高效液相色譜法測(cè)定腎石消膠囊中延胡索乙素含量

郭迎霞 ,何棟梁,宋靜莉,栗 娟

（1.河北省邯鄲市食品藥品檢驗(yàn)中心,河北 邯鄲 056001； 2.河北省大名縣人民醫(yī)院,河北 邯鄲 056900）

腎石消膠囊是邯鄲市中醫(yī)院的自制制劑,臨床應(yīng)用療效顯著,由延胡索、石葦、金錢(qián)草等九味中藥組方,具化石排石、利濕止痛的功效,主治泌尿系結(jié)石及泌尿系感染。此制劑現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)單,尚無(wú)定量?jī)?nèi)容。為此,參考文獻(xiàn)[1-3],建立了測(cè)定其主要成分延胡索乙素含量的高效液相色譜法。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高,為控制該制劑的質(zhì)量奠定了基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

島津 LC-2010AHT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；UV-VIS,Lcsolution型色譜工作站；AUW 120D型電子天平（日本島津公司,十萬(wàn)分之一）。延胡索乙素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)為 10726-201213,含量為 99.8%）；腎石消膠囊（邯鄲市中醫(yī)院,批號(hào)分別為 120101,120201,120301,120302,120303,120401,規(guī)格為每粒 0.5 g）；甲醇為色譜純,水為純化水,其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Shimadzu VP-ODS柱（250mm ×4.6mm,5μm,日本島津公司）；流動(dòng)相:0.1%磷酸（用三乙胺調(diào)節(jié)pH至6.0）-甲醇（40∶60）；流速:1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm；進(jìn)樣量:20 μL；理論板數(shù)按延胡索乙素峰計(jì)算不低于5000。

2.2 溶液制備

精密稱(chēng)取延胡索乙素對(duì)照品0.01044 g,置100 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,作為對(duì)照品貯備液；吸取對(duì)照品貯備液5 mL,置 50 mL容量瓶中,制成每1 mL含10.44μg的溶液,作為對(duì)照品溶液。精密稱(chēng)取本品1.5 g,置具塞錐形瓶中,精密加入濃氨-甲醇（1∶20）混合溶液 50 mL,稱(chēng)定質(zhì)量,冷浸 1 h后加熱回流1 h,放冷,再稱(chēng)定質(zhì)量,用濃氨-甲醇（1∶20）混合溶液補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液25 mL,蒸干,殘?jiān)蛹状既芙?轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得供試品溶液。按處方比例依據(jù)該制劑制備工藝制備不含延胡索的陰性樣品,依據(jù)供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn):分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各20μL,按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜在與延胡索乙素對(duì)照品主峰的相同保留時(shí)間處無(wú)色譜峰,見(jiàn)圖 1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品貯備液 2,4,5,8,10 mL,分別置50mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,分別取20μL進(jìn)樣,測(cè)定峰面積,以對(duì)照品進(jìn)樣量（X,μg）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程 Y=1.292×106X＋6.932×103,r=0.9997（n=5）。結(jié)果表明,延胡索乙素進(jìn)樣量在 0.0833～0.4168μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為10.44 μg/mL）20μL,重復(fù)進(jìn)樣 5次,計(jì)算延胡索乙素色譜峰面積。結(jié)果的 RSD為0.42%（n=5）,表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批（批號(hào)為120101）樣品5份,依法制備供試品溶液,按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果延胡索乙素平均含量為 69μg/g,RSD 為 0.33%（n=5）,表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一（批號(hào)為120101）供試品溶液,分別于0,2,4,8,12,24 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的 RSD 為 0.65% （n =6）,表明供試品溶液在室溫下放置24 h穩(wěn)定。

回收率試驗(yàn):取已知含量的同一批（批號(hào)為120101,含量為69μg/g）樣品共 6份,每份約 0.75 g,精密稱(chēng)定。精密吸取對(duì)照品貯備液5 mL,置500mL容量瓶中,加濃氨-甲醇（1∶20）混合溶液溶解,并稀釋至刻度,配制成質(zhì)量濃度為 1.044μg/mL的溶液。每份樣品精密加入50 mL此溶液,依法制備供試品溶液,進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 延胡索乙素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定4 次。結(jié)果 6 批樣品中延胡索乙素含量分別為 69,54,71,68,72,52μg/g,其 RSD 分別為 0.24%,0.18%,0.11%,0.32%,0.29%,0.40%。

3 討論

延胡索乙素為延胡索的主要成分,參照2010年版《中國(guó)藥典（一部）》延胡索項(xiàng)下的含量測(cè)定方法,采用高效液相色譜法對(duì)該制劑中延胡索乙素的含量進(jìn)行測(cè)定。

用紫外分光光度法對(duì)對(duì)照品溶液在200～400 nm波長(zhǎng)范圍掃描,延胡索乙素在281 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰。與文獻(xiàn)記載其最大吸收峰在280 nm波長(zhǎng)處相近[4],為使檢測(cè)波長(zhǎng)在使用時(shí)達(dá)到統(tǒng)一,而又不影響測(cè)定結(jié)果,且又便于記憶,故將測(cè)定波長(zhǎng)定為280nm波長(zhǎng)。

2010年版《中國(guó)藥典（一部）》延胡索含量測(cè)定項(xiàng)下規(guī)定,按干燥品計(jì)算,含延胡索乙素不得少于0.050%。本研究結(jié)果表明,該制劑中延胡索乙素的含量符合2010年版《中國(guó)藥典(一部)》的規(guī)定,且與原藥材含量基本一致。因此,確定的腎石消膠囊中延胡索乙素的含量測(cè)定方法結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好,可用于腎石消膠囊中延胡索乙素的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn):

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