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    正常早孕與稽留流產(chǎn)絨毛組織結(jié)構(gòu)中Bax和Bcl—2蛋白表達(dá)的對比研究

    2014-04-26 15:50:46楊興爽
    中國實用醫(yī)藥 2014年7期
    關(guān)鍵詞:合體蛻膜絨毛

    楊興爽

    【摘要】 目的 研究凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2和Bax在正常早孕與稽留流產(chǎn)絨毛組織結(jié)構(gòu)中的表達(dá)及其意義, 探討稽留流產(chǎn)原因。方法 選擇本院就診的稽留流產(chǎn)患者和早孕人工流產(chǎn)患者各60例, 分為A組、B組。流產(chǎn)后立即留取胚胎絨毛組織送病理。分別應(yīng)用光鏡觀察各組絨毛組織細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變;同時應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法和計算機(jī)圖文分析系統(tǒng)檢測Bax、Bcl-2在各組絨毛的表達(dá)及細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果 稽留流產(chǎn)組絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞中凋亡指數(shù)為(33.32±0.79)%, 明顯高于對照組B組的(18.90±0.63)%, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。Bax和Bcl-2在兩組合體滋養(yǎng)細(xì)胞中的陽性率比較顯示, 稽留流產(chǎn)組中Bax陽性率增高, Bcl-2陽性率下降, Bcl-2/Bax比值降低, 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論 蛻膜絨毛中Bax陽性率增高和Bcl-2陽性率下降可使絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡明顯增加, 并進(jìn)一步導(dǎo)致稽留流產(chǎn)發(fā)生。

    【關(guān)鍵詞】 Bax蛋白;Bcl-2蛋白;胎盤絨毛;稽留流產(chǎn);免疫組織化學(xué)

    稽留流產(chǎn)又稱過期流產(chǎn), 是由于早期妊娠失敗導(dǎo)致孕卵死亡的一種常見疾病, 發(fā)病率高。目前認(rèn)為可能的病因有:胚胎染色體異常、母體嚴(yán)重感染、生殖器官異常、內(nèi)分泌異常、免疫功能異常、不良環(huán)境因素等。其確定的機(jī)制仍然不清。由于病因尚不明確, 無有效的對癥預(yù)防治療方法, 給很多患者帶來了很大的痛苦, 也給臨床醫(yī)師帶來了很大的困惑。細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)、B型白細(xì)胞/2型淋巴細(xì)胞樣蛋白( Bcl-2) 是與細(xì)胞凋亡有關(guān)的基因,也是目前最受重視的調(diào)控細(xì)胞凋亡的基因家族。目前國內(nèi)外對其在很多組織中的表達(dá)有所研究, 但對稽留流產(chǎn)絨毛組織中的表達(dá)目前國內(nèi)尚未見報道。對正常早孕與稽留流產(chǎn)絨毛組織結(jié)構(gòu)中Bax、Bcl-2的表達(dá)進(jìn)行對比研究, 探討兩者之間的異同點及Bax/Bcl-2的平衡對維持正常妊娠的作用, 研究稽留流產(chǎn)絨毛組織結(jié)構(gòu)中Bax、Bcl-2的表達(dá)是否異常, 了解是否其表達(dá)異常是稽留流產(chǎn)原因之一, 可以幫助尋找稽留流產(chǎn)病因, 為最終找到預(yù)防稽留流產(chǎn)的突破口奠定基礎(chǔ)。

    1 資料與方法

    1. 1 一般資料 選擇本院就診的稽留流產(chǎn)患者和早孕人工流產(chǎn)患者各60例, 分為A組(稽留流產(chǎn)組)和對照組B組(人工流產(chǎn)組)。A組年齡24~36歲, 平均(27.31±3.58)歲, 妊娠時間(56±5) d;B組年齡21~37歲, 平均(27.43±3.83)歲, 妊娠時間(55±4) d;其年齡、妊娠時間、孕產(chǎn)次數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。均未放置宮內(nèi)節(jié)育器, 流產(chǎn)前均未應(yīng)用任何藥物, 無發(fā)熱、急性炎癥等表現(xiàn)。均經(jīng)B超確診宮內(nèi)正常早孕或稽留流產(chǎn)。

    1. 2 方法

    1. 2. 1 標(biāo)本采集 流產(chǎn)后立即留取肉眼可見的胚胎絨毛組織, 中性福爾馬林固定、制成病理切片。分別應(yīng)用光鏡觀察各組絨毛組織細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變;同時應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法和計算機(jī)圖文分析系統(tǒng)檢測Bax、Bcl-2在各組絨毛的表達(dá)及細(xì)胞凋亡情況。

    1. 2. 2 方法 4 μm厚病理切片連續(xù)切片3張。一張用光鏡觀察各組絨毛組織細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變, 兩張行免疫組化染色。采用SP法, 微波爐枸椽酸鹽抗原修復(fù), DAB顯色。每批染色均設(shè)陽性和陰性對照, 嚴(yán)格按試劑盒推薦方法染色。每張切片觀察5個視野, 計算出每100個滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡率。

    1. 2. 3 結(jié)果判定 Bcl-2和Bax陽性反應(yīng)均為胞漿、胞膜著棕黃色顆粒。細(xì)胞無黃色顆粒為陰性(-), 陽性細(xì)胞數(shù)在5%~25%為弱陽性(+),陽性細(xì)胞數(shù)在25%~50%之間為陽性(++), 陽性細(xì)胞數(shù)在50%~75%之間為陽性(+++), >75%為強(qiáng)陽性(++++)。

    1. 2. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 運用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s) 表示。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2. 1 光鏡結(jié)果 自然流產(chǎn)組絨毛組織結(jié)構(gòu)清晰, 外層為合體滋養(yǎng)細(xì)胞, 內(nèi)層為細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞, 排列緊密, 稽留流產(chǎn)組中的絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞變性、壞死, 甚至脫落, 間質(zhì)擴(kuò)張水腫, 細(xì)胞分散, 血管擴(kuò)張, 并可見炎性細(xì)胞浸潤。兩組滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡指數(shù)比較,稽留流產(chǎn)組絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞中凋亡指數(shù)與對照組比較顯著增加, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01), 結(jié)果見表1。

    2. 2 免疫組化結(jié)果 Bax在蛻膜絨毛中的陽性表達(dá)主要位于合體滋養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的胞漿中, Bcl-2主要分布于絨毛合體滋養(yǎng)層的胞質(zhì)內(nèi)。兩組滋養(yǎng)細(xì)胞Bcl-2、Bax陽性率及Bcl-2/Bax比值比較, 稽留流產(chǎn)組合體滋養(yǎng)細(xì)胞中Bcl-2陽性率較對照組低, 而Bax陽性率較對照組高, Bcl-2/Bax比值降低, 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01), 結(jié)果見表2。

    3 討論

    胎盤是維持胚胎及胎兒在子宮內(nèi)營養(yǎng)發(fā)育的重要器官。胎盤通過蛻膜細(xì)胞和滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖與凋亡, 不斷進(jìn)行組織結(jié)構(gòu)的改善, 進(jìn)而實現(xiàn)其功能的完善。胚泡植入、胎盤發(fā)育早期打破凋亡的調(diào)節(jié)可能直接或間接地影響妊娠的成敗[1]。賀子秋等[2]向鼠腹膜內(nèi)注射人重組白介素-2致妊娠鼠流產(chǎn), 發(fā)現(xiàn)其絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞中凋亡較正常妊娠鼠高。正常妊娠胎盤組織的凋亡和增殖處于一種平衡狀態(tài), 這種平衡一旦被打破, 發(fā)生異常凋亡, 將導(dǎo)致自然流產(chǎn)等病理妊娠的發(fā)生[3]。

    稽留流產(chǎn)是妊娠早期最常見的并發(fā)癥之一, 病因復(fù)雜。具體在哪個環(huán)節(jié)導(dǎo)致了胚胎停止發(fā)育尚不清楚。作者通過光鏡觀察研究發(fā)現(xiàn), 自然流產(chǎn)組, 也就是正常妊娠絨毛組織結(jié)構(gòu)清晰, 外層為合體滋養(yǎng)細(xì)胞, 內(nèi)層為細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞, 排列緊密, 而稽留流產(chǎn)組, 也就是胚胎停發(fā)后的絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞變性、壞死, 甚至脫落, 間質(zhì)擴(kuò)張水腫, 細(xì)胞分散, 血管擴(kuò)張, 并可見炎性細(xì)胞浸潤。說明胎盤絨毛組織的變性壞死是導(dǎo)致胚胎死亡的主要原因。進(jìn)一步通過免疫組織化學(xué)方法和計算機(jī)圖文分析系統(tǒng)檢測Bax、Bcl-2在兩組絨毛中的表達(dá), 發(fā)現(xiàn)兩組滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡指數(shù)比較,稽留流產(chǎn)組絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞中凋亡指數(shù)與對照組比較顯著增加, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。Bax在蛻膜絨毛中的陽性表達(dá)主要位于合體滋養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的胞漿中, Bcl-2主要分布于絨毛合體滋養(yǎng)層的胞質(zhì)內(nèi)。兩組滋養(yǎng)細(xì)胞Bcl-2、Bax陽性率及Bcl-2/Bax比值比較, 稽留流產(chǎn)組合體滋養(yǎng)細(xì)胞中Bcl-2陽性率較對照組低, 而Bax陽性率較對照組高, Bcl-2/Bax比值降低, 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。endprint

    Bcl-2基因家族是目前廣泛研究的一類細(xì)胞凋亡相關(guān)基因, 其表達(dá)和調(diào)控是影響細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因素之一。通過上調(diào)抗凋亡的Bcl-2的基因表達(dá), 可以在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)以影響凋亡的發(fā)生。Bax是從人B細(xì)胞中首次發(fā)現(xiàn)與Bcl-2共沉淀的另一類蛋白質(zhì), 它可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡,作用與Bcl-2相反。通過觀察Bcl-2和Bax在稽留流產(chǎn)與正常妊娠絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá), 發(fā)現(xiàn)稽留流產(chǎn)組Bcl-2低于對照組, Bax則高于對照組。說明Bcl-2/Bax基因共同參與正常早孕期蛻膜細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié), 且處于一種正常的平衡狀態(tài)。Bax增高則細(xì)胞凋亡增加, Bax降低則細(xì)胞凋亡降低。細(xì)胞凋亡調(diào)控異常會導(dǎo)致習(xí)慣性流產(chǎn)以及多種妊娠并發(fā)疾病的發(fā)生, 這與丁峰等[4]在自然流產(chǎn)蛻膜組織中觀察的結(jié)果相類似。本次研究結(jié)果顯示:稽留流產(chǎn)組與正常妊娠組相比, Bcl-2/Bax比值降低, 比例平衡被打破, 細(xì)胞凋亡增加, 導(dǎo)致稽留流產(chǎn)結(jié)局。

    綜上所述, 正常早孕階段細(xì)胞凋亡和修復(fù)、Bcl-2/Bax在胎盤絨毛組織中的表達(dá)處于一種動態(tài)平衡狀態(tài), 這種平衡對妊娠的順利進(jìn)行有重要作用。如果細(xì)胞凋亡指數(shù)增加、Bcl-2/Bax在胎盤絨毛組織中的表達(dá)失衡則會導(dǎo)致稽留流產(chǎn)的發(fā)生。如果能夠進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)引起細(xì)胞異常凋亡的因素和機(jī)制, 發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致Bcl-2/Bax在胎盤絨毛組織中的表達(dá)失衡的原因, 進(jìn)而人為地控制這些因素或阻斷其作用途徑, 就能夠找到預(yù)防和治療復(fù)發(fā)性稽留流產(chǎn)的方法。

    參考文獻(xiàn)

    [1] Dai D, Moulton BC, Oqle TF. Regression of the decidualized me sometrium and decidual cell apoptosis are associated with a shift in expression of Bcl-2 family members.Biol Reprod, 2000, 63(1):188-195.

    [2] 賀子秋,劉嵐,陶昱.自然流產(chǎn)絨毛與蛻膜組織中細(xì)胞凋亡的研究.同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版), 2010,31(3):38-40.

    [3] Minas Jeschek U, Kalantaridou SN. Abortion is associated with increased expression of FasL in decidual leukocytes and apoPtosis of extravillous trophoblasts:a role for CRH and uroco~in. Mol Hum Reprod, 2007,13(9):663-673.

    [4] 丁峰,傅國強(qiáng),邢福棋,等.自然流產(chǎn)中的早孕蛻膜細(xì)胞Bcl-2/Bax比例異常.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床, 2002,22(4):363-366.endprint

    Bcl-2基因家族是目前廣泛研究的一類細(xì)胞凋亡相關(guān)基因, 其表達(dá)和調(diào)控是影響細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因素之一。通過上調(diào)抗凋亡的Bcl-2的基因表達(dá), 可以在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)以影響凋亡的發(fā)生。Bax是從人B細(xì)胞中首次發(fā)現(xiàn)與Bcl-2共沉淀的另一類蛋白質(zhì), 它可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡,作用與Bcl-2相反。通過觀察Bcl-2和Bax在稽留流產(chǎn)與正常妊娠絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá), 發(fā)現(xiàn)稽留流產(chǎn)組Bcl-2低于對照組, Bax則高于對照組。說明Bcl-2/Bax基因共同參與正常早孕期蛻膜細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié), 且處于一種正常的平衡狀態(tài)。Bax增高則細(xì)胞凋亡增加, Bax降低則細(xì)胞凋亡降低。細(xì)胞凋亡調(diào)控異常會導(dǎo)致習(xí)慣性流產(chǎn)以及多種妊娠并發(fā)疾病的發(fā)生, 這與丁峰等[4]在自然流產(chǎn)蛻膜組織中觀察的結(jié)果相類似。本次研究結(jié)果顯示:稽留流產(chǎn)組與正常妊娠組相比, Bcl-2/Bax比值降低, 比例平衡被打破, 細(xì)胞凋亡增加, 導(dǎo)致稽留流產(chǎn)結(jié)局。

    綜上所述, 正常早孕階段細(xì)胞凋亡和修復(fù)、Bcl-2/Bax在胎盤絨毛組織中的表達(dá)處于一種動態(tài)平衡狀態(tài), 這種平衡對妊娠的順利進(jìn)行有重要作用。如果細(xì)胞凋亡指數(shù)增加、Bcl-2/Bax在胎盤絨毛組織中的表達(dá)失衡則會導(dǎo)致稽留流產(chǎn)的發(fā)生。如果能夠進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)引起細(xì)胞異常凋亡的因素和機(jī)制, 發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致Bcl-2/Bax在胎盤絨毛組織中的表達(dá)失衡的原因, 進(jìn)而人為地控制這些因素或阻斷其作用途徑, 就能夠找到預(yù)防和治療復(fù)發(fā)性稽留流產(chǎn)的方法。

    參考文獻(xiàn)

    [1] Dai D, Moulton BC, Oqle TF. Regression of the decidualized me sometrium and decidual cell apoptosis are associated with a shift in expression of Bcl-2 family members.Biol Reprod, 2000, 63(1):188-195.

    [2] 賀子秋,劉嵐,陶昱.自然流產(chǎn)絨毛與蛻膜組織中細(xì)胞凋亡的研究.同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版), 2010,31(3):38-40.

    [3] Minas Jeschek U, Kalantaridou SN. Abortion is associated with increased expression of FasL in decidual leukocytes and apoPtosis of extravillous trophoblasts:a role for CRH and uroco~in. Mol Hum Reprod, 2007,13(9):663-673.

    [4] 丁峰,傅國強(qiáng),邢福棋,等.自然流產(chǎn)中的早孕蛻膜細(xì)胞Bcl-2/Bax比例異常.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床, 2002,22(4):363-366.endprint

    Bcl-2基因家族是目前廣泛研究的一類細(xì)胞凋亡相關(guān)基因, 其表達(dá)和調(diào)控是影響細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因素之一。通過上調(diào)抗凋亡的Bcl-2的基因表達(dá), 可以在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)以影響凋亡的發(fā)生。Bax是從人B細(xì)胞中首次發(fā)現(xiàn)與Bcl-2共沉淀的另一類蛋白質(zhì), 它可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡,作用與Bcl-2相反。通過觀察Bcl-2和Bax在稽留流產(chǎn)與正常妊娠絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá), 發(fā)現(xiàn)稽留流產(chǎn)組Bcl-2低于對照組, Bax則高于對照組。說明Bcl-2/Bax基因共同參與正常早孕期蛻膜細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié), 且處于一種正常的平衡狀態(tài)。Bax增高則細(xì)胞凋亡增加, Bax降低則細(xì)胞凋亡降低。細(xì)胞凋亡調(diào)控異常會導(dǎo)致習(xí)慣性流產(chǎn)以及多種妊娠并發(fā)疾病的發(fā)生, 這與丁峰等[4]在自然流產(chǎn)蛻膜組織中觀察的結(jié)果相類似。本次研究結(jié)果顯示:稽留流產(chǎn)組與正常妊娠組相比, Bcl-2/Bax比值降低, 比例平衡被打破, 細(xì)胞凋亡增加, 導(dǎo)致稽留流產(chǎn)結(jié)局。

    綜上所述, 正常早孕階段細(xì)胞凋亡和修復(fù)、Bcl-2/Bax在胎盤絨毛組織中的表達(dá)處于一種動態(tài)平衡狀態(tài), 這種平衡對妊娠的順利進(jìn)行有重要作用。如果細(xì)胞凋亡指數(shù)增加、Bcl-2/Bax在胎盤絨毛組織中的表達(dá)失衡則會導(dǎo)致稽留流產(chǎn)的發(fā)生。如果能夠進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)引起細(xì)胞異常凋亡的因素和機(jī)制, 發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致Bcl-2/Bax在胎盤絨毛組織中的表達(dá)失衡的原因, 進(jìn)而人為地控制這些因素或阻斷其作用途徑, 就能夠找到預(yù)防和治療復(fù)發(fā)性稽留流產(chǎn)的方法。

    參考文獻(xiàn)

    [1] Dai D, Moulton BC, Oqle TF. Regression of the decidualized me sometrium and decidual cell apoptosis are associated with a shift in expression of Bcl-2 family members.Biol Reprod, 2000, 63(1):188-195.

    [2] 賀子秋,劉嵐,陶昱.自然流產(chǎn)絨毛與蛻膜組織中細(xì)胞凋亡的研究.同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版), 2010,31(3):38-40.

    [3] Minas Jeschek U, Kalantaridou SN. Abortion is associated with increased expression of FasL in decidual leukocytes and apoPtosis of extravillous trophoblasts:a role for CRH and uroco~in. Mol Hum Reprod, 2007,13(9):663-673.

    [4] 丁峰,傅國強(qiáng),邢福棋,等.自然流產(chǎn)中的早孕蛻膜細(xì)胞Bcl-2/Bax比例異常.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床, 2002,22(4):363-366.endprint

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