薄層色譜法用于確定維生素B6合成過程反應終點

韋 勤，盧 紅，黎丹娜，梁 飛，丘天鳳，陸 欣

(廣西化工研究院，廣西 南寧 530001)

實驗室與分析

薄層色譜法用于確定維生素B6合成過程反應終點

韋 勤，盧 紅，黎丹娜，梁 飛，丘天鳳，陸 欣

(廣西化工研究院，廣西 南寧 530001)

以硅膠加燒石膏(占15%)作為吸附劑，正丁醇∶醋酸∶水(60∶15∶25)為展開劑，3%茚三酮乙醇溶液為顯色劑，采用薄層色譜法確定合成維生素B6中酯化和?；磻慕K點。結果表明，該方法設備、操作簡單，速度快，受溫度影響小，靈敏度高，用于確定合成維生素B6酯化反應和?；磻K點明顯，可操作性強。

維生素B6；酯化反應；酰化反應；終點；薄層色譜法

維生素B6具有廣泛的生理作用，是人體必需的維生素之一[1-3]。維生素B6又稱吡哆素，是一種水溶性維生素，遇光或堿易破壞，不耐高溫。通常其分析方法有色譜法[4-5]、聚硫堇/亞鐵氰根修飾碳糊電極法[6]、分光光度法[7]、熒光法[8]、微生物法[9]等。

維生素B6的合成工藝有 唑法和吡啶酮法等，本實驗采用 唑法生產(chǎn)。工藝流程大致為：將氨基丙酸和鹽酸投入成鹽鍋，在一定的溫度下保溫，減壓蒸去酸水至鍋內(nèi)物呈乳白色固狀；稍冷加入乙醇溶解固狀物，用泵打到酯化鍋然后加入定量的苯、乙醇進行三元共沸脫水酯化反應，當分水器有水分出時，開始滴加定量的苯、乙醇混合物，滴加速度大致與分水器速度相等，乙醇滴加完畢，繼續(xù)回流一定時間（根據(jù)分析結果確定），加入催化劑磷酸，繼續(xù)帶水至鍋內(nèi)酯化液水分≤0.5%（W/V），然后常壓加收苯醇至鍋溫90℃停止。將上述所得的酯化液抽入干燥的草酰化鍋，加入草酸二乙酯，分次加入小蘇打，然后升溫至50℃保溫反應一定時間（根據(jù)分析結果確定），得到N-草酰物。薄層色譜法[10-12]常用于中藥材的薄層鑒別，具有設備簡單，操作方便，分析速度快，靈敏度高，選擇性好，固體相和流動相的選擇范圍大等優(yōu)點。我們在合成維生素B6中，酯草工序難以確定酯化反應和?；磻慕K點。酯草工序有成鹽反應、酯化反應和酰化反應，成鹽反應很快就完成，但酯化反應和?；磻慕K點則難以確定。本文通過大量的實驗，篩選出一種簡易的薄層色譜法，并將該法用于化學藥品合成過程中的分析。結果表明，薄層色譜法比用高效液相法分析速度快，投入成品低，且該方法設備、操作簡單，靈敏度高，可用于維生素B6合成過程反應終點的確定。

1 儀器和試劑

載玻片、研缽、展開槽、干燥烘箱。

酯化液、?；?、中性氧化鋁、硅膠、燒石膏、正丁醇、醋酸、茚三酮、乙醇。

2 實驗部分

2.1 吸附劑（載體）的選擇

選擇載體，必須同時兼顧所用展開劑與分離物質(zhì)三者的關系。針對被分離物的性質(zhì)，在眾多的吸附劑中，分別選用中性氧化鋁和硅膠作吸附劑加入燒石膏（占吸附劑的15%）為粘合劑制成薄層板，活化條件為105℃，30min。實驗結果見表1。從表1可看出，活性為Ⅳ級的硅膠分離效果最好。

2.2 展開劑的選擇

選用合適的展開劑，可使各成分恰當?shù)胤蛛x，方便對各成分進行定量，確定反應的終點。要將吸附劑的活性，被分離化合物的極性和溶解性，以及展開劑的極性三方面的因素結合起來考慮。被分離化合物有丙氨酸鹽酸鹽和酯化物等，綜合各因素，選用了正丁醇、醋酸和水3種溶劑按一定比例組成的溶劑系統(tǒng)作為展開劑，實驗結果見表2。從表2可看出，展開劑為正丁醇∶醋酸∶水=60∶15∶25時，斑點顯色效果最佳。

表1 吸附劑的選擇

表2 展開劑的選擇

2.3 顯色劑的選擇

生物堿指示劑中，選擇麻黃生物堿類常使用的3%茚三酮乙醇溶液作指示劑，經(jīng)過與2.1和2.2同步試驗，結果顯色明顯。

2.4 實驗樣品測定

采用自制薄層硅膠G板(15cm×20cm玻璃棉板)，課題組自制樣品，按表3所列時間取樣，用毛細管在離邊緣1.5cm處點樣，放入展開槽中約10min后展開，取出，放在干燥箱烘干，然后用3%的茚三酮乙醇溶液顯色，在105℃加熱約5 min，觀察顯色斑點。Rf=0.5處為丙氨酸鹽酸鹽斑點，Rf=0.7處為酯化物斑點，均顯紫紅色。

3 實驗結果與討論

采用薄層色譜法分析，以硅膠加燒石膏(占 15%)作為吸附劑，正丁醇∶醋酸∶水(60∶15∶25)為展開劑，3%茚三酮乙醇溶液為顯色劑，在維生素B6合成中，在乙醇滴加完后第4h，Rf=0.5處無斑點，Rf=0.7處斑點明顯，表明酯化反應結束；最后一次加入小蘇打后第9h，Rf=0.5處無斑點，Rf=0.7處幾乎看不見斑點，表明酰化反應結束。

4 結論

1）以硅膠加燒石膏(占15%)作為吸附劑，正丁醇∶醋酸∶水(60∶15∶25)為展開劑，3%茚三酮乙醇溶液為顯色劑，進行薄層色譜分析，所顯的斑點位置和顏色最佳。

2）采用薄層色譜分析法確定合成維生素B6中酯草工序酯化和酰化反應的終點方法可行，該方法設備、操作簡單，速度快，受溫度影響小，靈敏度高，可操作性強。

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Determination of Reaction End Point of Vitamin B6 Synthesis by Thin-layer Chromatography

WEI qin, LU hong, LI Dan-na, LIAN Fei, QIU Tian-feng, LU Xin
(Guangxi Research Institute of Chemical Industry，Nanning 530001,China)

Used silica gel and bassanite (15%) as absorbent, n-butyl alcohol : acetic acid : water(60:15:25) as developing solvent, 3% ninhydrin ethanol solution as color-developing agent,the end point of esterification and acylation reaction in synthesis of vitamine B6 was determined by thin-layer chromatography. The test result showed that this method was easy, rapid, simple equipment, little temperature influence, high sensitive and operability. The esterification and acylation reaction endpoint was clear.

vitamine B6; esterification; acylation reaction; end point; thin-layer chromatography

表3 樣品測定結果

O 657.7

A

1671-9905(2014)08-0041-03

韋勤（1964-），女，高級工程師，主要從事原料藥工藝和檢測研究。E-mail: 952849588@. qq .com

2014-07-03