幾種植物組織石蠟制片技術的探討

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摘要 [目的] 近年來植物切片技術出現(xiàn)多種方法，無論是在方法還是步驟的改進，都是以省工省時、節(jié)約藥劑或減少環(huán)境污染以及安全為目的。 [方法]以常用的幾種植物制片技術為理論依據，對這些方法及各步驟加以討論，了解各種方法的利弊。[結果]使用蛋白甘油和鉻釩明膠2種粘片劑，結果表明后者的效果較好。[結論]這為以往植物制片時脫片問題提供一個可靠的方法。

關鍵詞植物組織；石蠟制片；技術

中圖分類號S189文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）28-09677-01

Discussion on Several Plant Tissue Paraffin Section Technology

CHEN Haikui

（School of Life Science， Beifang Univesity of Nationalities， Yinchuan， Ningxia 750021）

Abstract[Objective] In recent years， there were a variety of plant slicing methods. At the aspects of the improvement in the methods or the steps， the purpose was laborsaving and timesaving， conservation agents and reduction of environmental pollution and security. [Method] Several plant production technologies were used as the theoretical basis. These methods and steps were discussed， and the advantages and disadvantages of various methods were clarified. [Result] Two clay tablets of protein glycerol and chrome vanadium gelatin were used. Results showed that the latter was better. [Conclusion] The research provided a reliable method for the past plant producers off problem.

Key wordsPlant tissue； Paraffin section； Technology

隨著生命科學的不斷發(fā)展，組織制片成為生物學各個領域研究中必不可少的材料處理方法和前提，尤其是細胞組織化學、免疫細胞組織化學、細胞酶化學等學科的研究。制片的好壞直接影響試驗的成敗和結果的真實性。以植物石蠟切片為例，近年來報道主要有植物組織多重整體染色、未脫蠟植物組織染色和植物組織混合染液染色法等。不論是哪種方法，多是以傳統(tǒng)的石蠟制片方法為基礎，同時達到高效、成本低、污染少和安全的目的。以上述3種方法為依據，筆者采用番紅-固綠雙重染色對3種方法的染色效果加以論述。

1材料與方法

1.1材料

供試材料有寧夏枸杞（Lycium barbarum L.）幼莖和葉、橡皮樹（Ficus elastica）葉片、榆（Ulmus pumila）莖、核桃（Jugians regia L.）幼莖、紅葉李（Prunus cerasifera）幼莖、垂柳（Salix babylonica）莖。將材料莖切成5 mm以下適當長度的小段，將葉片切成1 cm2小片，并且投入FAA固定液中固定24 h，備用。

1.2方法

1.2.1

多重整體染色法[1]。濃度70%酒精浸泡2 h；濃度50%酒精浸泡2 h；濃度1%番紅（濃度50%酒精配置）40 ℃下染48 h，達到過染；濃度70%、80%酒精脫水0.5～1.0 h；濃度1%固綠（濃度90%酒精配置）染色1～4 h（葉片時間在0.5 h以下）；切下一薄片鏡檢；濃度95%酒精脫水、分色1.0 h（葉片時間0.5 h以下）；濃度100%酒精脫水2次，每次2 h（葉片時間1 h以下）；2次二甲苯透明，每次1～2 h（葉片時間1 h以下）；切片、展片及粘片；脫蠟與封片。

1.2.2

未脫蠟組織切片染色法[2]。常規(guī)制片，切片厚度8 μm，水面展片后粘片，在56～58 ℃溫箱烤片12～24 h；將未脫蠟切片放入濃度1%番紅（濃度70%酒精配置）中，38 ℃溫箱內染1 h以上；將切片取出后，以濃度70%酒精稍洗，除去多余染液，晾干后放入濃度1%固綠（濃度95%酒精配置）中，室溫染色10～20 min ，葉片等幼嫩組織時間稍短；最后，切片以濃度95%酒精沖洗，除去浮色，烘干后直接用二甲苯脫蠟封片即可。

1.2.3

混合染液染色方法[3]。

1.2.3.1

番紅-固綠混合染液的配制。濃度1%番紅（濃度70%酒精配置）、濃度0.25%固綠（濃度95%酒精配置）兩者以1∶1比例混合均勻，儲瓶備用。

1.2.3.2

石蠟切片常規(guī)方法復水至濃度80%酒精中1～2 min，移入混合染液中，染色1～2 h后再放入濃度95%、100%酒精中脫水、分色，每級5 min，最后透明封片。

2 結果與分析

使用以上3種方法制作植物石蠟切片，取得理想的結果。木質化細胞壁染成紅色，纖維素細胞壁和細胞質染成綠色；葉片中海綿細胞、柵欄細胞及纖維素細胞壁染成綠色，葉脈中木質化細胞壁染成紅色。由表1可知，雖然3種方法都取得相似的效果，但是所用時間、染色用量、適用材料條件及步驟的復雜程度等不同。