不同色澤大豆蛋白分離得率的比較

卜 婷

（隴東學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，甘肅慶陽 745000）

不同色澤大豆蛋白分離得率的比較

卜 婷

（隴東學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，甘肅慶陽 745000）

堿溶法提取具有色澤差異的不同種類大豆蛋白后，考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定粗提液的蛋白質(zhì)含量，丙酮抽提并干燥制得大豆蛋白干粉，微量凱氏定氮法測(cè)定干粉中的蛋白質(zhì)含量并進(jìn)行比較，確定蛋白含量及蛋白得率最高的大豆類型．結(jié)果表明不同色澤的大豆蛋白質(zhì)含量不同，綠色大豆的蛋白可溶性及蛋白含量較高，但蛋白干粉得率較低．

色澤；大豆蛋白；分離得率

大豆籽粒蛋白質(zhì)含量較高且氨基酸種類齊全，營(yíng)養(yǎng)豐富，是人類重要的植物蛋白來源．大豆蛋白具有良好的溶解性、乳化性、起泡性、持水性和凝膠性等特性，被廣泛用于食品加工[1-2]．

眾多學(xué)者研究了影響大豆蛋白提取得率的因素[3-6]，大多集中在對(duì)生產(chǎn)條件的控制．但對(duì)實(shí)際生產(chǎn)來說，即使在相同條件下仍常出現(xiàn)產(chǎn)品得率及品質(zhì)的差別．這可能與大豆自身的特點(diǎn)如蛋白溶解性和酸沉等相關(guān)[2]．

目前栽培的大豆是從黑種皮的野生大豆進(jìn)化演變而來,具有黃、綠、黑、褐、雙等豐富的種皮顏色，大豆種皮色與大豆種子外觀以及商品質(zhì)量有密切關(guān)系[7]．費(fèi)家骍等對(duì)不同種皮色的大豆脂肪含量進(jìn)行測(cè)定發(fā)現(xiàn)脂肪含量由高到低依次為：褐、黃、黑、青、雙色[8]．劉秀賢等對(duì)云南省8個(gè)栽培地、10個(gè)種皮色的豆科植物木豆籽實(shí)進(jìn)行蛋白質(zhì)及淀粉含量分析測(cè)定,結(jié)果表明各栽培地、種皮色間淀粉含量有一定差異[9]．對(duì)于種皮色澤與蛋白質(zhì)含量的關(guān)系，目前研究較少，說法不一[8-10]．

河北處于我國(guó)五大大豆主產(chǎn)區(qū)的春大豆區(qū)，本研究選用產(chǎn)自河北的黃、綠、黑三種不同色澤的大豆作為實(shí)驗(yàn)材料，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，測(cè)定蛋白含量及提取蛋白得率并進(jìn)行比較，為大眾選擇高蛋白類大豆產(chǎn)品提供參考依據(jù)．

1 材料與方法

1.1 材料

大豆品系為冀黃13號(hào)，產(chǎn)自河北，購(gòu)自慶陽市西峰區(qū)種子公司．黃色大豆、綠色大豆、黑色大豆為同一品系，種皮色澤不同．

1.2 試劑

過氧化氫；鹽酸；氫氧化鈉；95%乙醇；硫酸鉀；無水硫酸銅；丙酮；甲基紅；溴甲酚綠；考馬斯亮藍(lán)；人血清標(biāo)準(zhǔn)蛋白．

1.3 主要設(shè)備

722S型可見光分光光度計(jì)，上海棱譜儀器儀表有限公司；M20粉碎機(jī)，安捷來國(guó)際股份（香港）有限公司；凱氏定氮儀，福斯華(北京)科貿(mào)有限公司；真空干燥箱，南京福如機(jī)械設(shè)備有限公司．

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 堿溶法提取蛋白

參照李桂菊等使用的方法并做了適當(dāng)改進(jìn)[6,11]．取3g大豆粉用0.2%NaOH溶液30ml室溫下攪拌抽提15min，4000r/min離心15min，取上清液即為蛋白粗提液．

2.2 考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定粗提液蛋白濃度

參照李寧[12]和張志良[13]等所采用的方法．取適量蛋白粗提液樣品,加入5mL考馬斯亮藍(lán)G-250試劑并搖勻，放置5min后，在595nm波長(zhǎng)下比色記錄吸光度值．根據(jù)所測(cè)吸光度值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得蛋白質(zhì)含量．每個(gè)樣品重復(fù)三次，取平均值．

2.3 粗蛋白含量計(jì)算

粗蛋白含量(mg/100g)=Y×Va/(Vx×W)×0.001×100

式中：Y為大豆蛋白粗提液濃度(μg/ml)；Va為大豆蛋白粗提液的總體積(ml)；Vx吸光度值測(cè)定時(shí)所用蛋白粗提液稀釋液的體積（ml）；W為用于蛋白提取的大豆粉質(zhì)量(g)．

2.3 丙酮法制取大豆蛋白干粉

取適量蛋白粗提液，加入等體積預(yù)冷的丙酮，6mol/L的HCl調(diào)pH值至4.5～5.0，于4000r/min離心15min，收集沉淀物，并用少量丙酮洗滌沉淀兩次．此沉淀物即為大豆蛋白，用濾紙吸干、平鋪在表面皿上，放入40℃烘箱干燥2小時(shí)后稱重并計(jì)算蛋白干粉得率．蛋白干粉得率(%)=(提取的大豆蛋白干粉質(zhì)量／用于蛋白提取的大豆粉質(zhì)量)×100%．

2.4 微量凱氏定氮法測(cè)定干粉中的蛋白質(zhì)含量

參照文獻(xiàn)[14-17]進(jìn)行，最后計(jì)算樣品中蛋白含量．樣品中蛋白含量（%）=（Vm-Vn）c×14×6.25/m×100式中：Vm為滴定樣品用去鹽酸的體積，ml；Vn為滴定空白用去鹽酸的體積，ml；c為標(biāo)準(zhǔn)鹽酸的濃度，mol/L；14為氮的摩爾質(zhì)量，g/mol；m為用于蛋白含量檢測(cè)的蛋白干粉樣品質(zhì)量，mg．

2.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel2003軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間比較采用t-檢驗(yàn)，p<0.05表示有顯著性差異，p<0.01表示有極顯著性差異．

3 結(jié)果與分析

3.1 堿溶液提取蛋白含量比較

堿溶法提取大豆蛋白得到蛋白粗提液，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)G-250染色后測(cè)其吸光度值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線可計(jì)算出不同色澤大豆的粗提液蛋白濃度．結(jié)果如圖1所示：

圖1 堿熔法提取的不同色澤大豆蛋白粗提液蛋白濃度（“＊＊”表示粗提液蛋白濃度與其它兩組相比有顯著性差異，p<0.01）

結(jié)果顯示黃色大豆蛋白粗提液濃度為73.63μg/ ml，綠色大豆蛋白粗提液濃度為80.46μg/ml，黑色大豆蛋白粗提液濃度為74.61μg/ml，綠色大豆蛋白粗提液濃度最高，黑色大豆次之，黃色大豆最低．

計(jì)算不同蛋白粗提液粗蛋白含量，結(jié)果如表1所示．

表1 不同色澤大豆粗蛋白含量比較

黃色大豆、綠色大豆、黑色大豆的粗蛋白含量分別為57.42%、63.51%、62.84%，亦是綠色大豆的粗蛋白含量最高．這與費(fèi)家骍等1983年對(duì)不同粒色大豆與蛋白質(zhì)含量關(guān)系的研究結(jié)果基本一致[8]．

3.2 不同色澤大豆蛋白干粉得率

蛋白粗提液經(jīng)預(yù)冷的丙酮抽提并干燥可得到大豆蛋白干粉，對(duì)抽提后得到不同色澤的大豆蛋白干粉質(zhì)量進(jìn)行稱量并統(tǒng)計(jì)，計(jì)算大豆蛋白干粉得率（表2）．

表2 不同色澤大豆蛋白干粉得率的比較

比較幾種大豆的蛋白干粉得率，可以看出在本實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)下，測(cè)得黑色大豆蛋白干粉得率最高，為38.9%，黃色大豆次之，為36.87%，綠色大豆最低，為33.8%．

3.3 大豆蛋白干粉中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定

微量凱氏定氮法對(duì)所提取的大豆蛋白干粉樣品的蛋白含量進(jìn)行了測(cè)定（表3）．

表3 不同色澤大豆蛋白干粉蛋白質(zhì)含量的比較

由表3可知，黃色、綠色、黑色大豆蛋白干粉蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)含量分別為35.486%、38.19%、32.61%．因此，從干粉中的蛋白含量來看，綠色大豆最高，黑色大豆最低．

4 結(jié)論

根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以得出結(jié)論：不同色澤的大豆蛋白可溶性、蛋白含量均有差異，綠色大豆溶解性最高，且在不同色澤大豆蛋白干粉質(zhì)量一樣的前提下測(cè)得蛋白含量最高，但丙酮抽提率較低，因此如何提高綠色大豆蛋白干粉得率是我們急需解決的問題．本研究結(jié)果對(duì)于食品行業(yè)中大豆原材料的選用具有一定參考意義．參考文獻(xiàn)：

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[責(zé)任編輯魯海菊]

Comparison on Yield Rate of Soybean Protein Extracted from Different Color Soybean

BU Ting
(College of life science and technolog logy,Longdong Universty,Longdong 745000,China)

in this study,alkali solution is used to extract soybean protein from different kinds of soybean with different colors,Bradford is used for determining the protein content of the crude extract,then acetone extraction and drying to get soybean protein powder,trace Kiadhal method is used to determine protein content in the powder and then to make a comparison to makesure the soybean type in highest protein content and yield rate.The results showed that the soybean protein content in different color soybean is different,soybean in green color has the highest protein solubility and content,but with low protein powder yield rate.

soybean protein;extract;yield rate of the protein

Q81

：B

：1008-9128（2014）05-0019-02

2013-12-22

隴東學(xué)院青年科技創(chuàng)新項(xiàng)目（XYLK1304）

卜婷（1985-），女，甘肅慶陽人，講師，碩士，研究方向：生物技術(shù)。