2011至2013年唐山市豐南區(qū)手足口病病原學(xué)監(jiān)測結(jié)果分析

劉偉 姚向暉

手足口病(hand－foot-mouth-disease，HFMD)近幾年有全球性流行的趨勢，由于該病無法在一次感染后獲得終生免疫且引發(fā)手足口病的腸道病毒有20多種。所以對于重癥病例、聚集性病例、疑難病例實(shí)驗(yàn)室檢測顯得尤為重要。目前國內(nèi)手足口病的病原體以柯薩奇病毒A組16型(CA16)和腸道病毒71型(EV71)為主［1］。為了解豐南地區(qū)手足口病病原體的分布特征，為手足口病的診斷和預(yù)防措施提供科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)將2011至2013年唐山市豐南區(qū)HFMD的病原學(xué)監(jiān)測結(jié)果進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011至2013年唐山市豐南區(qū)醫(yī)療機(jī)構(gòu)就診的手足口病患兒的咽拭子標(biāo)本，標(biāo)本采用冷鏈運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)中心立刻檢測或－70℃凍存待檢。

1.2 主要儀器與試劑 DA7600PCR擴(kuò)增儀DYY-6C型水平電泳儀GAS7100B型凝膠成像儀，人腸道病毒(HEV)RNA、EV71RNA、CA16RNA檢測試劑盒由廣州中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供，引物由上海之江生物科技有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 核酸提取嚴(yán)格按照說明書操作，運(yùn)用Trizol試劑裂解沉淀法提取腸道病毒RNA。

1.3.2 Real Time RT-P CR擴(kuò)增操作均按照試劑盒說明書進(jìn)行，反應(yīng)體系25 μl，每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)置陰性對照和陽性對照擴(kuò)增程序:40℃25 min，1個循環(huán);94℃3 min，1個循環(huán);93℃ 15 s～55℃ 45 s，共40個循環(huán);72℃ 7 min;4℃保存。

1.3.3 檢測擴(kuò)增產(chǎn)物用0.5×TBE緩沖液配制2.5%瓊脂糖凝膠，加樣后110 V電壓持續(xù)電泳50 min，用凝膠成像儀對PCR產(chǎn)物條帶進(jìn)行分析，以DL2000marker作為參照標(biāo)準(zhǔn)在紫外燈下觀察特異性核酸條帶，有目的片段條帶出現(xiàn)即判為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2011至2013年豐南地區(qū)手足口流行情況 豐南地區(qū)的手足口病疫情已開始實(shí)施網(wǎng)絡(luò)直報(bào)，數(shù)據(jù)顯示，2011年報(bào)告發(fā)病強(qiáng)度較高，病例數(shù)達(dá)1714 例，2012和2013年處于較低發(fā)態(tài)勢，分別為377和399例。手足口病發(fā)病數(shù)有明顯的季節(jié)性，4月發(fā)病率逐漸增加，至6、7月達(dá)到峰值，呈單峰型。見圖1。

圖1 豐南區(qū)2011至2013年手足口各自然月病例分布

2.2 不同類型病例檢測結(jié)果 檢測的2490 例病例標(biāo)本中，總腸道病毒核酸陽性2081份，陽性率83.57%，其中EV71陽性634例，陽性率25.46%，CA16陽性1026 例，陽性率41.20%，非EV71、CA16的其他腸道病毒陽性421例，陽性率16.91%。見表1。

表1 豐南區(qū)2011至2013年不同類型手足口病病例病毒核酸檢測情況 份(%)

2.3 手足口病重癥病例發(fā)病情況 本研究結(jié)果顯示3年中豐南區(qū)共報(bào)告手足口病重病例129例，無死亡病例，高峰集中在每年7、8月份。2011年108例，總腸道病毒核酸陽性100例，陽性率 92.60%，其中EV71陽性63例，陽性率58.33%，CA16陽性20例，陽性率18.52%，非EV71、CA16的其他腸道病毒陽性17例，陽性率15.74%。2012年10例，總腸道病毒核酸陽性8例，陽性率80%，其中EV71陽性5例，陽性率50%，CA16陽性2例，陽性率20%，非 EV71、CA16的其他腸道病毒陽性1例，陽性率10%。2013年11例，總腸道病毒核酸陽性10例，陽性率90.91%，其中EV71陽性7例，陽性率63.64%，CA16陽性2例，陽性率18.18%，非EV71、CA16的其他腸道病毒陽性1例，陽性率9.09%。見表1。

2.4 不同年齡患者手足口病例分布 2490例手足口病例患者年齡最小5個月，最大14歲，5歲以下患者2195例，占構(gòu)成比88.15% 。見圖2。

圖2 豐南區(qū)不同年齡手足口病例分布圖

3 討論

3.1 豐南區(qū)2011年的手足口發(fā)病病例明顯偏高，重癥病例也較多，原因可能是個別鄉(xiāng)鎮(zhèn)居民居住條件較差，衛(wèi)生習(xí)慣較差，很多患兒在患病初期家長不夠重視使病情加重，或有些鄉(xiāng)鎮(zhèn)醫(yī)院醫(yī)療條件相對落后，不能給與有效治療。2011年后區(qū)疾控中心針對暴發(fā)嚴(yán)重的鄉(xiāng)鎮(zhèn)重點(diǎn)進(jìn)行手足口病的宣傳，防控工作進(jìn)一步加強(qiáng)，使得此后兩年疫情明顯好轉(zhuǎn)，重癥病例也大大減少。

3.2 手足口病由新西蘭科學(xué)家首次報(bào)道，次年加拿大科學(xué)家從患者中分離出柯薩奇病毒，目前已知引起手足口病的腸道病毒有多種(型)其中以EV71和CA16最為常見，曾有報(bào)道我國1985年前手足口病的主要病原體是 EV71［2］，玉林、青島和重慶［3－5］等地有報(bào)道稱該地區(qū)引發(fā)手足口的主要病原體為EV71和CA16，EV71為優(yōu)勢病毒株，但我們的研究結(jié)果顯示豐南區(qū)手足口的患者主要感染病原體為CA16，說明不同地區(qū)流行的手足口疫情主要病原體不盡相同，同時姜法春等［4，6］報(bào)道同一地區(qū)不同年份或季節(jié)報(bào)告的手足口病例感染的病原體優(yōu)勢菌株也有變化，但所有文獻(xiàn)和研究資料均顯示在我國流行的手足口疫情 EV71和CA16在病原學(xué)中占有重要的位置。

3.3 研究中發(fā)現(xiàn)雖然CA16檢出率更高，但在重癥病例中EV71的陽性率三年均在50%以上，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于CA16，這表明EV71的感染更易引起重癥手足口病。此前有大量報(bào)道稱EV71病毒感染性強(qiáng)，致病率高，易引起神經(jīng)毒性，侵犯肺心腦［3，4，7］。我們的研究中得到同樣的結(jié)論，因此對于EV71的感染更應(yīng)引起高度重視。由于各種病原體所致的手足口病在臨床上難以區(qū)別，利用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行病原學(xué)檢測，能快速準(zhǔn)確的感染病原，有望對臨床診斷和治療提供幫助。

3.4 手足口病的流行具有明顯的年齡性和季節(jié)性，本次研究顯示夏季是手足口病暴發(fā)的高峰，重癥病例也多發(fā)于此季節(jié)，溫暖潮濕的氣候更適于此類病毒的滋生與傳播。感染該病的患者大多數(shù)為兒童，且5歲以下多發(fā)，占總數(shù)的88.15%。因此我們要加強(qiáng)夏季幼兒園和學(xué)校的疫情防護(hù)工作，避免在個別教育場所的大規(guī)模傳染。同時增強(qiáng)幼兒和家長的自我保健意識，尤其5歲以下兒童要加強(qiáng)自身防護(hù)，減少疾病的發(fā)生。

1 朱汝南，錢淵，鄧潔，等.北京市兒童手足口病與腸道病毒71型和柯薩奇病毒A組16型感染有關(guān).中華流行病學(xué)雜志，2007，28:1004-1008.

2 汪飛鵬，陳真，劉世蕓，等.2010年池州地區(qū)手足口病病原學(xué)分析.預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志，2012，3:178-180.

3 葉瑞國，龐曉瀘，蔣寧，等.2010-2011年玉林市手足口病病原學(xué)檢測結(jié)果分析.預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇，2012，18:697-698.

4 姜法春，郝畢，董禮燕，等.青島地區(qū)2007-2011年手足口病病原學(xué)分析.中華疾病控制雜志，2013，17:153-155.

5 趙華，趙春芳，陳應(yīng)瓊，等.重慶市2009年手足口病病原學(xué)分析.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38:2384-2385.

6 李詠梅，張文卿，孫華.2008-2010年淄博地區(qū)70例手足口病患兒病原學(xué)分析.山東醫(yī)藥，2011，51:79-80.

7 羅文英，謝群，朱偉民，等.郴州市2009年46例臨床診斷為手足口病的病原學(xué)分析.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38:1130-1131.