Ⅰ型自身免疫性肝炎患者抗Ro52抗體的檢測(cè)及臨床意義

孫麗梅，閆惠平，馮 霞，王一鵬，趙丹彤，張海萍，王 熠，馬胤雪，劉燕敏，2＊

Ⅰ型自身免疫性肝炎患者抗Ro52抗體的檢測(cè)及臨床意義

孫麗梅1，閆惠平1，馮 霞1，王一鵬1，趙丹彤1，張海萍1，王 熠1，馬胤雪1，劉燕敏1，2＊

（1．首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院自身免疫性肝病臨床研究中心，北京100069；2．首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院肝病免疫科，北京100069）

目的 探討I型自身免疫性肝炎患者抗Ro52抗體的臨床意義。方法 采用免疫印記法檢測(cè)54例I型自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH）患者血清中的抗Ro52抗體，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果分為抗Ro52抗體陽(yáng)性組與陰性組，并對(duì)兩組檢測(cè)結(jié)果及臨床資料進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果 54例I型AIH患者中，抗Ro52抗體陽(yáng)性20例（37%）?？筊o52抗體陽(yáng)性組與陰性組Ⅰ型AIH患者的抗核抗體（ANA分布主要見(jiàn)于滴度1∶320～1∶1000）。20例抗Ro52抗體陽(yáng)性患者中，5例（25%）抗可溶性肝原（抗SLA／LP）抗體陽(yáng)性；12例（60%）同時(shí)抗Ro60陽(yáng)性?？筊o52抗體陽(yáng)性組出現(xiàn)肝病相關(guān)并發(fā)癥的比例高于陰性組，但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（65%vs．38．2%；χ2＝3．613，P＞0．05）。抗Ro52抗體陽(yáng)性組合并肝外自身免疫性疾病的比例顯著高于陰性組（χ2＝4．290，P＝0．038）?？筊o52抗體陽(yáng)性組IgG水平顯著高于陰性組（t＝3．014，P＝0．04）。結(jié)論 抗Ro52抗體陽(yáng)性可提示AIH患者伴發(fā)肝內(nèi)或肝外并發(fā)癥幾率升高；抗Ro52抗體可能與IgG共同作用，參與Ⅰ型AIH的發(fā)病。

抗Ro52抗體；Ⅰ型自身免疫性肝炎；肝病相關(guān)并發(fā)癥；肝外自身免疫性疾?。籌gG

（Chin J Lab Diagn，2014：18：0236）

自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH）是一種免疫介導(dǎo)的、慢性肝臟炎癥性疾病，以高γ球蛋白血癥、自身抗體陽(yáng)性、肝組織學(xué)界面炎和免疫抑制治療有效為特征［1］。根據(jù)自身抗體將AIH分為Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型以抗核抗體（ANA）和／或抗平滑肌抗體（SMA）陽(yáng)性為特征，占總AIH患者的80%，常合并其他肝外自身免疫性疾病（15%－34%），診斷時(shí)已進(jìn)展為肝硬化者占0－25%［2］。抗Ro52抗體可在多種疾病中檢出，不僅見(jiàn)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合癥和系統(tǒng)性硬化癥等常見(jiàn)自身免疫性疾病中，還可見(jiàn)于原發(fā)性膽汁性肝硬化（Primary Biliary Cirrhosis，PBC）［3］和AIH［4］等自身免疫性肝病中。但目前尚缺乏抗Ro52抗體對(duì)我國(guó)AIH患者診斷和治療意義的相關(guān)報(bào)道。

本研究收集了2008年1月－2011年7月54例Ⅰ型AIH患者血清，通過(guò)進(jìn)行抗Ro52抗體檢測(cè)，對(duì)抗Ro52抗體陽(yáng)性組與陰性組Ⅰ型AIH患者的臨床資料進(jìn)行比較，旨在探討抗Ro52抗體在中國(guó)I型AIH患者診治過(guò)程中的價(jià)值。

1 材料與方法

1．1 研究對(duì)象

以2008年1月－2011年7月北京佑安醫(yī)院住院的54例Ⅰ型AIH患者為研究對(duì)象?；颊吣挲g20－74〔平均（52．81±11．14）〕歲，男9例，女45例。收集AIH患者血液樣本5ml，離心并提取血清1ml。AIH的診斷參照1999年國(guó)際自身免疫性肝炎小組（IAIHG）制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］。

1．2 方法

1．2．1 采用免疫印跡法檢測(cè)ANA譜（包括抗Ro52抗體、抗Ro60等）將膜條放置于溫育槽中加入1．5ml緩沖液振蕩孵育5min，棄緩沖液加入稀釋待檢患者血清1．5ml，振蕩孵育30min。洗滌后加入堿性磷酸酶（ALP）標(biāo)記第二抗體再振蕩孵育30min。洗滌后加入底物顯色10min，水洗終止后觀察結(jié)果。檢測(cè)膜條上出現(xiàn)藍(lán)紫色條帶為陽(yáng)性，以試劑公司提供的陽(yáng)性條帶位置標(biāo)準(zhǔn)圖判定結(jié)果。（試劑盒來(lái)源德國(guó)Euroimmun公司）

1．2．2 間接免疫熒光檢測(cè)自身抗體 選擇Hep－2細(xì)胞和5種組織（猴肝臟、心肌和髂腰肌組織、大鼠腎和胃組織）的冰凍切片作為抗原，制成超薄片固定在抗原基質(zhì)。對(duì)同一份標(biāo)本進(jìn)行平行測(cè)定。抗核抗體（ANA）滴度＞l∶100為陽(yáng)性。（試劑盒來(lái)源德國(guó)Euroimmun公司）。

1．2．3 肝臟功能檢測(cè) 應(yīng)用全自動(dòng)生物化學(xué)分析儀檢測(cè)（Olympus AU5400系統(tǒng)）丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT），天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽紅素（TbiL）、直接膽紅素（DbiL）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、堿性磷酸酶（ALP）等肝功指標(biāo)。

1．2．4 免疫球蛋白檢測(cè) 應(yīng)用羅氏（Roche）E170采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）和血清補(bǔ)體（C3、C4）等。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS16．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料中正態(tài)分布資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)，偏態(tài)分布的ALT、AST和GGT檢測(cè)數(shù)據(jù)用M（范圍）表示，采用秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比描述，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 54例Ⅰ型AIH患者中抗Ro52抗體的檢出情況及其他自身抗體檢出情況

54例AIH患者采用免疫印記檢測(cè)ANA抗體譜中，抗Ro52抗體陽(yáng)性20例（37．0%），抗Ro52抗體陰性34例（63．0%）；15例抗Ro60抗體陽(yáng)性（27．8%），39例抗Ro60抗體陰性（72．2%）；抗Ro52抗體、抗Ro60抗體同時(shí)陽(yáng)性的樣本12例（22．2%）；抗Ro52抗體陽(yáng)性而抗Ro60抗體陰性的樣本8例（14．8%），抗Ro52抗體陰性而抗Ro60抗體陽(yáng)性的樣本3例（5．6%）。為了進(jìn)一步確認(rèn)抗Ro52抗體與除ANA外的其他自身抗體的并存情況，我們還進(jìn)一步檢測(cè)了其他自身免疫性肝病中常見(jiàn)的自身抗體。其中，在20例抗Ro52抗體陽(yáng)性患者中，5例（25%）同時(shí)抗可溶性肝原（抗SLA／LP）陽(yáng)性，其中抗SLA／LP（＋＋＋）3例，SLA／LP（＋＋＋＋）2例。采用間接免疫熒光法檢測(cè)54例AIH患者抗核抗體（ANA）均陽(yáng)性，ANA滴度分布主要見(jiàn)于（1∶320～1∶1000），其中抗Ro52抗體陽(yáng)性組抗平滑肌抗體陽(yáng)性3例，抗線粒體抗體（AMA）陽(yáng)性5例，抗細(xì)胞骨架抗體陽(yáng)性1例，抗著絲點(diǎn)抗體陽(yáng)性2例；抗Ro52抗體陰性組抗平滑肌抗體陽(yáng)性3例，抗線粒體抗體（AMA）陽(yáng)性5例，抗細(xì)胞骨架抗體陽(yáng)性2例，抗著絲點(diǎn)抗體陽(yáng)性3例，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 54例AIH患者中抗Ro52抗體及其他自身抗體檢出情況

2．2 抗Ro52抗體陽(yáng)性組與陰性組Ⅰ型AIH患者一般資料的比較

將抗Ro52抗體陽(yáng)性組與陰性組患者一般資料進(jìn)行分析比較。結(jié)果表明兩組發(fā)病年齡及性別構(gòu)成均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。肝病相關(guān)并發(fā)癥更容易出現(xiàn)在抗Ro52抗體陽(yáng)性患者組中，為65%（13／20）；而抗Ro52抗體陰性組出現(xiàn)肝病相關(guān)并發(fā)癥的比率則要低一些，為38．23%（13／34），抗Ro52抗體陽(yáng)性組出現(xiàn)肝病相關(guān)并發(fā)癥的比率高于陰性組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝3．613，P＞0．05）；兩組患者進(jìn)展為肝硬化的比例無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（見(jiàn)表2）

抗Ro52抗體陽(yáng)性組患者合并肝外自身免疫性疾病的比例為40%（8／20）其中5例干燥綜合征、1例銀屑病、1例甲狀腺功能減退、1例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；而陰性組為11．76%（4／34），其中1例干燥綜合征、1例銀屑病、1例甲狀腺功能減退、1例橋本甲狀腺炎，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝4．290，P＝0．038）。

表2 兩組患者一般資料的比較

2．3 抗Ro52抗體陽(yáng)性與陰性Ⅰ型AIH患者兩組生化指標(biāo)、凝血功能和免疫學(xué)指標(biāo)的比較

兩組生化指標(biāo)、凝血功能和免疫學(xué)指標(biāo)的比較：ALT、AST、ALP、GGT、ALB、PLT、PTA、IgA、C3和C4無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?？筊o52抗體陽(yáng)性組IgG、IgM水平顯著高于陰性組（分別為t＝3．014，P＝0．004；t＝2．925，P＝0．005），見(jiàn)表3、表4。

表3 兩組生化指標(biāo)對(duì)比

表4 兩組患者凝血功能、免疫指標(biāo)的比較

3 討論

抗Ro52抗體為自身抗體ANA的一種，其靶抗原為TRIM21，后者屬于TRIM蛋白家族的一員，因此，抗Ro52抗體又稱為抗TRIM21?？筊o52抗體是一種致病免疫復(fù)合物，常用于疾病的診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)［6，7］。有文獻(xiàn)報(bào)道，抗Ro52抗體平均比系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）相關(guān)的其他自身抗體（如ds－DNA、抗Sm等）早3－4年出現(xiàn)，因此抗Ro52抗體可能對(duì)SLE的早期診斷有重要意義［8］。

Ⅰ型自身免疫性肝炎高血清自身抗體以ANA、SMA等為主，Ⅰ型自身免疫性肝炎中常檢測(cè)到抗Ro52抗體。Montano－Loza等［9］報(bào)道，北美Ⅰ型AIH患者中抗Ro52抗體的陽(yáng)性率38%，而本研究中抗Ro52抗體陽(yáng)性率為37%，可見(jiàn)Ⅰ型AIH患者外周血中抗Ro52抗體并不鮮見(jiàn)。除抗Ro52抗體以外，AIH患者外周血中還可出現(xiàn)多種自身抗體，包括ANA、SMA、actin抗體和抗SLA／LP等。在歐洲的一項(xiàng)研究表明［4］，77%的AIH患者抗Ro52抗體和抗SLA同時(shí)陽(yáng)性，國(guó)內(nèi)趙丹彤等［9］報(bào)道抗Ro52抗體與抗SLA具有一致性。Montano－Loza等［10］還認(rèn)為單抗Ro52抗體陽(yáng)性和抗Ro52抗體及抗SLA均陽(yáng)性的Ⅰ型AIH患者的預(yù)后均不好。遺憾的是，本研究中抗SLA的陽(yáng)性患者較少，不足以評(píng)估抗Ro52抗體與抗SLA的關(guān)系及監(jiān)測(cè)Ⅰ型AIH患者的預(yù)后。

Song等［11］的研究表明，原發(fā)性干燥綜合征患者中，抗Ro52抗體陽(yáng)性患者更容易出現(xiàn)肝臟受累，若抗Ro52抗體陽(yáng)性伴有抗Ro60陽(yáng)性的患者出現(xiàn)肝臟受累較單抗Ro52抗體陽(yáng)性的比例更大。然而，抗Ro52抗體究竟是肝損害的原因還是結(jié)果仍然存在爭(zhēng)議。本研究通過(guò)對(duì)抗Ro52抗體陽(yáng)性組與陰性組臨床表現(xiàn)比較發(fā)現(xiàn)，肝病相關(guān)并發(fā)癥更容易出現(xiàn)在抗Ro52抗體陽(yáng)性組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，是否提示抗Ro52抗體陽(yáng)性患者病情較重，需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本觀察研究。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)，抗Ro52抗體陽(yáng)性組患者伴發(fā)肝外自身免疫性疾病較陰性組更常見(jiàn)，因而對(duì)于抗Ro52抗體陽(yáng)性的Ⅰ型AIH患者，還應(yīng)該注意鑒別是否合并肝外自身免疫性疾病。然而，抗Ro52抗體陽(yáng)性組和陰性組肝功能比較無(wú)明顯差異，提示在肝臟損傷的機(jī)制中抗Ro52抗體并非主導(dǎo)因素。

比較抗Ro52抗體陽(yáng)性組和陰性組免疫學(xué)指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，抗Ro52抗體陽(yáng)性組IgG水平明顯高于陰性組。Rhodes等［12］的研究發(fā)現(xiàn)TRIM21（Ro52）可與IgG重鏈發(fā)生蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間的相互作用，發(fā)生作用的部位位于C端的B30．2區(qū)域。最近Anthony等［13］發(fā)現(xiàn)，Ro52不僅僅只是自身免疫性抗體的靶抗原物質(zhì)，而且可以通過(guò)其C端的PRYSPRY區(qū)域結(jié)合血清中普通IgG分子的Fcγ段。以上研究均提示Ro52參與了IgG功能的調(diào)節(jié)，兩者的結(jié)合可能參與Ro52自身免疫抗原的暴露，誘導(dǎo)自身抗體產(chǎn)生并引起自身免疫性疾病。

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Antibody to Ro52 in patients with type I autoimmune hepatitis

SUN Li－mei1，YAN Hui－ping1，F(xiàn)ENG Xia1，et al．
（1．Clinical Research Center for Autoimmune Liver Disease，Beijing You’an Hospital，Capital Medical University，Beijing100069，China；2．Department of Liver Disease Immunology，Beijing You’an Hospital，Capital Medical University，Beijing100069，China）

Objective To investigate the significance of antibody to Ro52in patients with type I autoimmune hepatitis．Methods Fifty－five patients with type I autoimmune hepatitis were detected anti－Ro52by immunological blotting．According to anti－Ro52results，the clinical features were compared between patients with and without anti－Ro52，respectively．Results Twenty patients had anti－Ro52，the rate was 37%．The titers of antinuclear antibody were 1∶320－1∶1000．Of the twenty patients who had anti－Ro52，5patients（25%）had anti－soluble liver antigen／liver－pancreas antibody（anti－SLA／LP）；12patients（60%）had anti－Ro60．AIH Patients with anti－Ro52had higher rate of liver disease related complications compared with the control group（65%vs．38．2%；χ2＝3．613，P＝0．057），but with little significance．AIH Patients with anti－Ro52had higher rate of extrahepatic autoimmune diseases and IgG compared with the control group（χ2＝4．290，P＝0．038；t＝3．014，P＝0．04）．Conclusion AIH patients with anti－Ro52may have higher rate of liver disease related complications．Anti－Ro52and IgG may play a role in the development of AIH．

Anti－Ro52antibody；type I autoimmune hepatitis；liver disease related complications；extrahepatic autoimmune diseases

孫麗梅（1969－），女，主管技師，研究方向：肝病相關(guān)自身抗體檢測(cè)；劉燕敏（1966－），女，主任醫(yī)師，研究方向：肝病免疫。

2013－09－10）

1007－4287（2014）02－0236－04

首都衛(wèi)生行業(yè)發(fā)展科研專項(xiàng)項(xiàng)目（2011－2018－05），佑安肝病艾滋病科研基金（BJYAH－2011－011）

＊通訊作者

R575．2

A