α-硫辛酸對2型糖尿病患者尿podocalyxin及MCP-1排泄的影響

鮑溪荷，徐 將，葉山東，楊春林

（安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院1.內(nèi)分泌科、2.生化實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥 230001）

α-硫辛酸（alpha-lipoic acid，ALA）是一種存在于線粒體的酵素，通過清除氧自由基、還原體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)、螯合金屬離子等發(fā)揮強(qiáng)抗氧化作用［1］。臨床上已被廣泛用于治療糖尿病相關(guān)并發(fā)癥，但有關(guān)其對糖尿病腎臟足細(xì)胞的保護(hù)和抗炎作用的研究尚少。糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，現(xiàn)研究認(rèn)為炎癥反應(yīng)及足細(xì)胞損傷參與了DN發(fā)生發(fā)展的全過程［2］。足細(xì)胞損傷也已被證明［3］與DN蛋白尿及腎小球硬化密切相關(guān)。podocalyxin（PCX）正常表達(dá)于足細(xì)胞，是足細(xì)胞標(biāo)志蛋白之一，對維持腎小球正常結(jié)構(gòu)及濾過屏障起重要作用。本研究通過觀察正常人和2型糖尿?。╰ype 2 diabetesmellitus，T2DM）患者PCX和 MCP-1濃度的差異，以及ALA治療前后排泄水平的變化，探討ALA對T2DM患者腎小球足細(xì)胞的保護(hù)作用及其與抗炎之間的可能關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象 糖尿病組（DM組）36例，均為2011全年我院內(nèi)分泌科門診隨訪的T2DM患者，年齡34～66（51.50±10.40）歲，男22例，女14例。DM組依照1999年世界衛(wèi)生組織糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)：糖尿病癥狀＋任意時間血漿葡萄糖水平≥11.1 mmol·L－1或空腹血漿葡萄糖（FPG）水平≥7.0 mmol·L－1或口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）試驗(yàn)中，2 h血漿葡萄糖（2hPG）水平≥11.1 mmol·L－1，重復(fù)一次確認(rèn)。排除標(biāo)準(zhǔn)如下：①有嚴(yán)重心腦血管、肝、腎等疾病者；②有泌尿系統(tǒng)自身疾病或除糖尿病外引起的繼發(fā)性腎臟疾病者；③有感染、腫瘤及免疫性疾病者；④近期發(fā)生過糖尿病急性并發(fā)癥（如酮癥酸中毒、高滲性昏迷及乳酸酸中毒等）和嚴(yán)重的慢性并發(fā)癥者；⑤近期有服用腎毒性藥物史者；⑥1周內(nèi)服用過利尿劑、醛固酮受體拮抗劑、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑及血管活性藥物者。6個月結(jié)束后，受試對象共計34例（1例主動退出，1例出現(xiàn)酮癥退出）。同期選擇我院體檢中心30名健康體檢人員作為正常對照組（NC組），年齡32～68（51.37±9.69）歲。

1.1.2 藥物和試劑 硫辛酸分散片（煙臺只楚藥業(yè)公司生產(chǎn)，批號2007L01107，100 mg／片）；PCX、MCP-1 ELISA試劑盒（R＆D Systems公司提供）；肌酐測定試劑盒（上海榮盛生物藥業(yè)有限公司提供）；尿白蛋白及葡萄糖測定試劑盒（北京北方生物技術(shù)研究所提供）。

1.1.3 儀器 Biocell HT-1酶標(biāo)儀（奧地利）；Ultra2全自動糖化血紅蛋白分析儀（Primus公司，美國）；BNII全自動血漿蛋白分析儀（Behring公司，德國）；7600-020全自動生化分析儀 （日立公司，日本）。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 DM組在原有糖尿病治療方案的基礎(chǔ)上加用硫辛酸分散片（煙臺只楚藥業(yè)公司生產(chǎn)，批號2007L01107，100 mg／片，每天 3次，每次 2片），連續(xù)口服 6個月，受試期間控制飲食和運(yùn)動，根據(jù)血糖情況調(diào)整降糖藥用量，維持血糖濃度相對穩(wěn)定（FPG：5.1～9.3 mmol·L－1，2hPG：10 mmol·L－1以下）。記錄所有受試人員的性別、年齡、病程、SCr、收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP），計算 BMI。

1.2.2 標(biāo)本收集 受試者隔夜空腹8 h以上，清晨取空腹靜脈血，檢測糖化血紅蛋白（HbA1c）、FPG及SCr，同時用無菌培養(yǎng)杯，收集清晨第1次中段尿4 m l，－40℃保存，待測尿ALB、Cr、PCX和MCP-1，治療6個月后，復(fù)測上述指標(biāo)。

1.2.3 檢測指標(biāo) 尿PCX、MCP-1采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定，并嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作；尿ALB測定采用免疫比濁法；血、尿Cr測定采用酶法；FPG檢測采用己糖激酶法；HbA1c測定采用高壓液相色譜法。為減少受試者尿量及濃度變化對測定結(jié)果的影響，尿PCX、MCP-1和ALB濃度分別采用尿 PCX／Cr（UPCR）、MCP-1／Cr（UMCR）、和ALB／Cr（UACR）表示。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 數(shù)據(jù)運(yùn)用統(tǒng)計軟件SPSS 16.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以表示，治療前后組內(nèi)差異分析采用配對t檢驗(yàn)，組間比較采用兩獨(dú)立樣本資料的t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)的相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較 DM組與NC組相比，性別、年齡、病程、血肌酐（SCr）、血壓、體質(zhì)指數(shù)（BMI）差異無統(tǒng)計學(xué)意義，均具可比性，見Tab 1。DM組FPG、HbA1c及UACR、UPCR、UMCR水平較NC組明顯升高（P＜0.01）。

Tab 1 Comparison of clinical indexes between diabetic and normal control group

Tab 1 Comparison of clinical indexes between diabetic and normal control group

Group Age（yr） n（M／F）BMI／kg·m－2 SBP／kPa DBP／kPa SCr／μmol·L－1 NC 51.37±9.69 30（16／14）25.39±2.55 15.05±4.92 9.04±3.43 58.66±9.49 DM 51.50±10.40 34（21／13） 25.37±2.50 16.63±1.62 10.19±0.95 70.96±12.58

2．2 治療前后 FPG、HbA1c及 UACR、UPCR、UMCR水平比較 經(jīng)ALA治療6個月后，UACR、UPCR和UMCR水平較治療前明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），F(xiàn)PG和HbA1c較治療前比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見Tab 2。

Tab 2 Comparison of FBG，HbA1c，UACR，UPCR and UMCR levels between the groups before and after therapy

Tab 2 Comparison of FBG，HbA1c，UACR，UPCR and UMCR levels between the groups before and after therapy

＃＃P＜0.01 vs NCgroup；*P＜0.05，**P＜0.01 vs DM group of pre-treatment

FPG／mmol·L－1 5.02±0.57 6.92±1.14＃＃6.97±1.49 HbA1c／% 5.65±0.41 6.92±0.82＃＃ 6.90±0.78 UACR／mg·g－1·Cr 8.97±3.98 52.65±29.56＃＃ 26.77±21.46**UPCR／μg·g－1·Cr 46.18±29.53 423.78±98.05＃＃ 246.71±77.15**UMCR／μg·g－1·Cr 3.64±1.13 7.77±0.79＃＃ 7.05±1.70*

2.3 相關(guān)性分析 以UPCR水平作為應(yīng)變量，分別以UACR、UMCR為自變量進(jìn)行直線相關(guān)性分析，顯示UPCR與UACR、UMCR分別呈正相關(guān)（r＝0.720，P＜0.01）、（r＝0.516，P＜0.01）。

3 討論

尿白蛋白（urinary albumin，UALB）排泄增加是反映腎臟疾病及腎小球功能受損的敏感指標(biāo)，而足細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變是導(dǎo)致腎小球?yàn)V過膜通透性增高和蛋白尿產(chǎn)生的重要原因［4］。Okamura等［4］發(fā)現(xiàn)，DN患者的腎小球足細(xì)胞功能及結(jié)構(gòu)均有不同程度損傷。PCX作為一種帶負(fù)電荷的唾液粘蛋白分子，是足突頂端質(zhì)膜的主要構(gòu)成部分［5］。Habara等［6］研究證實(shí)，幾乎所有的腎小球疾病患者尿液中均能檢測到PCX。已有研究報道［7］，尿PCX排泄的變化可作為足細(xì)胞損傷的早期標(biāo)志物，并能監(jiān)測足細(xì)胞損傷程度。本研究結(jié)果顯示，T2DM患者尿PCX排泄增加，并與UALB水平呈正相關(guān)，提示T2DM患者存在足細(xì)胞損害并參與蛋白尿的形成，與文獻(xiàn)報道一致［3－8］。

近期研究發(fā)現(xiàn)［5］，ALA對糖尿病腎臟損害也具有較好的保護(hù)作用，但其機(jī)制不十分明確。本實(shí)驗(yàn)顯示，ALA治療6個月后，T2DM患者UALB和PCX排泄均明顯降低，提示ALA可保護(hù)糖尿病腎小球足細(xì)胞，且作用可能與其減少UALB排泄部分有關(guān)。Tarabra等［7］發(fā)現(xiàn)，腎小球足細(xì)胞是MCP-1基因表達(dá)的主要部位。MCP-1與受體結(jié)合后能夠刺激足細(xì)胞，增強(qiáng)其遷移能力，增加腎小球?yàn)V過膜通透性，引起白蛋白漏出。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，T2DM患者經(jīng)ALA治療后MCP-1排泄明顯減少，且與UPCR水平呈正相關(guān)，提示ALA可能通過抗炎作用減輕足細(xì)胞損傷。

總之，本研究初步證實(shí)，ALA可減輕T2DM患者腎臟局部增強(qiáng)的炎癥反應(yīng)，減輕足細(xì)胞損傷、減少尿蛋白漏出，對腎臟提供一定的保護(hù)作用，確切機(jī)制值得進(jìn)一步探討。

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