桑樹(shù)花藥愈傷組織誘導(dǎo)方法初步研究

摘要[目的]對(duì)桑樹(shù)花藥愈傷組織誘導(dǎo)方法進(jìn)行研究。[方法]以MS為基本培養(yǎng)基，研究不同品種、不同預(yù)處理時(shí)間和不同的激素種類及濃度對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響。[結(jié)果]不同品種適于花藥培養(yǎng)的花序大小有所差異，同品種內(nèi)長(zhǎng)度相對(duì)穩(wěn)定，可以作為取材標(biāo)準(zhǔn)；低溫預(yù)處理對(duì)試驗(yàn)的結(jié)果影響不顯著（P<0.05）；不同品種間誘導(dǎo)率差異較大，在供試的3個(gè)品種中，桂桑優(yōu)62的誘導(dǎo)率最高，為46.4%，最低的為粵桑11，僅為28.8%；激素對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率影響較大，特別是2，4D，最佳激素組合為1.0 mg/L 2，4D+0.5 mg/L 6BA。[結(jié)論]該方法研究了桑樹(shù)花藥愈傷組織的誘導(dǎo)方法，為桑樹(shù)的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞桑樹(shù)（Morus alba L.）；花藥培養(yǎng)；愈傷組織

中圖分類號(hào)S888文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）09-02561-01

基金項(xiàng)目廣西教育廳面上項(xiàng)目（200911MS216）；廣西自然科學(xué)基金青年基金（2010GXNSFB013045）。

作者簡(jiǎn)介高麗霞（1980-），女，山東泰安人，副教授，從事桑樹(shù)種質(zhì)資源創(chuàng)新方面的研究。

桑樹(shù)（Morus alba L.）是重要的多年生木本經(jīng)濟(jì)作物，是發(fā)展蠶業(yè)生產(chǎn)的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。桑樹(shù)和大多數(shù)木本植物一樣，為多年生植物，又是雌雄異株植物，從而積累了大量的雜合位點(diǎn)。因此，雖然桑樹(shù)基因資源豐富，其育種工作也全面展開(kāi)，由于沒(méi)有純系，雜種優(yōu)勢(shì)也不可能像玉米、小麥那樣得到充分利用。如果能夠獲得桑樹(shù)的純系，便會(huì)有更大的利用雜種優(yōu)勢(shì)的空間。與一般大田作物相比，桑樹(shù)可以進(jìn)行無(wú)性繁殖，這就使得在桑樹(shù)育種中，一旦出現(xiàn)優(yōu)良性狀便可以通過(guò)無(wú)性繁殖固定下來(lái)，比一些禾本科作物以及蔬菜的育種更具優(yōu)勢(shì)。桑樹(shù)純系獲得的最有效方法是通過(guò)花藥培養(yǎng)得到其單倍體，然后經(jīng)過(guò)單倍體加倍而獲得純合的二倍體。有關(guān)桑樹(shù)花藥培養(yǎng)的工作在我國(guó)開(kāi)展較少，僅見(jiàn)于林壽康[1]和胡樂(lè)山[2]的研究，前者獲得了單倍體植株，后者對(duì)花藥培養(yǎng)的條件進(jìn)行了探索。據(jù)此，筆者對(duì)桑樹(shù)的花藥的愈傷組織誘導(dǎo)進(jìn)行研究，旨在為獲得優(yōu)良的種質(zhì)材料打下基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料試驗(yàn)材料取自河池學(xué)院桑蠶基地，品種為粵桑11，農(nóng)桑14和桂桑優(yōu)62。

1.2方法

1.2.1花藥鏡檢。分別對(duì)不同品種的花藥鏡檢，醋酸品紅染色，取處于單核靠邊期的花藥，分別記錄不同品種的花序形態(tài)、花序長(zhǎng)度和花藥在花序上的大體位置，作為花藥培養(yǎng)取材的標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2花藥處理。按鏡檢確定的長(zhǎng)度，取處于發(fā)育時(shí)期的桂桑優(yōu)62的雄花序，在4 ℃條件下預(yù)處理0、1、2和4 d，以確定最佳的預(yù)處理時(shí)間。接種前，用70%的酒精浸泡30 s，然后用0.1%升汞滅菌1 min，之后，用無(wú)菌水清洗3遍，剝離花藥接種在固體培養(yǎng)基上，每種預(yù)處理?xiàng)l件接種量為每瓶10枚花藥，每種配方5瓶。

1.2.3最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選。以農(nóng)桑14為材料，MS為基本培養(yǎng)基，蔗糖6%，瓊脂0.7%，加入水解酪蛋白300 mg/L，外源激素的添加方法如表2所示，pH 5.8。培養(yǎng)溫度初期35 ℃暗培養(yǎng)，后轉(zhuǎn)入室溫（26±2）℃，光照強(qiáng)度為2 500 lx，光照時(shí)間為12 h/d[3]。

1.2.4品種差異對(duì)誘導(dǎo)率的影響。為了確定品種差異對(duì)花藥培養(yǎng)的影響，試驗(yàn)以上述試驗(yàn)確定的最佳預(yù)處理時(shí)間和最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基，分別對(duì)粵桑11，農(nóng)桑14和桂桑優(yōu)62進(jìn)行比較，每個(gè)品種取5株，每株培養(yǎng)花藥50枚，統(tǒng)計(jì)愈傷誘導(dǎo)情況，以了解品種差異。

2結(jié)果與分析

2.1處于單核靠邊期花序的長(zhǎng)度處于單核靠邊期的花藥具有更高的誘導(dǎo)率，已在多種植物中得到證實(shí)[1，4-5]。試驗(yàn)為了取材的方便，對(duì)處于單核靠邊期的花序的形態(tài)進(jìn)行了測(cè)量和描述。結(jié)果表明，不同品種處于單核靠邊期的花序長(zhǎng)度存在明顯差異，如表1所示，農(nóng)桑14花序長(zhǎng)度最大，最小的為桂桑優(yōu)62。同一品種處于該時(shí)期的花序長(zhǎng)度差異不大，可以作為選材的標(biāo)準(zhǔn)。