金桔膠囊抗炎鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳祛痰和免疫增強(qiáng)的藥理學(xué)作用

項娟娟（解放軍第323醫(yī)院，西安 710054）

咽喉腫痛、咳嗽并伴有黏痰是呼吸道感染的主要癥狀，消炎、鎮(zhèn)痛、止咳化痰是臨床治療的主要手段。金桔膠囊是解放軍第323醫(yī)院藥劑科研制的中藥復(fù)方制劑，臨床多用于呼吸道感染所致咽喉腫痛、咽中不適、咳嗽并伴有黏痰等癥的治療。方中金銀花、梔子為常用的抗炎解毒藥，在此基礎(chǔ)上加入鎮(zhèn)痛作用的鬼針草、白芷，具有鎮(zhèn)咳祛痰作用的牛耳草、萬壽菊、桔梗，以及調(diào)節(jié)免疫功能的大青葉和五味子。為驗證本方的抗炎鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳祛痰、增強(qiáng)免疫作用，筆者選用ICR小鼠復(fù)制模型，并以清熱解毒口服液等為陽性對照藥研究金桔膠囊的藥理作用，為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

TU-1901型雙光束紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 藥品與試劑

金桔膠囊（解放軍第323醫(yī)院藥劑科，批號:20081005，規(guī)格:0.45 g/粒）；清熱解毒口服液[北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠，批號:6260718，1.5 g（生藥）/ml]；布洛芬片（北京太洋藥業(yè)有限公司，批號:040201）；可愈糖漿（北京雙鶴高科天然藥物有限責(zé)任公司，批號:273105）；環(huán)磷酰胺（天津金世制藥有限公司，批號:19666-19670）；二甲苯、冰醋酸、濃氨水不、苯酚紅均購自北京化工廠；炭黑墨水（北京西中化工廠）。

1.3 動物

SPF級ICR小鼠，♀♂兼用，體質(zhì)量18～21 g，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司[實驗動物使用許可證號:SCXK（京）2002-0003]。

2 方法

2.1 劑量設(shè)計依據(jù)

金桔膠囊的臨床用法用量為口服，每次2～4粒，每天3次。換算人臨床使用劑量為0.4 g（生藥）/kg，則小鼠ig高、中、低劑量分別為8.0、4.0、2.0 g（生藥）/kg（2、1、0.5倍臨床等效劑量）。

2.2 金桔膠囊對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響[1-2]

取小鼠60只，♀♂兼半，隨機(jī)均分為6組，即模型（等容0.5%CMC-Na）組、清熱解毒口服液（30.0g/kg）組、布洛芬（32.5mg/kg）組與金桔膠囊高、中、低劑量（8.0、4.0、2.0g/kg）組。ig給藥，每天1次，連續(xù)6 d。末次給藥30min后，每只小鼠右耳涂0.02ml的二甲苯，左耳不涂二甲苯作空白對照。1 h后處死小鼠，在小鼠左、右耳廓相同部位用直徑8mm的打孔器切下等面積的耳片，稱取耳片質(zhì)量。左、右耳片質(zhì)量差為腫脹度，計算腫脹抑制率。腫脹抑制率＝（模型組腫脹度－給藥組腫脹度）/模型組腫脹度×100%。

2.3 金桔膠囊對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響[3]

取小鼠72只，♀♂兼半，隨機(jī)均分為6組，即正常對照（等容0.5%CMC-Na）組、清熱解毒口服液（30.0g/kg）組、布洛芬（32.5mg/kg）組與金桔膠囊高、中、低劑量（8.0、4.0、2.0g/kg）組。末次給藥1 h后，每只小鼠iv 0.5%的伊文思藍(lán)生理鹽水溶液（10ml/kg），隨即ip 0.6%醋酸生理鹽水溶液（0.2ml/只），20min后處死小鼠，剪開腹部皮膚肌肉，用6ml生理鹽水分?jǐn)?shù)次洗滌腹腔，吸出所有洗滌液加生理鹽水定容至8ml，常規(guī)離心后取上清液于590nm波長處測定吸光度（A）。

2.4 金桔膠囊對醋酸引起小鼠扭體反應(yīng)的影響[4-5]

取小鼠60只，♀♂兼半，分組與給藥同“2.2”項下方法。末次給藥30min后，每只小鼠ip0.6%的醋酸生理鹽水溶液（10ml/kg），觀察并記錄每只小鼠發(fā)生扭體反應(yīng)的潛伏期及在15min內(nèi)因疼痛引起的扭體次數(shù)（腹部收縮內(nèi)陷、軀體扭曲、后肢伸展及蠕行等）。鎮(zhèn)痛百分率（%）＝（模型組扭體次數(shù)－給藥組扭體次數(shù)）/模型組扭體次數(shù)×100%。

2.5 金桔膠囊對氨水致小鼠咳嗽的影響[6-7]

取小鼠60只，♀♂兼半，分組與給藥同“2.2”項下方法。末次給藥1 h后，將小鼠放入容積約300ml的干燥器中，于隔離板上放一濾紙，滴入0.2ml 25%的氨水，密閉，觀察小鼠咳嗽潛伏期（從滴入氨水密閉開始，至發(fā)生咳嗽的時間為潛伏期）和3min內(nèi)咳嗽次數(shù)（以腹肌收縮，同時張大嘴為小鼠咳嗽1次）。

2.6 金桔膠囊對小鼠氣管酚紅排泌量的影響[8-9]

取小鼠50只，♀♂兼半，隨機(jī)均分為5組，即正常對照（等容0.5%CMC-Na）組、可愈糖漿（6.2ml/kg）組與金桔膠囊高、中、低劑量（8.0、4.0、2.0 g/kg）組。ig給藥，每天1次，連續(xù)6 d。末次給藥后30min，每只小鼠ip 5%酚紅生理鹽水溶液（20ml/kg），30min后處死小鼠，暴露氣管，剝?nèi)夤苤車M織，剪下自甲狀軟骨下至支氣管分支處的一段氣管，侵入含2ml 5%的NaHCO3溶液的試管中，震搖并放置一段時間使氣管段中的酚紅完全釋放，546nm波長處測定氣管洗出液A。

2.7 金桔膠囊對小鼠非特異性免疫功能的影響[8，10]

取小鼠60只，♂，隨機(jī)均分為6組，即正常對照（等容0.5%CMC-Na）組、模型（等容0.5%CMC-Na）組、清熱解毒口服液（30.0g/kg）組與金桔膠囊高、中、低劑量（8.0、4.0、2.0g/kg）組。于給藥第7天ip環(huán)磷酰胺（80mg/kg）以復(fù)制小鼠免疫功能低下模型。于末次給藥后1 h，每只小鼠iv印度墨汁（10ml/kg），分別在iv 1、5min后眼靜脈叢取血20μl，溶于2.5ml 0.1%的Na2CO3溶液中，在680nm波長處測定A，最后將小鼠處死，稱取肝脾質(zhì)量。按下列公式計算廓清指數(shù)（K）和吞噬指數(shù)（α）。K＝（logA1－logA2）（/T2－T1）；α＝×體質(zhì)量（/肝質(zhì)量+脾質(zhì)量）。

2.8 統(tǒng)計學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 金桔膠囊對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

與模型組比較，金桔膠囊高、中劑量組小鼠耳廓腫脹度降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。金桔膠囊高、中劑量組腫脹抑制率分別為44.65、39.0%。金桔膠囊對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響見表1。

表1 金桔膠囊對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（）Tab 1 Effects of Jinju capsules on ear edema in mice induced by dimethyl benzene（）

表1 金桔膠囊對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（）Tab 1 Effects of Jinju capsules on ear edema in mice induced by dimethyl benzene（）

與模型組比較:＊P＜0.05vs.model group:＊P＜0.05

組別模型組金桔膠囊高劑量組金桔膠囊中劑量組金桔膠囊低劑量組清熱解毒口服液組布洛芬組劑量，g/k g n 腫脹抑制率，%44.639.014.554.161.98.04.02.030.032.5mg/k g 101010101010腫脹度，mg 5.51±1.223.05±1.75＊3.36±1.54＊4.71±1.902.53±1.65＊2.10±0.32＊

3.2 金桔膠囊對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

與正常對照組比較，金桔膠囊高、中、低劑量組A減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05），表明高、中、低劑量金桔膠囊對小鼠伊文思藍(lán)排出量減少，小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性降低。金桔膠囊對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響見表2。

3.3 金桔膠囊對醋酸引起小鼠扭體反應(yīng)的影響

與模型組比較，金桔高、中劑量組疼痛潛伏期延長，扭體次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。金桔高、中劑量組鎮(zhèn)痛率分別為60.3%和50.5%。金桔膠囊對醋酸引起小鼠扭體反應(yīng)的影響見表3。

3.4 金桔膠囊對氨水致小鼠咳嗽的影響

與模型組比較，金桔膠囊高、中劑量組小鼠咳嗽潛伏期延長，3min內(nèi)咳嗽次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。金桔膠囊對氨水致小鼠咳嗽的影響見表4。

表2 金桔膠囊對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響（）Tab 2 Effects of Jinju capsules on abdominal capillary permeability in mice（）

表2 金桔膠囊對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響（）Tab 2 Effects of Jinju capsules on abdominal capillary permeability in mice（）

與正常對照組比較:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.normal control group:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別正常對照組金桔膠囊高劑量組金桔膠囊中劑量組金桔膠囊低劑量組清熱解毒口服液組布洛芬組劑量，g/k g n A 0.392±0.220.198±0.04＊＊0.221±0.07＊＊0.255±0.09＊0.214±0.03＊＊0.178±0.09＊＊8.04.02.030.032.5mg/k g 101010101010

表3 金桔膠囊對醋酸引起小鼠扭體反應(yīng)的影響（）Tab 3 Effects of Jinju capsules on body-twisting response in mice induced by acetic acid（）

表3 金桔膠囊對醋酸引起小鼠扭體反應(yīng)的影響（）Tab 3 Effects of Jinju capsules on body-twisting response in mice induced by acetic acid（）

與模型組比較:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model group:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別模型組金桔膠囊高劑量組金桔膠囊中劑量組金桔膠囊低劑量組清熱解毒口服液組布洛芬組劑量，g/k g n 鎮(zhèn)痛率，%8.04.02.030.032.5mg/k g 101010101010潛伏期，mi n 2.01±0.264.01±1.77＊4.18±1.73＊3.18±0.354.35±1.39＊6.89±2.57＊＊扭體次數(shù)39.0±7.9115.5±9.12＊19.3±7.42＊28.2±10.0415.7±9.07＊5.7±5.37＊＊60.350.527.759.785.4

表4 金桔膠囊對氨水致小鼠咳嗽的影響（）Tab 4 Effects of Jinju capsules on cough in mice induced by ammonia（）

表4 金桔膠囊對氨水致小鼠咳嗽的影響（）Tab 4 Effects of Jinju capsules on cough in mice induced by ammonia（）

與模型組比較:＊P＜0.05 vs.model group:＊P＜0.05

組別模型組金桔膠囊高劑量組金桔膠囊中劑量組金桔膠囊低劑量組清熱解毒口服液組布洛芬組咳嗽次數(shù)27.5±7.8112.8±8.91＊15.5±7.42＊22.3±6.5621.9±6.399.8±6.03＊劑量，g/k g n 8.04.02.030.032.5mg/k g 101010101010咳嗽潛伏期，mi n 1.21±0.332.37±0.40＊2.03±0.36＊1.44±0.401.57±0.392.97±0.44＊

3.5 金桔膠囊對小鼠氣管酚紅排泌量的影響

與正常對照組比較，金桔膠囊高、中劑量組酚紅質(zhì)量濃度增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明金桔膠囊高、中劑量可使小鼠氣管酚紅排泌量增加。金桔膠囊對小鼠氣管酚紅排泌量的影響見表5。

表5 金桔膠囊對小鼠氣管酚紅排泌量的影響（）Tab 5 Effect of Jinju capsule on the excretion of phenol red in respiratory tract of mice（）

表5 金桔膠囊對小鼠氣管酚紅排泌量的影響（）Tab 5 Effect of Jinju capsule on the excretion of phenol red in respiratory tract of mice（）

與模型組比較:＊P＜0.05vs.model group:＊P＜0.05

酚紅質(zhì)量濃度，ml 2.53±1.15.3±2.9＊4.3±1.4＊2.3±3.54.8±2.7＊組別正常對照組金桔膠囊高劑量組金桔膠囊中劑量組金桔膠囊低劑量組可愈糖漿組劑量，g/k g n 8.04.02.06.2ml/k g 1010101010

3.6 金桔膠囊對小鼠非特異性免疫功能的影響

與正常對照組比較，模型組K、α降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，金桔膠囊高、中劑量組K、α升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。表明高、中劑量金桔膠囊可增強(qiáng)小鼠機(jī)體巨噬細(xì)胞的吞噬功能，提高非特異性免疫功能。金桔膠囊對小鼠非特異性免疫功能的影響見表6。

表6 金桔膠囊對小鼠非特異性免疫功能的影響（）Tab 6 Effects of Jinju capsules on the carbon clearance in mice（）

表6 金桔膠囊對小鼠非特異性免疫功能的影響（）Tab 6 Effects of Jinju capsules on the carbon clearance in mice（）

與正常對照組比較:＊P＜0.01；與模型組比較:#P＜0.05vs.nomal control group:＊P＜0.01；vs.model group:#P＜0.05

組別正常對照組模型組金桔膠囊高劑量組金桔膠囊中劑量組金桔膠囊低劑量組清熱解毒口服液組劑量，g/k g n K α 4.989±0.4824.070±0.517＊4.815±0.729#5.028±0.463#4.769±0.4965.320±0.669#8.04.02.030.01010101010100.0597±0.0140.0365±0.014＊0.0549±0.015#0.0536±0.017#0.0477±0.0110.0537±0.018#

4 討論

本研究利用小鼠模型驗證金桔膠囊抗炎鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳祛痰等藥理作用，其結(jié)果如下:金桔膠囊對二甲苯和醋酸致小鼠急性炎癥和醋酸致小鼠疼痛具有明顯的對抗作用；止咳祛痰實驗表明，金桔膠囊能明顯延長小鼠咳嗽潛伏期、減少咳嗽次數(shù)，增加小鼠氣管分泌酚紅的含量，提示其可能通過增加氣管的分泌稀釋痰液，從而產(chǎn)生化痰祛痰作用。金桔膠囊能明顯增加模型小鼠K及α，說明其能夠增強(qiáng)模型小鼠單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能，具有提高機(jī)體非特異性免疫的作用。免疫系統(tǒng)的功能對呼吸系統(tǒng)疾病有直接的影響，金桔膠囊通過抗炎、鎮(zhèn)咳祛痰改善或解除其癥狀，并通過扶正功效增強(qiáng)機(jī)體免疫力，反過來又加強(qiáng)了機(jī)體的抗炎能力，促進(jìn)機(jī)體恢復(fù)正常。上述研究結(jié)果表明，金桔膠囊全方配伍合理，標(biāo)本兼顧，達(dá)到強(qiáng)化主效應(yīng)、兼顧次效應(yīng)，共奏化痰止咳、清熱宣肺之功。綜上所述，金桔膠囊具有較好的抗炎鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳祛痰以及免疫增強(qiáng)功效，與臨床的功能主治一致，為臨床用藥及新藥申報提供了一定的理論依據(jù)。

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