探討B(tài)cl-2和p16蛋白在胃癌組織中的表達與意義

胡果宇

【摘要】目的：觀察癌基因Bc1-2和抑癌基因p16相關產物蛋白在胃癌組織中的表達，探討B(tài)c1-2和p16基因與胃癌發(fā)生的關系。方法：用免疫組化法檢測Bc1-2和p16蛋白在不同類型胃癌組織中的表達，并以胃黏膜異型增生和腸上皮化生作對照。結果：Bc1-2蛋白在胃癌和異型增生組織中的陽性率無顯著性差異（P＞0.05），但是顯著高于腸上皮化生（p＜0.01）；p16蛋白在胃癌、異型增生和腸上皮化生組織中的表達有非常顯著的差異（p＜0.01）。結論：在胃癌組織中Bc1-2表達顯著增高，而p16表達顯著減低，提示兩種蛋白表達變化可能與胃癌相關，Bc1-2可能是胃癌發(fā)生的早期指標，p16基因的缺失可能與細胞異型性有密切關系。

【關鍵詞】胃癌；免疫組化；Bc1-2；p16

【中圖分類號】R735.2 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949(2014)06-0112-01

引言

胃癌是消化道常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)生是一個復雜的過程。從正常胃黏膜到癌前病變再到胃癌，是一個漸進的過程，致病因素作用于不同的基因并引起相關基因結構和表達水平的改變，最終導致胃癌的發(fā)生。癌基因和抑癌基因在惡性腫瘤中表達的研究已有較多報道，但同時觀察不同癌基因和抑癌基因在胃癌發(fā)生中不同階段的活性變化還鮮有報道。本研究用免疫組化方法檢測了癌基因Bc1-2和抑癌基因p16表達產物在不同類型胃癌中的表達情況，并以胃黏膜異型增生和腸上皮化生為對照，旨在探討胃癌發(fā)生過程中不同基因的改變及意義，并進一步探明胃黏膜癌前病變與胃癌發(fā)生的相互關系。

1 材料與方法

1.1 標本來源

收集我院病理科2012年2月至2014年3月間存檔的病理蠟塊123例，其中胃癌79例、異型增生23例、腸上皮化生21例。在胃癌組中，高分化腺癌（包括管狀腺癌和乳頭狀腺癌）25例，低分化腺癌18例，黏液腺癌19例，黏液細胞癌17例。所有組織均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋切片，HE染色觀察分類后進行免疫組化檢測。

1.2 免疫組化檢測

免疫組化染色采用Ｅnvision法。鼠抗人一抗Bc1-2和p16單克隆抗體以及HRP兔抗鼠二抗均購自北京中杉生物技術公司，用PBS取代一抗作陰性對照。陽性結果判斷標準：Bc1-2以細胞質及p16以細胞核內出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達；高倍鏡下取10個高倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞，陽性細胞數(shù)≤25為％（－），＞25%-50%為（＋），＞ 50%－75%為（＋＋），＞75%以上為（＋＋＋）。

1.3 統(tǒng)計學方法

用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行分析，X2檢驗分析各組間陽性率的差異，Kruskal-wallis H檢驗分析各組不同陽性強度的差異，Nemenyi對其進行兩兩比較，p＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Bc1-2蛋白在各組織中的表達在胃癌、異型增生和腸上皮化生組織，Bc1-2的陽性率分別為73.4%、78.3%、38.1%。統(tǒng)計學分析，Bc1-2在胃癌和異型增生組織中的陽性率無顯著性差異，但顯著高于腸上皮化生（P＜0.01），在不同類型胃癌中陽性率無顯著性差異（P＞0.05），見表１。

表1Bcl-2在胃癌、異性增生和腸上皮化生中的表達

Tissues n Bcl-2 Positive (+) (++) (+++) rate(%)Well-differentiated adenocarcinoma 25 5 9 5 76.0Poorly differentiated saenocarcinoma 18 3 6 4 72.2Mucinous adenocarcinoma 19 410 1 78.9Carcinoma muco-cellulare 17 4 5 2 64.7Dysplasia 23 8 6 4 78.3

Intetinal metaplasia 21 6 2 0 38.12.2p16蛋白在各組織中的表達p16蛋白在胃癌、異型增生和腸上皮化生組織中的陽性率分別為45.6%、65.2%、76.2%。經(jīng)統(tǒng)計學分析，p16在胃癌、異型增生和腸上皮化生組織中的表達有非常顯著的差異（P＜0.01）；而在不同類型胃癌中其陽性率無差異（P≥0.05），見表２。

表2p16在胃癌、異性增生和腸上皮化生中的表達

Tissues n Bcl-2 Positive (+) (++) (+++) rate(%)Well-differentiated adenocarcinoma 25 6 5 2 52.0Poorly differentiated saenocarcinoma 18 5 3 0 44.4Mucinous adenocarcinoma 19 7 2 0 47.4Carcinoma muco-cellulare 17 4 2 0 35.3Dysplasia 23 4 6 5 65.2Intetinal metaplasia 21 3 7 6 76.22.3 Bcl-2和p16蛋白在胃癌組織中表達的相關性統(tǒng)計學分析表明，Bcl-2和p16蛋白在各型胃癌組織中的表達無顯著性差異P＞0.05），見表3。

表3 Bc1-2和p16蛋白在胃癌組織中表達的相關性

Tissues n Bcl-2positive P16positiveWell-differentiated adenocarcinoma 25 19 13Poorly differentiated saenocarcinoma 18 13 8Mucinous adenocarcinoma 19 15 9Carcinoma muco-cellulare 17 11 63 討論

本研究用免疫組織化學方法檢測癌基因Bc1-2和抑癌基因p16表達產物在胃癌、胃黏膜異型增生和腸上皮化生中的變化，進一步探討胃黏膜癌前病變與胃癌的內在聯(lián)系，為胃癌的預防和早期診斷及癌前病變發(fā)展趨勢的預測提供有價值的實驗資料。Bc1-2基因是第一個被發(fā)現(xiàn)的細胞凋亡抑制基因，它編碼的蛋白質產物定位于線粒體內膜、內質網(wǎng)膜及核膜上。其主要的生物學功能是長細胞的壽命，增加細胞對各種凋亡刺激因素的抵抗力。Bc1-2基因的生物學功能是增加細胞對各種凋亡刺激因素的抵抗力，它可使DNA受損的細胞繼續(xù)生存，突變產物聚集，促進腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。有研究發(fā)現(xiàn)，過度表達Bc1-2的轉基因小鼠容易發(fā)生腫瘤［8］。本文研究結果表明，胃癌組織中Bc1-2蛋白的陽性表達率為73.4%，陽性區(qū)域與細胞凋亡區(qū)域明顯不同。在不同類型的胃癌中，以高中分化腺癌中Bc1-2陽性表達率最高。本研究結果還顯示，Bc1-2在異型增生中陽性率最高，表明異型增生的組織其細胞增生與凋亡處于明顯的不平衡狀態(tài)，Bc1-2對細胞凋亡有明顯的負性調節(jié)作用。本結果還發(fā)現(xiàn)，胃癌中Bc1-2蛋白的陽性率低于異型增生，提示Bc1-2在異型增生組織中的過度表達可能是胃癌形成的先兆事件，是胃癌發(fā)生過程中的早期行為。隨腫瘤進一步發(fā)展，到后期階段或向惡性度高的腫瘤轉化過程中部分細胞可能喪失Bc1-2的表達。p16基因直接參與細胞生長增殖的負調節(jié)，p16基因的失活則可導致正常p16蛋白的表達異常。研究表明，p16蛋白可競爭cyclinD與CDK4的結合，通過抑制CDK4的活性，阻止細胞G1向S期轉化，使細胞周期停止在G1 期，避免細胞的過度增殖。當p16基因突變或缺失時，p16蛋白就不能正常表達，細胞增殖失去控制，最終形成腫瘤。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多數(shù)腫瘤存在p16蛋白表達的下降或缺失，但在胃癌特別是癌前病變中表達的研究尚不多見，p16表達異常與胃癌發(fā)生的關系還不明確。本研究結果顯示p16蛋白在胃癌、異型增生和腸上皮化生組織中的陽性表達率呈遞增趨勢，且在胃癌與癌前病變中有顯著性差異，提示p16基因的缺失與細胞異型性有密切關系，檢測其表達產物p16蛋白的表達對于判斷胃黏膜癌前病變的發(fā)展趨勢和預測胃癌的早期發(fā)生有重要意義?？傊狙芯拷Y果提示，Bc1-2和p16兩種蛋白表達的變化可能與胃癌的發(fā)生、發(fā)展相關，Bc1-2表達的變化可能是胃癌發(fā)生的早期指標，p16基因的缺失可能與細胞異型性有密切關系。至于Bc1-2與p16兩種基因在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中相互作用的分子機制還有待于進一步研究探討。

參考文獻

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