柴胡疏肝散對(duì)抑郁癥模型大鼠HPA軸功能的影響?

馬書娟，姚建平,樊蔚虹,禹 方

(1.河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，鄭州 450004；2.河南中醫(yī)學(xué)院，鄭州 450046)

下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸是一個(gè)重要的內(nèi)分泌軸，是神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)的樞紐，對(duì)維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的平衡起著至關(guān)重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，HPA軸功能紊亂與抑郁癥的發(fā)生有密不可分的關(guān)系。HPA軸的功能亢進(jìn)是抑郁癥患者的主要神經(jīng)內(nèi)分泌改變，這種HPA軸功能亢進(jìn)隨著抑郁癥的加重或緩解也隨之發(fā)生改變。本實(shí)驗(yàn)采用慢性應(yīng)激法造成大鼠HPA軸功能紊亂模型即抑郁癥模型，以柴胡疏肝散進(jìn)行干預(yù)觀察各組大鼠HPA軸功能的差異，探索柴胡疏肝散治療抑郁癥的作用機(jī)理。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠100只，體質(zhì)量(200±20)g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(動(dòng)物許可證號(hào)SCXK(豫)2010-0002)。

1.2 主要試劑與藥品

大鼠(Rat)促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒，大鼠(Rat)皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA試劑盒，中藥(飲片)由河南東升藥業(yè)有限公司提供。

1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器

酶標(biāo)儀。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組、造模與給藥

SPF級(jí)SD雄性大鼠，open-field法進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)總得分低于30分或高于120分的動(dòng)物予以剔除。選擇60只動(dòng)物按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組、模型組、柴胡疏肝散組3組，每組20只。采用慢性應(yīng)激造模方法，應(yīng)激刺激參考文獻(xiàn)[1]改進(jìn)，冰水游泳、熱應(yīng)激、束縛、夾尾、禁水、禁食及晝夜顛倒共7種刺激，每日隨機(jī)安排1種刺激方式，整個(gè)刺激實(shí)驗(yàn)每種刺激給予3次共21 d。柴胡疏肝散組大鼠在應(yīng)激開始時(shí)灌胃給藥，每日1次，模型組蒸餾水ig共21 d。

2.2 藥材及制劑

柴胡疏肝散方藥參照中國中醫(yī)藥出版社《中醫(yī)方劑學(xué)》第七版教材。按原方比例水提，生藥濃度為1 g/ml。大鼠按生藥量7.875 g/kg/d灌胃，相當(dāng)于成人(60 kg)臨床用量的15倍。從應(yīng)激刺激開始灌胃至應(yīng)激結(jié)束止共用藥21 d。

2.3 取材

大鼠腹腔麻醉(25%烏拉坦，0.75 mg/kg)，腹主動(dòng)脈取血8 ml,其中4 ml用于制備血漿，另4 ml用于制備血清，-70℃保存。

2.4 指標(biāo)檢測(cè)

2.4.1 ELISA法檢測(cè)大鼠血清ACTH濃度 從室溫平衡20 min 后的鋁箔袋中取出所需板條；設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 μL；樣本孔先加血清10 μL，再加血清稀釋液40 μL，空白孔不加；除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100 μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋溫育60 min；棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液靜置1 min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，重復(fù)洗板5 次；每孔加入底物A、B 各50 μL，37℃避光孵育15 min； 每孔加入終止液50 μL，15 min 內(nèi)在450 nm 波長處測(cè)定各孔的OD 值。

2.4.2 ELISA法檢測(cè)大鼠血漿CORT濃度 方法同上。

2.5 數(shù)據(jù)及結(jié)果分析

在Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 柴胡疏肝散對(duì)抑郁癥大鼠血清ACTH濃度的影響

表1顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清ACTH濃度顯著升高(P<0.05)；與模型組比較，柴胡疏肝散組大鼠血清ACTH濃度顯著降低(P<0.05)。

表1 大鼠血清ACTH濃度比較(±s)

表1 大鼠血清ACTH濃度比較(±s)

組 別例數(shù)劑量(生藥g5kg-1)血清ACTH濃度(pg/ml)正常對(duì)照組10—22.34±1.88*模型組10—44.30±2.58柴胡疏肝散組107.87522.66±2.05*

注：與模型組比較:＊P<0.05

3.2 柴胡疏肝散對(duì)抑郁癥大鼠血漿CORT濃度的影響

表2顯示，與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠血漿CORT濃度顯著升高(P<0.05)；與模型組比較，柴胡疏肝散組大鼠血漿CORT濃度顯著降低(P<0.05)。

表2 大鼠血漿CORT濃度比較(±s)

表2 大鼠血漿CORT濃度比較(±s)

組 別例數(shù)劑量(生藥g5kg-1)CORT濃度(ng/ml)正常對(duì)照組10— 8.66±0.60*模型組10— 11.95±0.88柴胡疏肝散組107.87510.20±0.54*

注：與模型組比較:＊P<0.05。

4 討論

HPA軸是神經(jīng)內(nèi)分泌的重要組成部分，下丘腦分泌促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)作用于腺垂體，調(diào)控腺垂體促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)的分泌，ACTH又可作用于腎上腺皮質(zhì)，影響HPA軸終末激素(靈長類為皮質(zhì)醇，嚙齒類為皮質(zhì)酮)的分泌。研究發(fā)現(xiàn)，抑郁癥患者的血漿皮質(zhì)醇濃度增加，失去了正常人夜間自發(fā)性分泌抑制的規(guī)律，整日處于腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)狀態(tài)。Rubin[2]等研究發(fā)現(xiàn)，與健康對(duì)照組比較，抑郁癥患者的腎上腺皮質(zhì)增生約38%，增生程度與皮質(zhì)醇濃度有關(guān)，且隨著抑郁的恢復(fù)，這種增生似乎隨皮質(zhì)醇濃度恢復(fù)而逐漸消失。唐萍等[3]對(duì)23例抑郁癥患者治療前后皮質(zhì)醇和促皮質(zhì)醇激素變化研究中發(fā)現(xiàn)，抑郁癥患者血漿ACTH水平顯著升高，血漿皮質(zhì)醇水平也有顯著升高。徐虹等[4]研究亦證實(shí)，抑郁癥患者HPA軸功能亢進(jìn)是狀態(tài)依賴。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，慢性應(yīng)激可使大鼠血漿CORT濃度增高[5]。

抑郁癥是西醫(yī)病名，類似中醫(yī)“郁證”、“癲證”、“臟躁”及“百合病”等疾病。雖然很多醫(yī)家認(rèn)為抑郁癥就是中醫(yī)的“郁證”，是由情志不舒、氣機(jī)郁滯所致，以心情抑郁、情緒不寧、胸部滿悶、胸脅脹滿，易哭易怒、咽中如物阻等癥狀為主要臨床表現(xiàn)的一類病癥，但抑郁癥不單純屬于中醫(yī)“郁證”范疇,在“百合病”等其他古代文獻(xiàn)中亦有記載。所以抑郁癥的表現(xiàn)形式可在多種中醫(yī)病名的癥狀中出現(xiàn),與郁證二者不是簡單的等同關(guān)系。抑郁癥病因繁多、病機(jī)復(fù)雜，但從肝論郁為大多數(shù)醫(yī)家所認(rèn)同，認(rèn)為其基本病機(jī)為肝氣郁結(jié)并貫穿疾病始終，因此疏肝解郁是中醫(yī)治療抑郁癥的基本法則。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠血清ACTH和血漿CORT的濃度均顯著高于正常對(duì)照組，而柴胡疏肝散組大鼠血清ACTH和血漿CORT的濃度顯著低于模型組，表明抑郁癥模型大鼠HPA軸功能亢進(jìn)，其分泌ACTH和COR增多，柴胡疏肝散可通過調(diào)節(jié)亢進(jìn)的HPA軸功能，減少大鼠ACTH和CORT的分泌，從而發(fā)揮對(duì)抑郁癥的治療作用。

參考文獻(xiàn)：

[1] Katz R J,Roth K A.Acute and chronic stress effects on open-field activity in the rat:Implications for a model of depression[J].Neurosci Biobehav Rev,1981,5(2):247.

[2] Rubin RT, Phillips JJ , McCracken JT, et al. Adrenal gland volume in major depression relationship to basal and stimulated pituitary-adrenal cortical axis function[J].Biological Psychiatry，1996,40(2): 891.

[3] 唐萍，唐勝修，陳瓊英.抑郁癥患者治療前后皮質(zhì)醇和促皮質(zhì)醇激素的變化[J].廣西醫(yī)學(xué)，2004,26(7)：1012.

[4] 徐虹，孫忠人，李麗萍，等.針灸治療抑郁癥及其對(duì)患者下丘腦-垂體-腎上腺軸的影響[J].中國針灸，2004,24(2)：78-80.

[5] Hsien-Yu Peng,Ming-Chun Hsieh,Cheng-Yuan Lai, et al.Glucocorticoid mediates water avoidance stress-sensitized colon-bladder cross-talk via RSK2/PSD-95/NR2B in rats[J].Am J Physiol Endocrinol Metab, 2012,303: E1094 - E1106.