12):98-99.

    [2]張玉珍.中醫(yī)婦科學(xué)[M].2版.北京:中國(guó)中醫(yī)院出版社,2002:169-172.

    [3]鄧偉民,黃海,曾東,等.補(bǔ)腎壯骨沖劑對(duì)更年期綜合征患者性激素及血脂的影響[J].中醫(yī)雜志,2011,52(3):208-213.

    [4]陸華,胡翔,王靜.左歸丸對(duì)去勢(shì)雌性大鼠子宮和陰道的影響[J].中醫(yī)雜志,2009,50(6):544-546.

    [5]Phillips.DI.Elevated plasma cortisol concentrations:a link between low birth weight and the insulin resistance syndrome[J].J Clin Endocrinol Metab,1998,83:7578.

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    [8]李娜,王涵,文威,等.不可預(yù)見(jiàn)刺激對(duì)大鼠行為學(xué)及HPA軸功能的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2011,7(31):1196-1199.

    [9]葉林秀,劉興暉,郭昆全,等.冠心病患者唾液皮質(zhì)醇水平與糖代謝狀況的研究[J].臨床心血管雜志,2011,27(1):13-15.

    [10]湯園園,凃乾,張英,等.電針內(nèi)關(guān)穴對(duì)急性心肌缺血大鼠血清ACTH、CORT 含量的影響[J].江蘇中醫(yī),2012,44(4):69-70.

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