角類中藥的現(xiàn)代研究進(jìn)展

張倩倩，程顯隆，陸以云，周建理，魏 鋒*，肖新月，馬雙成

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角類中藥的現(xiàn)代研究進(jìn)展

張倩倩1，程顯隆2，陸以云2，周建理1，魏 鋒2*，肖新月2，馬雙成2

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽 合肥 230031；2.中國食品藥品檢定研究院，北京 100050)

目的：對(duì)角類藥材的種類、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及收載情況、化學(xué)成分分析、藥理作用、鑒別方法等研究進(jìn)行綜述，為角類藥材的進(jìn)一步開發(fā)利用及質(zhì)量控制提供參考。方法：查閱國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，進(jìn)行分析、歸納和綜述。結(jié)果與結(jié)論：珍貴角類藥材應(yīng)用日益廣泛，造假現(xiàn)象較為嚴(yán)重，但對(duì)其鑒別方法并不十分完善，因此建立一套準(zhǔn)確性好、靈敏度高、專屬性強(qiáng)的動(dòng)物角類藥材質(zhì)量控制方法十分必要。

角類藥材；成分分析；藥理作用

角類藥材是指特定動(dòng)物的角及其加工品，屬皮膚衍化物的組織，由角質(zhì)細(xì)胞組成，是我國特有的一類動(dòng)物來源的中藥，且多為名貴中藥。具有活性強(qiáng)、療效顯著、副作用小等特點(diǎn)，應(yīng)用也日益廣泛, 因此加強(qiáng)動(dòng)物藥活性成分的研究十分必要。角類藥材的結(jié)構(gòu)與成分相似，均含有角蛋白類成分，因此其功效也相似，大多具有散熱行血、消腫辟邪、益腎補(bǔ)肺、強(qiáng)精活血等功效[1]。

角類中藥在中醫(yī)臨床應(yīng)用中有著悠久歷史。然而，目前由于動(dòng)物角類藥材的生產(chǎn)原料短缺，價(jià)格昂貴，市場上角類藥材摻偽、摻假、冒充、替代等非法謀利的違法現(xiàn)象非常普遍，特別是針對(duì)羚羊角粉、水牛角濃縮粉等已失去了外觀性狀的珍稀名貴或常用藥材的摻偽、造假現(xiàn)象更為嚴(yán)重。劉睿等[2]對(duì)各地市售的10批水牛角濃縮粉樣品中水分、總灰分、酸不溶灰分、浸出物和?；撬岷糠治觯Y(jié)果顯示其質(zhì)量差異較大，因而導(dǎo)致角類藥材的質(zhì)量參差不齊、市場秩序非?；靵y，嚴(yán)重危害了消費(fèi)者的經(jīng)濟(jì)利益和身心健康。

因角類藥材中化學(xué)成分多為變性的角蛋白, 成分類型單一, 藥效成分不明確, 難以用化學(xué)含量測定、化學(xué)指紋圖譜等手段控制其質(zhì)量。因此，建立一套準(zhǔn)確性好、靈敏度高、專屬性強(qiáng)的動(dòng)物角類藥材的質(zhì)量控制方法變得尤為重要。本文就現(xiàn)行的一些角類藥材的種類、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、來源、功效、化學(xué)成分分析、鑒別方法、質(zhì)量控制方法等方面進(jìn)行綜述。

1 角類藥材種類

2010 年版《中國藥典》共收錄角類藥材6種，約占動(dòng)物藥總數(shù)的12%[3-4]。而目前臨床常用的角類藥材有水牛角(水牛角粉)、牦牛角、犀角(現(xiàn)已禁用，用水牛角替代)、羚羊角(羚羊角粉)、黃羊角、山羊角、鹿角、鹿茸、鹿角膠、鹿角霜等，其來源和功效各有異同，見表1。

表1 角類藥材基本概況

關(guān)于2010年《中國藥典》收載的角類藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中水牛角、羚羊角、鹿角、鹿茸的檢驗(yàn)項(xiàng)目只有兩個(gè)，即性狀和鑒別。鹿角霜的檢測項(xiàng)目有性狀和水分檢查。鹿角膠的檢測項(xiàng)目主要有：性狀、鑒別、水分、總灰分、重金屬、砷鹽、含量測定。其它一些角類藥材至今還沒有標(biāo)準(zhǔn)收載[5]。

2 角類藥材化學(xué)成分分析

角類藥材中化學(xué)成分多為變性的角蛋白，目前國內(nèi)外對(duì)角類動(dòng)物藥的研究較少并且大多局限于對(duì)微量元素和氨基酸的測定分析, 如朱偉偉等[5]對(duì)犀牛角氨基酸組成進(jìn)行分析，楊清林等[6]采用衍生化間接分析對(duì)四批山羊角提取物中氨基酸含量測定研究，周利兵[7]通過主成分分析、因子分析和聚類分析，對(duì)青海高原牦牛骨、牦牛角中微量元素進(jìn)行評(píng)價(jià),對(duì)青海牦牛骨、牦牛角品質(zhì)作出科學(xué)評(píng)價(jià)。丘明明[8]對(duì)鹿角(茸)、索有瑞等[9]對(duì)牦牛內(nèi)氨基酸和無機(jī)微量元素亦進(jìn)行了分析報(bào)道。近期也有些關(guān)于角內(nèi)脂類成分的報(bào)道，李峰等[10]對(duì)鹿茸商品藥材中磷脂類成分進(jìn)行分析,以期達(dá)到鑒別藥材的目的。

3 角類藥材藥理作用

角類藥材具有活性強(qiáng)、療效好、不良反應(yīng)小、應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)。羚羊角與黃羊角、山羊角的藥理活性基本一致，它們的水溶性成分均有解熱、鎮(zhèn)痛和降壓的作用[11-14]。劉睿等[15]采用皮下酵母致熱法、光電管法、毛細(xì)管法評(píng)價(jià)了水牛角粉、熱提液和冷浸液的解熱、鎮(zhèn)靜、促凝血作用，證明水牛角粉、水牛角熱提液均具有明顯的解熱、鎮(zhèn)靜、促凝血作用, 冷浸液解熱作用較弱。石磊等[16]對(duì)6 種角類動(dòng)物藥( 牦牛角、水牛角、藏羚羊角、羚羊角、廣角、犀角) 超細(xì)粉鎮(zhèn)靜、催眠作用進(jìn)行考察，得出6 種角類動(dòng)物藥超細(xì)粉對(duì)小鼠有一定的鎮(zhèn)靜作用及協(xié)同戊巴比妥鈉催眠作用。有關(guān)鹿茸(角)的報(bào)道是比較多的，歸納起來藥理活性大致為以下幾點(diǎn)[17-19]：①增強(qiáng)機(jī)體免疫功能；②提高性功能；③抗氧化及抗衰老作用；④抗腫瘤作用；⑤保護(hù)心血管系統(tǒng)的作用；⑥促進(jìn)生長、修復(fù)骨折作用；⑦抗關(guān)節(jié)炎作用；⑧提高記憶力作用。

4 角類藥材鑒別方法

4.1 性狀和顯微鑒定法

宏觀性狀和微觀顯微技術(shù)結(jié)合鑒定角類藥材的方法是比較簡便的鑒別角類藥材的方法，早期沈圓[20]就用此方法對(duì)羚羊角類藥材宏觀及微觀進(jìn)行研究，并列出了檢索表、外觀形態(tài)簡圖和名稱圖示。徐蓮英等[21]也對(duì)藏羚羊角和羚羊角的氨基酸成分進(jìn)行分析。近期也有很多關(guān)于此類的報(bào)道，劉麗等[22]利用光學(xué)顯微鏡對(duì)6種鹿茸茸毛的顯微特征進(jìn)行了觀察與測量, 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 13.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)不同品種的鹿茸進(jìn)行比較鑒別。劉萌萌等[23]系統(tǒng)地對(duì)全枝羚羊角的角尖、角基、骨塞以及絲狀和粉末狀的角類藥材的髓腔軸長比、骨碎片等顯微結(jié)構(gòu)特征對(duì)比、鑒別。性狀、顯微鑒別方法雖然較簡單快速，但對(duì)于比較相近的動(dòng)物藥材，方法的專屬性仍受到很大的局限。

4.2 理化鑒定法

4.2.1 薄層層析法(TLC) 薄層層析法是除性狀、顯微鑒別外另一種較簡單、快捷的鑒別方法，至今在實(shí)驗(yàn)中也常使用。吳杲等[24]分別用石油醚和氯仿對(duì)羚羊角和羚羊角塞內(nèi)物質(zhì)進(jìn)行提取，石油醚提取時(shí)用的展開劑為苯∶石油醚∶甲醇(4∶5∶1)，氯仿提取時(shí)用的展開劑為苯∶氯仿∶甲醇(9∶2∶2)，顯色劑均為10%硫酸乙醇溶液，兩者的薄層分析斑點(diǎn)大小和數(shù)量存在明顯差異。何連峰等[25]以正丁醇-冰醋酸-水( 3∶1∶1)為展開劑, 以2% 茚三酮溶液為顯色劑, 對(duì)鹿茸片及其制劑進(jìn)行了真?zhèn)舞b別。馬新[26]采用TLC法以不同展開劑和不同顯色劑對(duì)羚羊角、山羊角、綿羊角、牛角及鹿角進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，此方法重現(xiàn)性好，能有效區(qū)分不同角類藥材。然而，也有一些角類藥材用薄層法是不容易鑒別出來的，畫紅順[27]以正丁醇- 醋酸- 水( 4∶2∶2) 為展開劑 茚三酮試液為顯色劑，結(jié)果兩者的斑點(diǎn)、位置以及顏色一致，無明顯差別。

4.2.2 高效液相色譜法(HPLC) 高效液相色譜法是使用最多、應(yīng)用最為廣泛的一種含量測定方法，具有靈敏度高、分析速度快、分離效果好等特點(diǎn)，在角類藥材的鑒別中也有一些報(bào)道。李曉蒙等[28]通過對(duì)5 批水牛角和羚羊角藥材中的氨基酸含量測定，得出羚羊角含較高的天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、酪氨酸,而水牛角則是丙氨酸、纈氨酸的含量較高, 此結(jié)果從色譜峰中可以明顯看出。

4.2.3 氣相色譜法(GC) 氣相色譜法是指用氣體作為流動(dòng)相的色譜法。根據(jù)所用固定相的不同可分為兩類：固定相是固體的，稱為氣固色譜法；固定相是液體的則稱為氣液色譜法。徐愛仁等[29-30]采用GC鑒別及聚類分析法對(duì)5種角類藥材(羚羊角、山羊角、水牛角、牦牛角、黃羊角)的脂類化學(xué)成分經(jīng)甲酯化，采用氣相色譜分離鑒定，歸一化法計(jì)算相對(duì)百分含量，并進(jìn)行聚類分析，得出5 種?？苿?dòng)物的角中脂類成分在種類及含量上有差異，可以通過比較5 種角氣相色譜中相對(duì)百分含量在5%以上的共有峰峰面積比值是否分別在1.09～1.34 間(8.9/11.8 比值)，2.09～3.21 間(8.9/12.3 比值)，1.71～2.40 間(11.8/12.3 比值)，來判斷是否為羚羊角。

4.2.4 光譜分析法 與以上色譜法比較，光譜法具有快速、準(zhǔn)確、無損等特點(diǎn)。傅里葉變換紅外光譜(FTIR)技術(shù)近年來較多地被應(yīng)用于角類藥材的研究中[31-32]?；贔TIR的基礎(chǔ)上，一種新的方法三級(jí)紅外光譜(傅立葉變換紅外光譜、二階導(dǎo)數(shù)譜和二維相關(guān)紅外光譜)也應(yīng)用于動(dòng)物藥角類藥材的鑒別[33-35]。在紅外圖譜中，每種角類都有它的宏觀指紋，然后通過二階導(dǎo)數(shù)光譜放大不同點(diǎn)并顯示它們潛在的特征吸收峰，最后在二維光譜中進(jìn)行分析，是通過對(duì)無機(jī)鹽Ca3(PO4)2和硫酸鹽的吸收峰位置(Ca3(PO4)2的吸收峰一般在604cm-1和561cm-1，硫酸鹽的吸收峰在637cm-1和615cm-1)、酰胺光譜帶I 和酰胺光譜帶 II的強(qiáng)度不同展開研究，即可得出每種角類具有它的特征吸收峰，進(jìn)而達(dá)到鑒別的效果，用這種方法不僅可以鑒別不同種類的角類藥材，對(duì)基源相近的角類藥材也有很好的鑒別效果。一些學(xué)者[36-37]也采用紫外光譜法對(duì)角類藥材分析研究，同樣也可以達(dá)到對(duì)角類藥材鑒別的目的。也有部分報(bào)道[38-39]關(guān)于X 射線衍射Fourier 譜鑒別，證明了通過應(yīng)用粉末X射線衍射Fourier指紋圖譜鑒定法也可以鑒別角類藥材。

4.2.5 凝膠電泳技術(shù) 由于角類藥材的主要成分是角蛋白，因此針對(duì)蛋白質(zhì)的凝膠電泳技術(shù)也多用于角類藥材的鑒別。趙華英等[40]采用此技術(shù)對(duì)貴重藥材羚羊角及其偽品的蛋白電泳鑒別，從其譜帶的條數(shù)、位置、深淺度看出它們有著明顯差異。在此基礎(chǔ)上，李峰等[41]采用連續(xù)解離系的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳法(SDS-PAGE)對(duì)羚羊角及偽品進(jìn)行了電泳圖譜的比較，結(jié)果表明各樣品間具有不同的蛋白質(zhì)成分，可用于羚羊角的鑒別。劉炎等[42]采用紫外分光光度法(UV)和十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)技術(shù)，對(duì)羚羊角及其類似品山羊角和黃羊角進(jìn)行水溶性蛋白質(zhì)含量和組分對(duì)比分析，得出蛋白組分可用于羚羊角的鑒定這一結(jié)論。此外，朱薇等[43]通過對(duì)黃牛角、水牛角、鹿茸犀角、廣角、羚羊角的PA G E 分析，確立了PA G E 技術(shù)對(duì)中藥材，特別是動(dòng)物類藥材進(jìn)行鑒定是完全可行的。但該方法靈敏度相對(duì)較低，特別是對(duì)于水牛角濃縮粉等經(jīng)過水煮提取濃縮加工過的藥材，靈敏度受到較大的干擾。

5 結(jié)語

綜上所述，可見關(guān)于中藥角類藥材的鑒定問題已經(jīng)引起人們高度重視并在角類藥材的研究分析和鑒定方面也取得了一定的成果。而目前藥典標(biāo)準(zhǔn)中收載的對(duì)角類藥材的檢測項(xiàng)目只有性狀和鑒別。由于角類藥材標(biāo)準(zhǔn)的可控性不強(qiáng)，缺乏專屬性好的定性與定量檢測指標(biāo)，致使含有角類藥材的成方制劑幾乎全都沒有定性與定量檢測項(xiàng)。這些懸而未決的疑難問題，嚴(yán)重制約了中國藥典標(biāo)準(zhǔn)的整體發(fā)展。以上討論的有些學(xué)者采取色譜法、光譜法、電泳技術(shù)等對(duì)角類藥材進(jìn)行研究分析和鑒別，雖然也可達(dá)到想要的結(jié)果，但方法都會(huì)存在某些缺陷。因此，如何建立一套準(zhǔn)確性好、靈敏度高、專屬性強(qiáng)的動(dòng)物角類藥材的質(zhì)量控制方法，是解決上述問題的關(guān)鍵。

蛋白質(zhì)酶切技術(shù)和液質(zhì)聯(lián)用多肽識(shí)別技術(shù)在生物技術(shù)領(lǐng)域已有較多研究和應(yīng)用。Cheng等[44]采用此技術(shù)成功地對(duì)阿膠、牛皮膠、豬皮膠、龜甲膠、鹿角進(jìn)行鑒別。選擇適當(dāng)?shù)牡鞍酌笇?duì)角類藥材中的角蛋白進(jìn)行酶解，得到酶解肽，進(jìn)而采用液質(zhì)聯(lián)用多肽識(shí)別技術(shù)，并結(jié)合數(shù)據(jù)處理軟件和分析判別模型，建立各類樣品的特征肽段和質(zhì)譜信息庫，借用蛋白質(zhì)及多肽序列研究的成果，從分子層次研究各角類藥材的主體組分性質(zhì)及具有專屬鑒別意義的特征成分，建立基于角蛋白序列差異的角類藥材真?zhèn)舞b別方法及基于特征肽段的定性、定量測定方法，此方法經(jīng)驗(yàn)證專屬性強(qiáng)并可以應(yīng)用于各角類藥材的來源鑒定及相關(guān)藥品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

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(責(zé)任編輯：宋勇剛)

Modern Research Progress of Traditional Chinese Medicine used Cornua

Zhang Qianqian1, Cheng Xianlong2, Lu Yiyun2, Zhou Jianli1, Wei Feng2*, Xiao Xinyue2, Ma Shuangcheng2

(1.Anhui University of Chinese Medicine,Hefei 230031，China;2.National Institutes for Food and Drug Control，Beijing 100050，China)

Objective:To provide the reference of further development and utilization for the cornua medicine material by summarizing the research progress of the current species, quality standars and records, chemical analysis, pharmacological effects, identification methods ect.Methods:Consult and review the related literatures. Results and Conclusion:The precious cornua medicine material is increasingly widely in use, fraud is severe because of the absent of specific identification methods. Therefore, to establish a good accuracy, high sensitivity, and strong specificity of quality control method for animal cornua medicine material is very necessary.

Cornua Medicinal Materials; Chemical Analysis; Pharmacological Effects

2014-04-18

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81274025)

張倩倩(1989-)，女，安徽中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴帉W(xué)。

魏鋒(1971-)，男，博士，中國食品藥品檢定研究院研究員，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量控制。E-mail：weifeng@nifdc.org.cn。

R282.74

A

1673-2197(2014)19-0060-04