喉鱗狀細(xì)胞癌組織中CD44+和Ki67+的表達(dá)及與臨床病理的關(guān)系

付莉　任喜梅　賈平

【摘要】目的：觀察CD44+和Ki67+癌干細(xì)胞的在喉癌中的表達(dá)特征及其與臨床病理的關(guān)系。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色， 檢測(cè)了18例正常喉黏膜，69例鱗狀細(xì)胞癌患者中CD44和Ki67+的表達(dá)，定位CD44+和Ki67-細(xì)胞，并觀察、計(jì)數(shù)。結(jié)果：CD44+細(xì)胞在正常粘膜組幾乎不表達(dá)，而在喉鱗狀細(xì)胞癌組表達(dá)豐富，兩者差別經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），Ki67+細(xì)胞在正常粘膜組只在基底細(xì)胞層散在表達(dá)，在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)豐富，兩者差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；喉鱗狀細(xì)胞癌患者中，不同性別、年齡、臨床分型之間的CD44+和Ki67+細(xì)胞表達(dá)沒(méi)有差異（P>0.05），而在在分化程度、T分期之間的表達(dá)有差異（P<0.05）。結(jié)論：CD44+和Ki67+作為腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志，可以考慮作為喉癌診斷、判斷分化程度、T分期的參考指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】CD44﹢細(xì)胞；Ki67+細(xì)胞； 喉鱗狀細(xì)胞癌；免疫組化

【中圖分類(lèi)號(hào)】R738.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949（2014）04-0210-01

喉癌占全身腫瘤1%-5%，在耳鼻喉惡性腫瘤中占7.9%-35.0%，占耳鼻咽喉各部腫瘤的第三位[1]，僅次于鼻咽癌、鼻腔癌。目前病理機(jī)制尚未闡明，從分子水平上尋找與腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)的標(biāo)志物，有助于喉癌的早期診斷，并可幫助評(píng)估臨床預(yù)后[2]，許多研究表明，Ki67是目前應(yīng)用最廣泛的增殖細(xì)胞標(biāo)志之一[3]，而CD44是癌干細(xì)胞的主要標(biāo)志[4]，本文利用免疫組織化學(xué)法，標(biāo)記CD44+和ki-67-的喉癌干細(xì)胞，研究其分布特點(diǎn)及臨床病理學(xué)關(guān)系。

1材料和方法

在蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院病理科2008年～2012年手術(shù)的喉癌標(biāo)本中篩選出鱗狀細(xì)胞癌患者69例，其中男62例，女7例，平均年齡58.65歲。另取18例正常喉黏膜組織標(biāo)本作對(duì)照，其中男13例，女5例，平均年齡57.72歲。所有外檢標(biāo)本24 h內(nèi)取相應(yīng)組織，經(jīng)4%中性甲醛固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋。

2方法

參照張登才等[5]介紹的制作組織芯片的方法，手工制作喉鱗癌組織芯片3個(gè)，3μm厚切片，用于免疫組織化學(xué)的蠟片裱于經(jīng)2% 3-氨丙基-乙氧基甲硅烷（APES）丙酮液處理過(guò)的載玻片上備用。3塊組織芯片連續(xù)切片各2張（厚4μm）用EliVisionTM super二步法分別標(biāo)記CD44和Ki-67，操作步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，DAB顯色，陽(yáng)性顯色為棕黃色，蘇木精復(fù)染核，中性樹(shù)脂膠封固。光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)果。

3結(jié)果

3 1 CD44+細(xì)胞在正常粘膜組幾乎不表達(dá)，在喉鱗癌組織表達(dá)豐富，兩者差別經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-15.119，P=0.000）；Ki-67﹢細(xì)胞在正常粘膜只在基底細(xì)胞層散在表達(dá)，喉鱗癌組織表達(dá)豐富，兩者差別經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= -44.98，P= 0.000）。

3.2 CD44﹢和Ki-67﹢細(xì)胞在性別、年齡、臨床分型之間的表達(dá)沒(méi)有差異（Mann-Whitney U 檢驗(yàn)，P>0.05），而在分化程度、T分期之間的表達(dá)有差異（P<0.05），分化程度越低，T分期越高者表達(dá)越高。CD44表達(dá)與是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，而Ki-67的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)高于無(wú)轉(zhuǎn)移者。

4討論

喉癌作為腫瘤的一種，其發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)多因素、多步驟過(guò)程。雖然早期癌癥患者療效較好，但是仍有部分患者難于治愈。腫瘤治療的關(guān)鍵在于早期發(fā)現(xiàn)、早期治療。CD44是分布極為廣泛的一組細(xì)胞表面跨膜糖蛋白，在細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中，其結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生顯著變化，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。作為細(xì)胞增殖活性的生物學(xué)標(biāo)志物，Ki-67蛋白現(xiàn)己被廣泛開(kāi)展應(yīng)用，但在喉癌預(yù)后及治療方面的研究應(yīng)用，近來(lái)才受到關(guān)注。

本研究發(fā)現(xiàn)，癌旁正常組織CD44表達(dá)很低，且多局限于基底層細(xì)胞和近基底層的棘細(xì)胞，而喉癌則累及上皮全層細(xì)胞，并向深層浸潤(rùn)。CD44在喉癌組織中的表達(dá)水平比其在癌旁正常組織中的表達(dá)高，并且具有顯著性差異（P<0.05），表明CD44可能與喉癌的發(fā)生有關(guān)聯(lián)。而Ki-67是一種細(xì)胞增殖核抗原， 存在于G0期以外的各期細(xì)胞，與細(xì)胞有絲分裂密切相關(guān)，是反映細(xì)胞增殖狀態(tài)的理想標(biāo)記物， 對(duì)判斷腫瘤惡性程度有一定的價(jià)值[6，7]。

研究結(jié)果表明，CD44、Ki-67可作為喉癌的臨床評(píng)判指標(biāo)，且應(yīng)用免疫組化技術(shù)在喉癌組織中檢測(cè)簡(jiǎn)易可行， 二者聯(lián)合可更好的為喉癌患者的臨床病理診斷提供輔助參照，也可為喉癌患者制定化療方案提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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