SRB菌的分離鑒定及其對(duì)矸石山酸性廢水的處理

唐婕琳,何 環(huán),張文娟,洪芬芬,張淑雅,孫 夢(mèng),陶秀祥

(1．中國(guó)礦業(yè)大學(xué)化工學(xué)院,江蘇徐州 221116;2．中國(guó)礦業(yè)大學(xué)煤炭加工與高效潔凈利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇徐州 221116)

SRB菌的分離鑒定及其對(duì)矸石山酸性廢水的處理

唐婕琳1,何 環(huán)2,張文娟1,洪芬芬2,張淑雅1,孫 夢(mèng)1,陶秀祥2

(1．中國(guó)礦業(yè)大學(xué)化工學(xué)院,江蘇徐州 221116;2．中國(guó)礦業(yè)大學(xué)煤炭加工與高效潔凈利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇徐州 221116)

為了得到煤矸石山酸性廢水處理的專屬功能微生物,從湖南湘潭某煤矸石山周邊土壤中分離篩選硫酸鹽還原菌,分析菌株的16S rRNA基因序列,形態(tài)和生理生化特性,并利用得到的菌株處理矸石山酸性廢水。16S rRNA基因序列分析表明,所分離得到的硫酸鹽還原菌株S-7與Desulfuromonas alkenivorans同源性達(dá)到99．0%。該菌株為桿狀稍有彎曲,能運(yùn)動(dòng),大小(0．5～0．8)μm× (3．0～4．0)μm,革蘭氏染色顯陰性,最適生長(zhǎng)溫度為30℃,最適pH值范圍6～8,酵母粉為最好的碳源和氮源,硫酸鈉為最適合硫源,菌株經(jīng)培養(yǎng)96 h后細(xì)胞濃度高達(dá)1．76×109個(gè)/mL。培養(yǎng)初始pH為7時(shí),6 d可去除體系中90%硫酸根離子,而不同硫酸根離子濃度對(duì)菌株生長(zhǎng)和硫酸鹽去除效率影響不明顯。S-7菌株對(duì)矸石山酸性廢水中Fe,Mn,Pb和Zn四種重金屬離子均存在處理效果,整體上去除效率為Pb＞Fe＞Zn＞Mn,其中Pb離子經(jīng)7 d處理后去除率達(dá)到100%。

硫酸鹽還原菌;煤矸石山;酸性廢水;重金屬離子

Key words:sulfate-reducing bacteria(SRB);coal gangue dump;acid mine drainage;heavy metal ions

煤炭開(kāi)采利用過(guò)程中煤系及其伴生礦物都被當(dāng)作矸石排放,煤矸石經(jīng)淋溶形成的酸性廢水(acid mine drainage,AMD)是礦區(qū)主要的污染源之一,具有酸度大、重金屬濃度高以及含大量硫酸鹽等特點(diǎn)[1-2]。煤矸石山酸性廢水常用的處理方法有中和沉淀法、粉煤灰吸附法、人工濕地綜合處理法、功能微生物修復(fù)等[3-4]。硫酸鹽還原菌(sulfate-reducing bacterium,SRB)是指一類具有能把硫酸鹽、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽、連二亞硫酸鹽等硫氧化物以及元素硫還原成硫化氫這一生理特性的細(xì)菌的統(tǒng)稱,目前已報(bào)道的SRB共有18個(gè)屬,40多個(gè)種,它們廣泛存在于由微生物分解作用造成的缺氧水陸環(huán)境中[5-6]。利用SRB處理煤礦酸性廢水具有成本低,適用性強(qiáng),無(wú)二次污染,而且還可回收某些重要的金屬硫化物特點(diǎn),已經(jīng)在礦山酸性廢水治理研究中得到較多關(guān)注。胡振琪等[7]利用黃土中分離得到SRB菌株修復(fù)矸石山硫污染,發(fā)現(xiàn)經(jīng)微生物處理后,矸石浸液中硫酸根最高轉(zhuǎn)化率可達(dá)95．5%,其pH值明顯升高,而氧化還原電位和電導(dǎo)率均降低。方迪等[8]研究了小型CSTR反應(yīng)器中硫酸鹽還原菌對(duì)人工酸性重金屬?gòu)U水的處理,發(fā)現(xiàn)pH=2．6～4．3條件下,硫酸鹽還原菌對(duì)重金屬均具有較好的沉淀效果。也有研究人員利用含有稻草和SRB的活性污泥的生物反應(yīng)器來(lái)回收酸性廢水中的Cu2+和Zn2+,發(fā)現(xiàn)兩種金屬離子的回收率分別達(dá)到97%和87%[9]。由于酸性礦坑水pH較低,大多處于3以下,因此篩選得到能夠在酸性條件下具有硫酸鹽還原能力的菌株是當(dāng)前酸性礦坑水治理研究中的熱點(diǎn)。馬保國(guó)等[10]從煤矸石山淋溶水長(zhǎng)期污染的黃土中分離獲得一株硫酸鹽還原菌,研究發(fā)現(xiàn)該菌對(duì)硫酸鹽轉(zhuǎn)化率最高達(dá)94．3%。也有研究人員從酸性礦坑水的沉積物中篩選得到 SRB菌株[11]。本文從矸石山周邊酸性土壤中篩選出一株SRB菌株,首先對(duì)其分子生物學(xué)特性和生理生化性質(zhì)進(jìn)行了分析,然后利用該菌株處理煤矸石山形成的AMD重金屬?gòu)U水。

1 材料與方法

1.1 樣品采集和菌株篩選

土壤樣品取自湖南湘潭某煤矸石山周邊土壤,土壤pH為4．23。菌株篩選和分離參照文獻(xiàn)[10,12]中所描述方法進(jìn)行。

1.2 菌株的分子生物學(xué)鑒定

采用試劑盒(TIANamp Bacteria DNA Kit,DP302-02)提取菌株總基因組,采用細(xì)菌通用引物和擴(kuò)增程序[13]對(duì)菌株16S rRNA進(jìn)行 PCR擴(kuò)增(Biorad,美國(guó)),擴(kuò)增產(chǎn)物送至上海生工測(cè)序公司測(cè)序。

1.3 菌株生理生化性質(zhì)

利用光學(xué)顯微鏡(Nikon,日本)、SEM(JEOL JSM-6360 LV,日本)和TEM(FEI Tecnai G2 20AEM,美國(guó))觀察細(xì)菌的形態(tài)、運(yùn)動(dòng)特征,采用常規(guī)染色方法對(duì)菌株進(jìn)行革蘭氏染色。菌株生長(zhǎng)曲線測(cè)定:在不添加(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O的基本培養(yǎng)基中,接種1%菌液,初始pH為7．0,30℃下恒溫培養(yǎng)9 d,每隔一定時(shí)間間隔取樣分析OD600和細(xì)胞濃度。溫度對(duì)菌體生長(zhǎng)的影響:在測(cè)定溫度(20,25,30,35,40和45℃)下,接種菌液量1%,初始pH為7．0,厭氧培養(yǎng)4 d后取樣分析OD600。初始pH對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響:分別調(diào)節(jié)培養(yǎng)基初始pH為4．0,5．0,6．0,7．0,8．0的梯度,接種量2%,不加指示劑(NH4)2Fe(SO4)2· 6H2O,培養(yǎng)10 d,每天取樣分析。硫酸鹽濃度對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響:分別加入硫酸鹽濃度梯度為1．0,1．5, 2．5,3．0,4．5 mg/L,接種量1%,恒溫培養(yǎng)13 d,每天取樣分析。菌株底物利用情況分析:在基本培養(yǎng)基中加入不同碳源、氮源和硫源進(jìn)行培養(yǎng),用NaOH調(diào)節(jié)pH為7．0,培養(yǎng)4 d后取樣分析細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。

OD600值用分光光度計(jì)分析(UV-2000,北京優(yōu)尼康),細(xì)胞濃度用血小球計(jì)數(shù)板分析,pH值、ORP值以及殘存硫酸根濃度分別用pH計(jì)(PHS-3,上海雷磁)、ORP501復(fù)合電極 (上海雷磁)和國(guó)標(biāo)(GB 7887—87)測(cè)定。

1.4 菌株對(duì)矸石山酸性廢水中重金屬離子的處理試

驗(yàn)

廢水樣品取自該矸石山所形成的淋溶水,樣品呈酸性,pH 為 2．0,暗紅色,有刺鼻性氣味。經(jīng)ICP-MS(LA-ICP-TOF-MS,德國(guó))分析,樣品中含有較多Fe3+,Pb2+,Zn2+,Mn2+。將500 mL樣品過(guò)濾(濾膜孔徑0．45 μm)后,按4%的接種量接種對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌液,并加入高溫滅菌的酵母膏0．5 g和60%乳酸鈉0．25 g,30℃培養(yǎng)。從第3天開(kāi)始每天取樣分析(TAS-990原子吸收光譜儀,北京普析)其中Fe3+, Pb2+,Zn2+和Mn2+濃度。

2 結(jié)果與討論

2.1 菌株分子生物學(xué)鑒定

菌株S-7的16S rRNA擴(kuò)增條帶長(zhǎng)約1．3 kb,經(jīng)測(cè)序后 Blast分析,該菌株與 Desulfuromonas alken-ivorans具有99．0%同源性,通過(guò)軟件MEGA5．10采用N-J法繪出菌株S-7的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(圖1),表明該菌株與Desulfuromonas alkenivorans處于同一進(jìn)化分支上,故將其命名為Desulfuromonas alkenivorans S-7(NCBI的基因登錄號(hào)為KF182278)。

圖1 菌株S-7基于16S rRNA基因序列的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig．1 Phylogenetic tree based on the 16S rRNA gene sequences of strain S-7

2.2 菌株生理、生化性質(zhì)

2.2.1 菌株形態(tài)學(xué)特點(diǎn)

菌株掃描電鏡和透射電鏡照片如圖2所示,菌株S-7為桿狀菌稍有彎曲,大小(0．5～0．8)μm× (3．0～4．0)μm,做波浪式扭動(dòng)運(yùn)動(dòng),革蘭氏染色呈陰性。

圖2 菌株S-7掃描電鏡和透射電鏡Fig．2 Scanning and transmission electron micrographs of strain S-7

2.2.2 菌株S-7株生長(zhǎng)曲線

由圖3可知,菌株S-7在接種后的第1天,OD值和細(xì)胞濃度增長(zhǎng)相對(duì)較緩,推測(cè)該時(shí)期可能菌株生長(zhǎng)的遲緩期;2～4 d時(shí)OD值和細(xì)胞濃度均急劇上升,顯然該時(shí)期為菌株對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,4 d后細(xì)胞濃度急劇減少,而培養(yǎng)液OD值仍處于緩慢上升期,至第7天基本穩(wěn)定后緩慢下降。細(xì)胞濃度在4 d后就急劇減少可能是由于培養(yǎng)體系中累積的硫化氫對(duì)SRB產(chǎn)生抑制所致[13],而細(xì)胞濃度下降后OD值仍上升,可能與生長(zhǎng)過(guò)程中形成的代謝物有關(guān)。

圖3 菌株S-7的生長(zhǎng)曲線Fig．3 Growth curves of strain S-7

2.2.3 溫度對(duì)菌株S-7株生長(zhǎng)的影響

在不同溫度下菌株S-7株生長(zhǎng)隨溫度的變化如圖4所示。

圖4 不同溫度對(duì)菌株S-7生長(zhǎng)的影響Fig．4 Effect of different temperature on the growth of strain S-7

由圖4可知,在15℃和45℃時(shí)細(xì)菌的OD600都小于0．2,S-7菌株在30℃時(shí)OD600達(dá)到峰值0．6,因此S-7菌株屬于中溫菌,溫度生長(zhǎng)范圍20～40℃,最適生長(zhǎng)溫度在30℃左右,且菌株的生長(zhǎng)條件受溫度影響較大。

2.2.4 培養(yǎng)基初始pH值對(duì)菌株S-7生長(zhǎng)的影響

由圖5(a)可知,不同初始pH值培養(yǎng)菌株經(jīng)2 d后,pH值均發(fā)生變化,其中初始pH值低于6．0的培養(yǎng)液pH均上升,而高于6．0則呈下降趨勢(shì),經(jīng)過(guò)2 d培養(yǎng)后所有培養(yǎng)液pH值均穩(wěn)定在6．5左右,這可能與體系中硫化氫的生成有關(guān),堿性條件下硫化氫起到中和作用,而酸性條件下硫化氫較容易從溶液中釋放出來(lái)導(dǎo)致pH緩慢上升。整體上看,菌株的ORP均呈下降趨勢(shì),6 d后趨于平穩(wěn),其值介于-50～-100 mV。其中初始pH值越高,其氧化電位越高,可見(jiàn)ORP受pH值影響較大(圖5(b))。菌株在pH= 4～8均能夠生長(zhǎng),其最適生長(zhǎng) pH值在6～8(圖5(c))。從圖5(d)可知,硫酸根的去除率趨勢(shì)與菌株的生長(zhǎng)趨勢(shì)一致,pH值較低時(shí)菌株生長(zhǎng)緩慢,硫酸根去除率也相應(yīng)較低,可見(jiàn)低pH值對(duì)菌株的生長(zhǎng)和硫酸鹽還原存在抑制作用。

圖5 不同初始pH值對(duì)S-7菌株生長(zhǎng)過(guò)程中pH,ORP,菌株生長(zhǎng)及SO24-去除率的影響Fig．5 Effect of different primary pH values on pH,ORP,strain growth and sulfate removal rate of strain S-7

2.2.5 不同初始SO24-濃度培養(yǎng)基對(duì)S-7菌株生長(zhǎng)的影響

由圖6可知,不同濃度硫酸根離子培養(yǎng)菌株S-7過(guò)程中,體系的pH,ORP,OD600和硫酸根離子去除率的變化趨勢(shì)基本相近,整體上影響不明顯,有可能跟該菌株有較強(qiáng)的耐硫酸鹽濃度有關(guān)。其中,前4 d培養(yǎng)過(guò)程中,pH緩慢下降,且硫酸根離子質(zhì)量濃度較高(4．5 g/L)菌株培養(yǎng)液pH下降相對(duì)較少,經(jīng)第5天急劇上升后又平穩(wěn)在6．5左右(圖6(a))。ORP變化趨勢(shì)與pH變化趨勢(shì)基本一致,前4 d也逐漸下降,經(jīng)第5天上升后最終穩(wěn)定在-100 mV左右(圖6(b))。由此,該菌株培養(yǎng)體系中,pH與ORP保持近正相關(guān)關(guān)系。圖6(c)說(shuō)明,隨著培養(yǎng)過(guò)程進(jìn)行,菌株生長(zhǎng)呈上升趨勢(shì),且濃度較高硫酸根離子對(duì)菌株生長(zhǎng)具有一定促進(jìn)作用。不同濃度硫酸根培養(yǎng)液中硫酸根離子去除率變化趨勢(shì)與菌株生長(zhǎng)基本一致,隨著培養(yǎng)過(guò)程的進(jìn)行,去除率逐漸上升,經(jīng)12 d培養(yǎng)后,體系中硫酸根去除率均達(dá)到90%以上,整體上來(lái)看,高濃度硫酸根離子對(duì)菌株脫除硫酸根效率存在一定抑制作用,這也說(shuō)明硫酸根并非菌株生長(zhǎng)所必需,而僅作為電子受體氧化有機(jī)物,提供能量所需。另外,結(jié)合圖6(a),(b)中菌株pH和ORP值變化趨勢(shì)推測(cè),第5天體系中pH和ORP變化可能與培養(yǎng)過(guò)程中生成硫化氫有關(guān)。

圖6 不同濃度對(duì)菌株S-7生長(zhǎng)過(guò)程中pH,ORP,菌株生長(zhǎng)和去除率的影響Fig．6 Effect of different sulfate concentration on pH,ORP,strain growth and sulfate removal of strain S-7

2.2.6 菌株S-7對(duì)不同碳源、氮源、硫源的利用情況

由表1,2中不同碳源、氮源及硫源條件下菌株SRB生長(zhǎng)情況可知,菌株S-7菌株能夠利用的碳源、氮源和硫源也比較廣泛,其中以酵母粉為碳源,蛋白胨、尿素為氮源,硫酸鈉、單質(zhì)硫和硫脲為硫源時(shí)生長(zhǎng)旺盛。

表1 菌株S-7對(duì)碳源的利用情況Table 1 Utilization of carbon sources by the strain S-7

表2 菌株S-7對(duì)氮源和硫源的利用情況Table 2 Utilization of nitrogen sources and sulfur sources by the strain S-7

2.2.7 菌株S-7與已分離鑒定部分SRB菌株生理生化特性比較

由表3可知,不同菌屬的SRB生理、生化特性存在差異,大多數(shù)SRB菌為桿狀或弧狀,能運(yùn)動(dòng),革蘭氏染色多為陰性。盡管有些菌株篩選環(huán)境為酸性,但是最適pH接近中性或弱酸性,大多數(shù)SRB菌生存溫度接近室溫。碳源主要是給SRB生長(zhǎng)氧化所需的電子供體,最普遍利用的碳源為C3和C4脂肪酸,如乳酸鹽、丙酮酸、蘋果酸;此外還可以利用一些揮發(fā)性脂肪酸,如乙酸鹽、丙酸鹽、丁酸鹽;醇類,如乙醇,丙醇等,并且不同碳源對(duì)SRB還原硫酸鹽效率也存在影響[2,16]。

目前,國(guó)內(nèi)也有研究人員為了增加利用硫酸鹽還原菌治理廢水的應(yīng)用潛力,考慮用一些較廉價(jià)碳源來(lái)替代傳統(tǒng)碳源,如肖麗萍[17]得出雞糞和木屑混合物的發(fā)酵產(chǎn)物可用作SRB菌的碳源。李亞新等[18]研究證明過(guò)用有機(jī)廢棄物和生活垃圾中溫發(fā)酵產(chǎn)物作為有機(jī)碳源也具備可行性。硫源主要作為SRB菌的電子受體存在,硫酸鹽均是大多數(shù)SRB菌首選的硫源,至于其他含硫基質(zhì)利用情況因菌株代謝過(guò)程不同而存在差異。SRB菌利用的氮源主要是銨鹽,也有報(bào)道稱某些SRB還能夠固氮,一些菌種能夠利用氨基酸中的氮作為氮源,少數(shù)菌種甚至能通過(guò)異化還原硝酸鹽和亞硝酸鹽提供氮[19]。

2.3 菌株S-7對(duì)矸石山酸性廢水中重金屬離子的處理

由圖7可知,菌株S-7對(duì)酸性廢水中的Fe,Mn, Pb和Zn四種離子的去除主要集中在處理前期,通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)菌株對(duì)每種離子的去除過(guò)程和去除率均存在差異。從離子濃度變化趨勢(shì)來(lái)看,菌株對(duì)Fe和Zn的變化趨勢(shì)接近,在前3 d迅速下降后快速接近平衡,而Mn和Pb離子濃度在前7 d變化趨勢(shì)較緩。經(jīng)3 d處理后,Fe和Zn離子的去除率分別達(dá)74%和50%(圖7(a),(d));而經(jīng)3 d處理后,廢水中Mn和Pb離 子的 去除 速 率分 別為 36% 和 56% (圖7(b),(c))。

4種離子中,菌株對(duì)Pb離子去除效果最明顯, 7 d后去除效率接近100%,而另外3種離子的去除率變化不明顯,后期均趨于平穩(wěn),整體的去除率為Pb＞Fe＞Zn＞Mn。目前有關(guān)SRB去除重金屬原因有幾種看法,有一部分研究人員認(rèn)為主要是微生物參與了重金屬的吸附[20],也有研究人員認(rèn)為是酸性廢水中豐富的硫酸鹽經(jīng)微生物異化形成的硫化氫后與重金屬形成沉淀[8],另也有報(bào)道稱當(dāng)體系中存在多種離子時(shí),離子共存對(duì)金屬離子的去除也存在影響,存在離子共存效應(yīng)[21-22]。根據(jù)目前的處理結(jié)果推測(cè)菌株S-7對(duì)4種離子的去除機(jī)制可能存在差異,有可能也存在離子共存效應(yīng),其具體原因有待進(jìn)一步研究。

表3 菌株S-7與目前分離鑒定幾株SRB菌株主要特性比較Table 3 Comparison of the major characters between strain S-7 and some other identified SRB strains

圖7 S-7菌株處理酸性廢水時(shí)金屬離子濃度變化Fig．7 Changes of metal ions concentration in the acid mine drainage processed by the strain S-7

3 結(jié) 論

(1)分離純化鑒定出一株SRB菌株S-7,16S rRNA基因比對(duì)分析表明該菌株與 Desulfuromonas svalbardensis具有99%的同源性,理化性質(zhì)研究表明該菌株在20～40℃都能較好生長(zhǎng),最適生長(zhǎng)溫度在30℃左右,對(duì)pH值有較強(qiáng)的適應(yīng)能力,在pH=4～8都能較好生長(zhǎng),最適生長(zhǎng)的pH值在6～8。該菌的適應(yīng)能力強(qiáng),大多數(shù)的有機(jī)碳源,氮源和硫源都能供其生長(zhǎng),其中酵母粉是較好的碳源和氮源,硫酸鈉為最適合硫源。

(2)不同pH值對(duì)硫酸鹽去除效率影響明顯,在pH值為7時(shí),6 d可去除硫酸根離子90%,而不同硫酸鹽濃度對(duì)菌株生長(zhǎng)和去除硫酸鹽影響不太明顯,整體上看,培養(yǎng)體系中的pH值變化與ORP變化密切相關(guān),硫酸鹽的去除率與菌株的生長(zhǎng)密切相關(guān)。

(3)菌株S-7對(duì)酸性廢水中的Fe,Mn,Pb和Zn離子均具有一定的去除效果,整體上來(lái)看,菌株對(duì)4種離子去除效率為Pb＞Fe＞Zn＞Mn,其中Pb離子經(jīng)7 d處理后去除率達(dá)100%。從目前處理結(jié)果來(lái)看,菌株S-7對(duì)4種離子的去除機(jī)制可能存在差異。

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《煤炭學(xué)報(bào)》第7次入選“百種中國(guó)杰出學(xué)術(shù)期刊”

2014年9月26日,科技部中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所在北京發(fā)布了最新的中國(guó)科技論文統(tǒng)計(jì)結(jié)果,《煤炭學(xué)報(bào)》在其所屬的能源科學(xué)綜合類期刊中各項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)優(yōu)勢(shì)明顯,學(xué)科排名第一,再次榮獲“百種中國(guó)杰出學(xué)術(shù)期刊”稱號(hào),這是《煤炭學(xué)報(bào)》第7次獲此殊榮。

Isolation and identification of SRB and its utilization on processing of acid mine drainage of coal gangue dump

TANG Jie-lin1,HE Huan2,ZHANG Wen-juan1,HONG Fen-fen2,ZHANG Shu-ya1,SUN Meng1,TAO Xiu-xiang2
(1.School of Chemical Engineering and Technology,China University of Mining and Technology,Xuzhou 221116,China;2.Key Laboratory of Coal Processing and Efficient Utilization,Ministry of Education,China University of Mining and Technology,Xuzhou 221116,China)

In order to obtain the proper microbes to process the acid mine drainage from coal gangue dump,the sulfatereducing strain was isolated from surrounding soil of a coal gangue dump in Xiangtan City,Hunan Province,China．The 16S rRNA gene sequence,morphology,physiological and biochemical characteristics of isolated strain and its application on processing acid mine drainage were investigated．The 16S rRNA gene analysis shows that the strain S-7 has 99%phylogenic similarity with Desulfuromonas alkenivorans．The strain is slightly curved rods;the motile,with size (0．5-0．8)μm×(3．0-4．0)μm,appears as Gram-negative;and the optimum growth temperature and pH are 30℃and 6-8 respectively．The yeast powder is considered as the best carbon and nitrogen source,sodium sulfate as best sulfide source．After 96 h cultivation,the highest concentration of cells is up to 1．76×109per/mL．At initial pH=7 culture solution,the sulfate removal rate is up to 90%after 6 d cultivation．However,the different sulfate concentrations have no obvious effect on strain growth and sulfate removal rate．The S-7 strain has a better processing effect on Fe,Mn,Pb and Zn ions in the acid mine drainage of coal gangue dump,and the remove rate follows the order of Pb＞Fe＞Zn＞Mn．Among of them,the removal rate of Pb is up to 100%after 7 d processing．

TD849

A

0253-9993(2014)11-2307-08

2013-12-06 責(zé)任編輯:王婉潔

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(51204184);江蘇省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(BK2012137);國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目(201310290035)

唐婕琳(1992—),女,湖南永州人,本科生。E-mail:tangjielin9@126．com。通訊作者:何 環(huán)(1981—),男,湖南平江人,副教授,碩士生導(dǎo)師。E-mail:hehuan6819@cumt．edu．cn

唐婕琳,何 環(huán),張文娟,等．SRB菌的分離鑒定及其對(duì)矸石山酸性廢水的處理[J]．煤炭學(xué)報(bào),2014,39(11):2307-2314．

10．13225/j．cnki．jccs．2013．1803

Tang Jielin,He Huan,Zhang Wenjuan,et al．Isolation and identification of SRB and its utilization on processing of acid mine drainage of coal gangue dump[J]．Journal of China Coal Society,2014,39(11):2307-2314．doi:10．13225/j．cnki．jccs．2013．1803