以微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料為主要基質(zhì)的哈茨木霉FJAT—9040固體發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化

曾慶才等

摘 要 以微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬技術(shù)帶來的新興農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物——微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料為主要培養(yǎng)基質(zhì)，以產(chǎn)孢量為指標(biāo)，通過單因素，響應(yīng)面分析法優(yōu)化生防菌哈茨木霉FJAT-9040固體發(fā)酵的培養(yǎng)基。單因素結(jié)果表明：發(fā)酵培養(yǎng)基主成份微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料與麩皮的比例為9 ∶ 1；最適疏松值、無機(jī)碳源和無機(jī)氮源分別為麥粒40.00%、蔗糖3.00%和硫酸銨2.00%。響應(yīng)面分析結(jié)果表明，麥粒、蔗糖、硫酸銨對(duì)哈茨木霉產(chǎn)孢量存在顯著相關(guān)性（p<0.05）。通過求解回歸方程可得：當(dāng)微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料 ∶ 麩皮=9 ∶ 1、麥粒含量36.74%、蔗糖含量3.07%、硫酸銨含量1.75%時(shí)，孢子產(chǎn)量最高，可達(dá)2.98×109個(gè)/g，與實(shí)際值相近。

關(guān)鍵詞 哈茨木霉；固體發(fā)酵；培養(yǎng)基優(yōu)化

中圖分類號(hào) S763.15 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

Optimization of Solid-state Fermentation Culture Medium Consisted

of the Microbial Fermentation Bed for the Biocontrol

Strain of Trichoderma harzianum FJAT-9040

by Response Surface Methodology

ZENG Qingcai1，2， XIAO Rongfeng2， LIU Bo2 *， HU Guiping2， CHEN Yanping2

1 College of Biological Science and Technology， Fuzhou University， Fuzhou， Fujian 350108， China

2 Agricultural Bioresource Research Institute， Fujian Academy of Agricultural Sciences， Fuzhou， Fujian 350003， China

Abstract The optimization of solid-state fermentation culture medium for a biocontrol strain Trichoderma harzianum FJAT-9040 was studied using single factor analysis and response surface methodology（RSM）. The medium mainly contained pig litter， which was produced from microbial fermentation bed for raising pigs， and the sporulation yield was used as the indicator in all tests. The results of single factor tests showed that the ratio of pig litter and wheat bran， the content of wheat grain， carbon and nitrogen were 9 ∶ 1， 40.00% of wheat grain， 3.00% of sucrose， and 2.00% of ammonium sulfate， respectively. The results showed that wheat grain， sucrose and ammonium sulfate were significant for the spore of T. harzianum based on the response surface methodology analysis（p<0.05）. The optimal medium constitutes were as followed： 9 ∶ 1 of pig litter and wheat bran， wheat grain 36.74%， sucrose 3.07%， ammonium sulfate 1.75%， and the average yield of spore reached to 2.98×109 cfu/g， which was close to the actual fermentation.

Key words Trichoderma harzianum； Solid-state fermentation； Medium optimization

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2014.04.026

木霉菌（Trichoderm. spp），廣泛分布于土壤中，其生命力強(qiáng)，適應(yīng)性廣，對(duì)許多植物病原真菌有拮抗作用[1]。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，已對(duì)18個(gè)屬29種植物病原真菌具有拮抗作用[2]。因此，木霉菌作為一類具有重要生防價(jià)值的生防菌而倍受關(guān)注[3]。目前已有大量這類木霉菌的報(bào)道，如哈茨木霉（T. harzianum）、綠色木霉（T. viride）、鉤狀木霉（T. hamatum）、康寧木霉（T. koninngii）等[4]。其中哈茨木霉的研究與應(yīng)用報(bào)道居多，李良等[5]利用哈茨木霉進(jìn)行茉莉白絹病的防治，防治效果顯著，可達(dá)90%以上。李瓊芳等[6]將哈茨木霉T23、T158的孢子菌劑用于麥冬等根腐病的防治，防治效果較好，且優(yōu)于化學(xué)農(nóng)藥多菌靈粉。其它研究結(jié)果表明，其對(duì)黃瓜枯萎病[Erwinia amylovora var.tracheiphila（Smith）Dye]、小麥紋枯?。≧hizotonia cerealis van der Hoeven apud. Boerema & Verhoeven）、番茄灰霉?。˙otrytis cinerea）等病原真菌也有抑制作用[7-9]；對(duì)黃瓜、花生和茄子等多種作物有促進(jìn)生長(zhǎng)作用[10-12]；可誘導(dǎo)水稻產(chǎn)生抗病性[13]等。目前已有商品化的生防菌劑，如美國(guó)的哈茨木霉T-22，Topshield和以色列的哈茨木霉T-39，Trichodex等[14]。

在防治和生產(chǎn)中，木霉菌防治效果與其發(fā)酵生產(chǎn)關(guān)系緊密。目前，木霉的防治多采用孢子菌劑，雖然不少學(xué)者對(duì)其代謝產(chǎn)物在生防作用上進(jìn)行了研究[15-17]，但由于代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)復(fù)雜，樣品處理難度大，生產(chǎn)成本高，最終限制其在工業(yè)上的應(yīng)用。在生產(chǎn)實(shí)踐中通過發(fā)酵方式（液體發(fā)酵或固體發(fā)酵）可以提高孢子數(shù)量。但是液體發(fā)酵所需設(shè)備相對(duì)復(fù)雜，且存在發(fā)酵產(chǎn)物濃度不高，生產(chǎn)成本高等問題[18]，而固體發(fā)酵具有培養(yǎng)基來源豐富，價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)單，孢子質(zhì)量好等一系列優(yōu)勢(shì)，被公認(rèn)為是獲得真菌孢子的最好方法之一[19]。固體發(fā)酵的培養(yǎng)基可以是稻草、麩皮、秸桿等農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物。近年來興起的微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬技術(shù)帶來了新的農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物——微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料，其含有豐富的養(yǎng)料，它是通過微生物將谷殼，鋸末等發(fā)酵床原料及豬糞、尿等混合物中的有機(jī)物質(zhì)進(jìn)行分解發(fā)酵而成[20]。若將其作為固體發(fā)酵的培養(yǎng)基，能為菌株提供豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，不但可以獲得大量的生防因子，還可以處理一些農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物，提高資源的利用價(jià)值，實(shí)現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展。微生物發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化方法很多，如單因素實(shí)驗(yàn)法、正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)法、響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)法等[21]，其中響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)以試驗(yàn)次數(shù)少，周期短等優(yōu)勢(shì)受到廣泛應(yīng)用[22]。響應(yīng)面分析法是通過合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，獲得一定數(shù)據(jù)來擬合一個(gè)響應(yīng)面，從而摸擬出真實(shí)的極限條件下的曲面，并進(jìn)行可靠性地分析[23]。響應(yīng)面分析法可以對(duì)一次項(xiàng)、二次項(xiàng)及其交互項(xiàng)對(duì)響應(yīng)值的影響進(jìn)行分析，通過之間的關(guān)系在響應(yīng)面上獲得最佳點(diǎn)，在試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)分析上具有更多優(yōu)勢(shì)[23]。本研究以微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料作為哈茨木霉FJAT-9040固體發(fā)酵的主要培養(yǎng)基原料，通過單因素實(shí)驗(yàn)與響應(yīng)面法優(yōu)化該菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方，篩選出最適產(chǎn)孢的培養(yǎng)基配方，旨在進(jìn)一步提高產(chǎn)孢量和農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物的利用率，為哈茨木霉的生物菌肥和制劑的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌種 哈茨木霉FJAT-9040，福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物資源所微生物菌種保存中心保存。在PD培養(yǎng)基中，28 ℃，170 r/min，培養(yǎng)4 d，無菌濾網(wǎng)過濾除去菌絲，制成孢子液，并稀釋至1.00×107個(gè)/mL，備用。

1.1.2 培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，蒸餾水1 L，瓊脂17～20 g，pH自然。PD為不加瓊脂液體培養(yǎng)基。馬鈴薯購(gòu)于福建永輝超市；葡萄糖來源于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；瓊脂購(gòu)于北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

固體發(fā)酵培養(yǎng)基：微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬副產(chǎn)物——發(fā)酵一年微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料（主要成分為谷殼，鋸末）、麩皮、麥粒、碳源、氮源、自來水等按適合比例混合。微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料來源于廈門某部隊(duì)后勤豬場(chǎng)；麩皮、麥粒來源于福州倉(cāng)山；硝酸鈉來源于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；蔗糖、乳糖、硫酸銨來源于天津市福晨化學(xué)試劑廠；硝酸銨來源于上海品杰化學(xué)試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 單因素優(yōu)化設(shè)計(jì) 以產(chǎn)孢量為指標(biāo)，采用單因子法篩選菌株固體發(fā)酵培養(yǎng)基的主要成份配比、麥粒、碳源和氮源，確定最適因子。

（1）固體發(fā)酵培養(yǎng)基主要成份微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料與麩皮配比的篩選。主要成份微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料與麩皮按體積比為10 ∶ 0，9 ∶ 1，8 ∶ 2，7 ∶ 3，

6 ∶ 4，5 ∶ 5，0 ∶ 10等配制7種培養(yǎng)基，每處理重復(fù)3次。每200.00 mL培養(yǎng)瓶中裝入50.00 mL培養(yǎng)基，初始含水量40.00%，滅菌后，接入哈茨木霉FJAT-9040孢子液，28 ℃恒溫發(fā)酵5 d。取5.00 g固體發(fā)酵物于45.00 mL無菌水中，攪拌均勻，稀釋至適當(dāng)倍數(shù)，吸取100 μL，均勻涂布于含300 μg/mL鏈霉素的PDA平板上，28 ℃恒溫培養(yǎng)2 d，記錄平板上萌發(fā)的孢子數(shù)。每克孢子數(shù)=同一稀釋度平均孢子數(shù)×10×稀釋倍數(shù)/5。篩選出最佳的主要成份配方比例。

（2）培養(yǎng)基中麥粒含量對(duì)哈茨木霉FJAT-9040產(chǎn)孢量的影響。往（1）中篩選出的培養(yǎng)基中添加浸泡過夜的麥粒，按體積比為10.00%、20.00%、30.00%、40.00%、50.00%進(jìn)行添加，每處理重復(fù)3次。以下處理方法同（1）。篩選出最佳的疏松值（麥粒）含量。

（3）培養(yǎng)基中無機(jī)碳源對(duì)哈茨木霉FJAT-9040產(chǎn)孢量的影響。往（1）中篩選出的培養(yǎng)基中分別添加葡萄糖、蔗糖、乳糖，每處理重復(fù)3次。以下處理方法同（1）。篩選出最佳的無機(jī)碳源及最適濃度。

（4）培養(yǎng)基中無機(jī)氮源對(duì)哈茨木霉FJAT-9040產(chǎn)孢量的影響。往（1）中篩選出的培養(yǎng)基中添加硫酸銨、硝酸銨、硝酸鈉，每處理重復(fù)3次。以下處理方法同（1）。篩選出最佳的無機(jī)氮源及最適濃度。

1.2.2 響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì) 在單因素篩選實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)Box-Benhnken設(shè)計(jì)原理，采用軟件Design-expert 8.0進(jìn)行3因素3水平的響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)，以孢子數(shù)為響應(yīng)量，確定各因素對(duì)菌株產(chǎn)孢量影響的顯著性和各組分的最佳組合。以響應(yīng)因子Y為產(chǎn)孢量，麥粒（x1）、蔗糖（x2）和硫酸銨（x3）為3因素，因素3水平分別為：-1、0和1。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)具體見表1。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 數(shù)據(jù)分析通過EXCEL處理，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析通過DPS軟件處理，響應(yīng)面分析法利用Design-expert 8.0軟件采用Box-Benhnken設(shè)計(jì)方法，對(duì)培養(yǎng)基成分進(jìn)行3因素3水平優(yōu)化。根據(jù)響應(yīng)面預(yù)測(cè)的最佳培養(yǎng)基配方，按照1.2.1中（1）的方法操作，測(cè)定菌株的產(chǎn)孢量，以驗(yàn)證響應(yīng)面預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)基的單因子優(yōu)化

2.1.1 固體發(fā)酵培養(yǎng)基主要成份微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料與麩皮配比的篩選 不同配比的微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料與麩皮對(duì)菌株產(chǎn)孢量的影響見圖1。圖1表明：菌株接種到不同比例的墊料與麩皮中，其產(chǎn)孢量差異很大，在全墊料培養(yǎng)基中的孢子數(shù)含量為1.80×106個(gè)/g；而在全麩皮培養(yǎng)基中的孢子含量?jī)H為3.00×105個(gè)/g，數(shù)量最少。當(dāng)墊料 ∶ 麩皮=9 ∶ 1時(shí)，產(chǎn)孢量最大，達(dá)到4.60×106個(gè)/g；當(dāng)墊料 ∶ 麩皮=8 ∶ 2時(shí)，產(chǎn)孢量次之，達(dá)4.20×106個(gè)/g。當(dāng)墊料 ∶ 麩皮=9 ∶ 1或8 ∶ 2時(shí)，發(fā)酵效果較好，且9 ∶ 1時(shí)產(chǎn)孢量最高。因此，選擇該比例為菌株固體發(fā)酵培養(yǎng)基主要成份的最佳配比。

2.1.2 培養(yǎng)基中麥粒含量對(duì)哈茨木霉FJAT-9040產(chǎn)孢量的影響 菌株在不同麥粒含量的培養(yǎng)基中產(chǎn)孢情況見圖2。從圖2可見，在一定體積范圍內(nèi)，隨著麥粒含量的增加，哈茨木霉產(chǎn)孢量升高。當(dāng)麥粒添加量在10.00%～30.00%時(shí)，菌株產(chǎn)孢量均在1.00×106個(gè)/g以上；當(dāng)添加40.00%體積的麥粒時(shí)，產(chǎn)孢量最大，達(dá)到2.33×107個(gè)/g，遠(yuǎn)高于對(duì)照組的產(chǎn)孢量，3.33×106個(gè)/g；當(dāng)添加50.00%體積的麥粒時(shí)，產(chǎn)孢量有所減少，為1.13×107個(gè)/g。

2.1.3 培養(yǎng)基中無機(jī)碳源對(duì)哈茨木霉FJAT-9040產(chǎn)孢量的影響 菌株在不同碳源下的產(chǎn)孢情況見圖3。由圖3可知，不同種類的無機(jī)碳源對(duì)產(chǎn)孢量有一定的影響。當(dāng)添加無機(jī)碳源為蔗糖時(shí)，產(chǎn)孢量最大，達(dá)到6.67×107個(gè)/g，其后依次為乳糖，葡萄糖。隨著蔗糖含量的增加，菌株的產(chǎn)孢量先增加后減少（圖4）。當(dāng)添加濃度為3.00%時(shí)，產(chǎn)孢量最大，達(dá)到3.37×108個(gè)/g。

2.1.4 培養(yǎng)基中無機(jī)氮源對(duì)哈茨木霉FJAT-9040產(chǎn)孢量的影響 菌株在不同氮源下的產(chǎn)孢情況見圖5。當(dāng)添加無機(jī)氮源為硫酸銨時(shí)，產(chǎn)孢能力最強(qiáng)，產(chǎn)孢量最大，達(dá)到1.47×109個(gè)/g。而硝酸銨和硝酸鈉對(duì)菌株的產(chǎn)孢并無明顯差異，其產(chǎn)孢量一致，均為1.00×109個(gè)/g。在添加硫酸銨范圍內(nèi)，隨著添加量的增加，菌株產(chǎn)孢量先增加后下降（圖6）。當(dāng)添加1.00%或2.00%時(shí)，發(fā)酵效果較好，且2.00%時(shí)，產(chǎn)孢量最高。

2.2 固體培養(yǎng)基重要營(yíng)養(yǎng)成分含量響應(yīng)面優(yōu)化

2.2.1 響應(yīng)面法優(yōu)化實(shí)驗(yàn) 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料為基礎(chǔ)，麥粒含量為30.00%～50.00%（V/V），蔗糖濃度為2.00%～4.00%，硫酸銨濃度為1.00%～3.00%，進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，結(jié)果見表2。

2.2.2 二次響應(yīng)面回歸模型的建立及方差分析

經(jīng)優(yōu)化后培養(yǎng)基組成為麥粒含量36.74%，蔗糖含量3.07%，硫酸銨含量1.75%，在發(fā)酵溫度28 ℃，接種量5%，含水量40%的條件下發(fā)酵5 d，孢子產(chǎn)量可達(dá)2.80×109個(gè)/g。陳欣等[33]通過中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)得到盾殼霉（Coniothyrium minitans）產(chǎn)孢的最優(yōu)培養(yǎng)基組合，且在此組合下每克麩皮產(chǎn)孢量可達(dá)1.04×1010個(gè)/g。本研究組合以微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料為主，為微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料的運(yùn)用提供了一條新出路，避免了隨意丟棄造成的環(huán)境污染及資源浪費(fèi)，實(shí)現(xiàn)資源地循環(huán)利用，同時(shí)該組合實(shí)驗(yàn)效果與孫斐[24]、劉時(shí)輪[27]、王永東[29]等人的研究結(jié)果相近，說明該組合可為含哈茨木霉的生物肥料和生物制劑生產(chǎn)提供理論指導(dǎo)。

參考文獻(xiàn)

[1] 張愛萍. 木霉生防作用研究進(jìn)展[J]. 綠色植保， 2009（3）： 36.

[2] 陳 捷， 朱潔偉， 張 婷， 等. 木霉菌生物防治作用機(jī)理與應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)， 2011， 27（2）： 145-151.

[3] 莊敬華， 陳 捷， 楊長(zhǎng)成， 等. 生防木霉菌生物安全性評(píng)價(jià)[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2006， 39（4）： 715-720.

[4] 彭可為， 李 嬋. 木霉菌的生物防治研究進(jìn)展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2010， 38（2）： 780-782.

[5] 李 良， 申功進(jìn)， 邵志和. 哈茨木霉對(duì)茉莉白絹病的生物防治的研究[J]. 浙江農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 1983， 9（3）： 221-225.

[6] 李瓊芳， 曾華蘭， 葉鵬盛， 等. 哈茨木霉（Trichoderma harzianum）T23生防菌篩選及防治中藥材根腐病的研究[J]. 西南大學(xué)學(xué)報(bào)： 自然科學(xué)版， 2007， 29（11）： 119-122.

[7] Bhuyan S A. Antagonistic effective of Trichoderma viride， T. Harzianum and Asperigillus terreus on Rhizoctonia solani causing sheath blight of rice[J]. Journal of the Agricultural Science Society of North East India， 1994， 7（1）： 125-127.

[8] 劉愛榮， 陳雙臣， 陳 凱， 等. 哈茨木霉對(duì)黃瓜尖孢鐮刀菌的抑制作用和抗性相關(guān)基因表達(dá)[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào)， 2010， 37（3）： 249-254.

[9] 管懷驥， 陳 莉. 哈茨木霉TH-1菌株對(duì)小麥紋枯病的控制效果研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2011， 39（16）： 9 664-9 665.

[10] 姚 彬， 王傲雪， 李景富. 哈茨木霉對(duì)4種番茄病原真菌抑制作用的研究[J]. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2009， 40（5）： 26-31.

[11] 楊春林， 席亞東， 劉波微， 等. 哈茨木霉T-h-30對(duì)幾種蔬菜的促生作用及病害防治初探[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2008， 21（6）： 1 603-1 607.

[12] 王獻(xiàn)慧， 梁懷志， 魏 林. 哈茨木霉T2-16菌劑不同使用方法對(duì)花生防病促生長(zhǎng)效果的研究[J]. 花生學(xué)報(bào)， 2012， 41（2）： 24-27.

[13] 胡 潔， 秦克偉， 蔡 楓， 等. 哈茨木霉SQR-T037對(duì)茄子幼苗促生效應(yīng)的研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2012， 40（32）： 15 671-15 673， 15 694.

[14] 李 杰， 王景勝， 肖連冬， 等. 綠色木霉-M1固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶條件研究[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技， 2011， 12： 49-51.

[15] 王紅梅， 蔣立科， 陶 芳， 等. 哈茨木霉高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶菌株的篩選及產(chǎn)酶條件研究[J]. 浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版）， 2010， 36（2）： 146-152.

[16] 郭培磊， 劉 限， 高增貴， 等. 木霉菌胞外酶及對(duì)番茄灰霉病菌作用的研究[J]. 北方園藝， 2009（8）： 126-128.

[17] Nzojiyobiri jean Berchmans， 徐 同， 宋鳳鳴， 等. 哈茨木霉NF9菌株對(duì)水稻的誘導(dǎo)抗病性[J]. 中國(guó)生物防治， 2003， 19（3）： 111-114.

[18] 葛 龍， 趙 艷， 章亭洲. 固態(tài)發(fā)酵技術(shù)的特點(diǎn)與應(yīng)用[J]. 飼料與畜牧， 2010（8）： 54-56.

[19] 敖新宇， 程立君， 陳玉惠. 生防木霉SS003菌株（Trichoderma atroviride）的固體發(fā)酵工藝研究[J]. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2012， 34（6）： 1256-1261.

[20] 藍(lán)江林， 劉 波， 陳 崢， 等. 微生物發(fā)酵床豬舍環(huán)境氣味電子鼻判別模型的研究[J]. 福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2012， 27（1）： 77-86.

[21] 肖懷秋， 李玉珍. 微生物培養(yǎng)基優(yōu)化方法研究進(jìn)展[J]. 釀酒科技， 2010（1）： 90-94.

[22] 郝學(xué)財(cái)， 余曉斌， 劉志鈺， 等. 響應(yīng)面方法在優(yōu)化微生物培養(yǎng)基中的應(yīng)用[J]. 食品研究與開發(fā)， 2006， 127（1）： 38-40.

[23] 張秀霞， 吳佳東， 滕 芝， 等. 響應(yīng)面法優(yōu)化固定化微生物降解石油污染物[J]. 石油學(xué)報(bào)， 2012， 28（5）： 877-882.

[24] 孫 斐， 陳靠山， 張鵬英， 等. 固態(tài)發(fā)酵麩皮和玉米芯生產(chǎn)擬康氏木霉孢子的研究[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)， 2010， 26（6）： 236-239.

[25] 夏斯琴， 王 偉. 綠色木霉T4的固體發(fā)酵工藝及其制劑穩(wěn)定性的研究[J]. 化學(xué)與生物工程， 2008， 25（12）： 52-56.

[26] 劉時(shí)輪， 李 勇， 傅俊范， 等. 綠色木霉菌株Tv04-2固體發(fā)酵條件研究[J]. 華北農(nóng)學(xué)報(bào)， 2008， 23： 244-247.

[27] 趙永強(qiáng). 木霉菌對(duì)大豆根腐病菌的生防機(jī)制及其制劑的初步研究[D]. 大慶： 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)， 2010.

[28] 茹水江. 木霉顆粒劑ST-6的研制及其應(yīng)用研究[D]. 杭州： 浙江大學(xué)， 2010.

[29] 王永東， 蔣立科， 岳永德， 等. 生防菌株哈茨木霉H-13固體發(fā)酵條件的研究[J]. 浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版）， 2006， 32（6）： 645- 650.

[30] Ambat P， Ayyanna C. Optimizing medium constituents and fermentation conditions for citric acid production from palmyra jaggery using response surface methods[J]. Journal of Microbiology & Biotechnology， 2001， 17： 331-335.

[31] Ratnam B V V， Naras imha Rao M， Dmodar Rao M， et al. Optimization of fermentation conditions for the production of ethanol from sago starch using response surface methodology[J]. Journal of Microbiology & Biotechnology， 2003， 19： 523-526.

[32] Trupkin S， Levin S， Forchiassin F， et al. Optimization of a culture medium for ligninolytic enzyme production and synthetic dye decolorization using response surface methodology[J]. Journal of Industrial Microbiology Biotechnology， 2003， 30： 682-690.

[33] 陳 欣， 李 寅， 堵國(guó)成， 等. 應(yīng)用響應(yīng)面方法優(yōu)化Coniothyrium minitans固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)生物農(nóng)藥[J]. 工業(yè)微生物， 2004， 34（1）： 26-29.