蟲草菌粉對(duì)雛雞細(xì)胞免疫功能的影響

胡雅婷　潘美慧　李進(jìn)進(jìn)　陳如圣　陶明江　張祥華　鄔向東

摘 要：蟲草菌粉是由新鮮冬蟲夏草中分離蝙蝠蛾擬青霉經(jīng)液體深層發(fā)酵所得，具有很好的免疫增強(qiáng)作用。為探討蟲草菌粉對(duì)雞免疫力的影響，在蟲草菌粉添加于雞飼料中連續(xù)飼喂30 d，通過檢測(cè)活性E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)了解蟲草菌粉對(duì)雛雞細(xì)胞免疫的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過飼喂不同劑量的蟲草菌粉后，E玫瑰花環(huán)率無顯著差異，但淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率有顯著的提高，說明蟲草菌粉能夠顯著提高細(xì)胞的免疫水平，增強(qiáng)雛雞免疫力。

關(guān)鍵詞：雛雞；蟲草菌粉；細(xì)胞免疫

中圖分類號(hào)：S816 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2014）06-0052-02

蟲草菌粉為蝙蝠蛾擬青霉Cs-4菌粉，或者又稱為發(fā)酵蟲草菌粉，俗稱蟲草粉，蟲草菌粉，蟲草提取物，發(fā)酵蟲草粉等。蝙蝠蛾擬青霉菌粉是從新鮮冬蟲夏草菌中分離所得的蟲草菌——蝙蝠蛾擬青霉經(jīng)液體深層發(fā)酵培養(yǎng)、過濾、干燥、粉碎制成的產(chǎn)品。蝙蝠蛾擬青霉菌種是江西國(guó)藥有限責(zé)任公司與中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所衛(wèi)生部天然藥物生物合成重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過10年時(shí)間從青海產(chǎn)天然冬蟲夏草中分離純化而得，該菌種生產(chǎn)的發(fā)酵蟲草菌粉自1989年獲得衛(wèi)生部批準(zhǔn)為一類原料藥新藥（文號(hào)：[89]衛(wèi)藥準(zhǔn)字Z-17號(hào)），在十多年的臨床應(yīng)用當(dāng)中，其良好的臨床效果以及可靠的安全性，深獲國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥專家學(xué)者的認(rèn)可。并于2001年3月23日被國(guó)家衛(wèi)生部發(fā)文（衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2001]84號(hào)文），確認(rèn)為可用于保健食品的真菌名單。

蟲草菌粉具有養(yǎng)肺陰，補(bǔ)腎陽的功效，為平補(bǔ)陰陽之品，用于肺癆咳血，陽痿遺精等癥。從現(xiàn)代免疫角度來說，其具有明顯的提高機(jī)體免疫力的功能[1-4]。為了解蟲草菌粉對(duì)家禽免疫功能的影響，筆者將蟲草菌粉應(yīng)用于雛雞飼養(yǎng)，通過檢測(cè)活性E玫瑰花環(huán)形成率、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率來反映雛雞細(xì)胞免疫功能變化，為蟲草菌粉應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖的可能提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 全價(jià)雛雞雞飼料

購自南昌正大集團(tuán)。

1.1.2 雛雞

購自江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，10日齡余干烏雞。

1.1.3 蟲草菌粉

由江西國(guó)藥集團(tuán)提供。

1.1.4 主要試劑

雞外周血淋巴細(xì)胞分離液、改良型RPMI-1640培養(yǎng)液為賽默飛世爾生物化學(xué)制品有限公司產(chǎn)品；Hanks液、植物血凝素（PHA）、胎牛血清等為索萊寶公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組

將240羽10日齡健康雛雞隨機(jī)分為四組，每組60羽，從第11日齡開始試驗(yàn)，四個(gè)組均使用南昌正大全價(jià)雛雞飼料為基礎(chǔ)日糧（具體見表1）。

1.2.2 飼喂方法及處理

飼喂至第10、20和30天每組隨機(jī)抽取20羽，分別采血用肝素抗凝，一部分全血供活性E花環(huán)試驗(yàn)、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)用，另一部提取血清，供細(xì)胞因子檢測(cè)用。

1.2.3 試驗(yàn)方法

1.2.3.1 E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)，參照文獻(xiàn)方法[5]進(jìn)行，略有修改。

淋巴細(xì)胞的分離：新鮮抗凝血用Hanks液倍比稀釋，用淋巴細(xì)胞分離液以2 500 r/min離心 10 min/次的密度梯度離心法分離淋巴細(xì)胞，計(jì)數(shù)后，用Hanks液配成107個(gè)/mL淋巴細(xì)胞懸液備用。

1 %SRBC懸液的制備：無菌采取綿羊抗凝血，2 500 r/min離心10 min/次，棄上清和白細(xì)胞，加Hanks液稀釋后再離心，重復(fù)上述操作直到除凈白細(xì)胞。用Hanks液配成1 %SRBC懸液備用，細(xì)胞濃度約為8×107個(gè)/mL。

活性E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)：取上述淋巴細(xì)胞懸液 100 μL，1 %SRBC 100 μL，胎牛血清50 μL混勻，37 ℃水浴5 min，以500 r/min離心5 min，棄50 μL上清，再加入0.8 %戍二醛1滴，輕輕搖勻，固定數(shù)分鐘。取一滴于事先鋪有Hanks液的玻片上，自然干燥，吉姆薩瑞氏染色5 min，油鏡觀察200個(gè)淋巴細(xì)胞中陽性花環(huán)數(shù)，計(jì)算花環(huán)形成率。

1.2.3.2 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 采用形態(tài)學(xué)檢查法。

取2.2 mL RPMI-1640培養(yǎng)液于細(xì)胞培養(yǎng)瓶，同時(shí)加入100 μg/mL PHA 0.2 mL，胎牛血清0.6 mL，青霉素、鏈稱素各100 u或100 μg/mL；再加新鮮抗凝血0.2～0.5 mL。將上述細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于CO2培養(yǎng)箱（37 ℃、5 %CO2、飽和濕度）每天旋轉(zhuǎn)搖勻2次。培養(yǎng)3 d后，各取一滴進(jìn)行美蘭染色，油鏡觀察200個(gè)淋巴細(xì)胞中轉(zhuǎn)化的細(xì)胞數(shù)，計(jì)算轉(zhuǎn)化率。

1.2.4 結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，單因素方差分析比較兩組間差異。所有數(shù)值均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果

2.1 活性E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)結(jié)果如表2、圖1

2.2 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)結(jié)果，見表3、圖2

3 小結(jié)與討論

3.1 本次試驗(yàn)結(jié)果表明

雛雞飼喂一定劑量蟲草菌粉后，各組間活性E花環(huán)率差異不顯著（P>0.05），僅在飼喂20 d時(shí)，中劑量組、高劑量組與空白對(duì)照組玫瑰花環(huán)率差異顯著（P<0.05）。這與小鼠中相關(guān)報(bào)道不太相同[6]，說明蟲草菌粉對(duì)不同動(dòng)物的影響不盡相同。

3.2 本試驗(yàn)證實(shí)

雛雞連續(xù)飼喂蟲草菌粉10 d時(shí)，低劑量組與空白對(duì)照組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率差異不顯著（P>0.05），中劑量組、高劑量組與空白對(duì)照組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率差異極顯著（P<0.01）。當(dāng)飼喂20 d時(shí)，低劑量組、中劑量組、高劑量組與空白對(duì)照組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率差異皆極顯著（P<0.01）。30 d時(shí)，低劑量組與空白對(duì)照組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率差異顯著（P<0.05），中劑量組、高劑量組與空白對(duì)照組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率差異極顯著（P<0.01）。說明蟲草菌粉能夠顯著提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，增強(qiáng)細(xì)胞的免疫水平，且中高劑量蟲草菌粉比低劑量蟲草菌粉作用更強(qiáng)，這與小鼠中的相關(guān)報(bào)道相同[7]。

3.2 蟲草菌粉應(yīng)用前景廣闊

蟲草菌粉不僅可以人類保健中應(yīng)用，在畜禽養(yǎng)殖中亦可發(fā)揮重要作用[8-9]。而且蟲草菌粉是蝙蝠蛾擬青霉經(jīng)液體深層發(fā)酵培養(yǎng)、過濾、干燥、粉碎制成的產(chǎn)品，可常溫保存2年不失效，沒有抗生素的耐藥問題，也沒有飼料添加劑的藥物殘留等問題。以蟲草菌粉的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，如作為免疫增效劑推廣應(yīng)用于畜禽生產(chǎn)，則前景 廣闊。□□

參考文獻(xiàn)：（9篇，略）