復(fù)方健胃顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

高會(huì)芹 馬力軍

（神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 石家莊 051430）

復(fù)方健胃顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

高會(huì)芹 馬力軍

（神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 石家莊 051430）

目的 建立復(fù)方健胃顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜法對(duì)制劑中的厚樸、黃柏、陳皮進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法測定制劑中的鹽酸小檗堿。結(jié)果 薄層圖譜清晰，陰性對(duì)照無干擾，鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.4284～2.1420 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 8）。結(jié)論 本方法簡便、重現(xiàn)性好，可有效控制制劑的質(zhì)量。

復(fù)方健胃顆粒；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，鹽酸小檗堿

復(fù)方健胃顆粒是由黃柏、厚樸、陳皮、蒼術(shù)等經(jīng)現(xiàn)代制劑技術(shù)制備的中藥新制劑，其處方為臨床驗(yàn)方，具有健胃消食、清熱利濕的功效，主要用于治療消化不良、腹瀉，為有效控制該制劑的質(zhì)量，滿足臨床應(yīng)用的要求，筆者對(duì)其質(zhì)量控制方法進(jìn)行了研究，黃柏為方中君藥，主要含鹽酸小檗堿等成分，其含量測定文獻(xiàn)[1-2]報(bào)道較多，因此測定制劑中鹽酸小檗堿的含量。

1 儀器與試藥

LC-2010A型高效液相色譜儀（日本島津CLASS-VP工作站）；AB135-S電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；UV1100 型紫外分光光度計(jì)（上海天美科學(xué)儀器有限公司）；KQ-250型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)：110713-200911）、厚樸酚對(duì)照品（批號(hào)110729-200412）、和厚樸酚對(duì)照品（批號(hào)：110730-200609）、橙皮苷對(duì)照品（批號(hào)：110721-2010142）均購自中國藥品生物制品鑒定所，復(fù)方健胃顆粒（自制，批號(hào)：20120601、20120602、20120603），乙腈、磷酸均為色譜純，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

2 鑒 別

2.1 厚樸的鑒別

取本品5 g（批號(hào)：20120601），研細(xì)，加乙醚30 mL，超聲處理15 min，濾過，濾渣備用，濾液用2%氫氧化鈉溶液振搖提取2次，每次20 mL，合并氫氧化鈉溶液，加鹽酸調(diào)pH 1～2，酸水液加三氯甲烷振搖提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，水浴蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。另取厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1 mL各含1.0 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯-甲酸（17∶3∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以香草醛硫酸試液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.2 陳皮的鑒別

取【厚樸的鑒別】項(xiàng)下的濾渣，揮干殘余乙醚，加2%氫氧化鈉溶液30 mL，超聲處理30 min，離心，上清液加鹽酸調(diào)pH 1～2，酸水液加乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，置水浴上濃縮至約1 mL，作為供試品溶液。另取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含1.0 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各1 μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇（5∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

2.3 黃柏的鑒別

取本品5 g（批號(hào)：20120601），研細(xì)，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液水浴蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，加鹽酸1 mL，酸水液加三氯甲烷振搖提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，置水浴上濃縮至約1 mL，作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含1.0 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10∶6 ∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

3 含量測定

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Kromasil ODS- C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（24∶76）；柱溫：30 ℃，檢測波長：265 nm。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

3.2 溶液的制備及干擾性試驗(yàn)

對(duì)照品溶液的制備：取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含90.5 μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取本品，研細(xì)，取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，以甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性供試品溶液的制備：按處方比例，不加黃柏藥材，制得陰性樣品，再按上述供試品處理方式制備陰性樣品溶液，測定，結(jié)果在相應(yīng)峰位處無吸收，說明無陰性干擾。見圖1。

3.3 線性關(guān)系考察

精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含214.2 μg的溶液，分別精密量取1、2、3、4、5 mL，分別置5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，進(jìn)樣10 μL，測定，以對(duì)照品的量（μg）為橫坐標(biāo)（x），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y=321 0477x-15427（r=0.9998），鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.4284～2.1420 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

圖1 復(fù)方健胃顆粒HPLC

3.4 精密度試驗(yàn)

吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液（90.5 μg/mL）10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)測定6次，結(jié)果鹽酸小檗堿RSD=0.75%，表明儀器精密度良好。

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取本品（批號(hào)20120601），研細(xì)，取約2 g，精密稱定，按供試品液的制備方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10 h測定樣品的峰面積積分值，結(jié)果RSD=0.70%，表明本品供試品溶液在10 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品（批號(hào)20120601），研細(xì)，取約2 g，精密稱定，各取6份，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，進(jìn)液相色譜儀，測定，結(jié)果鹽酸小檗堿含量平均值為2.4547 mg/g，RSD=1.00%，表明本含量測定方法重復(fù)性較好。

3.7 加樣回收試驗(yàn)

取本品（批號(hào)20120601）6份（鹽酸小檗堿含量為2.4547 mg/g），研細(xì)，每份各取約1 g，精密稱定，分別精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品甲醇液（鹽酸小檗堿含量為0.05126 mg/mL）各50 mL，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，平均回收率為98.48%，RSD=0.81%，說明本測定方法可行。見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果表

3.8 含量測定

取本品3批樣品按供試品溶液制備法制得供試品溶液，進(jìn)液相色譜儀，測定，每批樣品測定3份，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n=3）

4 討 論

4.1 在厚樸的薄層鑒別試驗(yàn)時(shí)，曾嘗試用乙醚超聲樣品制備供試品溶液，結(jié)果色帶較深，陽性結(jié)果不明顯，嘗試以甲苯-甲醇（17∶1）、甲苯-乙酸乙酯（9∶1.5）為展開劑，結(jié)果供試品色譜中斑點(diǎn)分離度差，陽性結(jié)果不明顯。

4.2 在黃柏的薄層鑒別試驗(yàn)時(shí)，因小檗堿為季銨堿，其鹽酸鹽難溶于水，而其他大部分生物堿在酸性環(huán)境下可以成鹽溶于水，利用小檗堿和其他生物堿在酸性溶液中的溶解度不同可以將其分離。

4.3 在陳皮的薄層鑒別試驗(yàn)時(shí)，曾考察藥典藥材項(xiàng)下系統(tǒng)[3]，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）為展開劑，展至約3 cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上層溶液為展開劑，展至約8 cm，結(jié)果斑點(diǎn)不圓整且操作繁瑣。

4.4 在制劑含量測定時(shí)，曾考察以甲醇-水不同比例（78∶22）、（75∶25）、（70∶30）為流動(dòng)相，結(jié)果鹽酸小檗堿的分離度及峰型較差；曾考察以乙腈-水不同比例（30∶70）、（25∶75）為流動(dòng)相，結(jié)果鹽酸小檗堿峰型較差；最后以乙腈-0.1%磷酸（24∶76）為流動(dòng)相，結(jié)果保留時(shí)間適宜，分離度及峰型好。

[1] 孫毅坤,翟穎,陳旭,等.高效液相色譜法測定婦炎平膠囊中鹽酸小檗堿含量[J].中華中醫(yī)藥雜志,2008,23(11):1028-1029.

[2] 蔡俊安.高效液相色譜法測定二妙丸中鹽酸小檗堿的含量[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2011,18(1):55-56.

[3] 國家藥典委員會(huì).中國藥典.一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:214.

Study on Quality Standard of Fufang Jianwei Particles

GAO Hui-qin1, MA Li-jun1
(Shineway Pharmaceutical Group Limited, Shijiazhuang 051430, China)

Objective To establish the quality standards of the Fufang Jianwei particles. Method using thin layer chromatography to identify magnolia, amur corktree bark, dried tangerine peel of the preparation, using high-performance liquid chromatography method for simultaneous determination of berberine preparations. Result The thin layer map is clear, negative control without interference, and the injection volume of berberine in the range of 0.4282～ 2.1400 μg has a good linear relationship(r=0.999 8). Conclusion The method is simple, reproducible, and can effectively control the quality of the preparation.

Fufang Jianwei particles; Quality standard; Berberine

R283

：B

：1671-8194（2014）06-0048-03