微柱凝膠卡式法與試管法在ABO新生兒溶血病檢測(cè)中的對(duì)比分析

鐘水權(quán)

【摘要】 目的：探討微柱凝膠卡式法對(duì)新生兒溶血?。℉DN）的診斷價(jià)值。方法：選取2012年7月-2013年7月本院兒科收治的疑似ABO母嬰血型不合新生兒溶血病的278例新生兒血標(biāo)本，分別用微柱凝膠卡式法和傳統(tǒng)試管法進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)、間接抗人球蛋白試驗(yàn)和放散試驗(yàn)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果：278例中臨床確診263例。微柱凝膠卡式法的直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率76.4%明顯高于試管法的59.3%，抗體游離試驗(yàn)陽(yáng)性率90.5%明顯高于試管法的66.2%，抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率99.2%明顯高于試管法的79.1%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。結(jié)論：微柱凝膠卡式法對(duì)于輔助診斷HDN優(yōu)于傳統(tǒng)試管法，操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，結(jié)果易觀察，值得在臨床上推廣。

【關(guān)鍵詞】 微柱凝膠卡式法； 試管法； ABO； 新生兒溶血病

新生兒溶血?。℉emolytic disease of the newborn，HDN）是指母嬰血型不合引起的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾病[1]。臨床上其實(shí)驗(yàn)診斷依據(jù)主要是“三項(xiàng)試驗(yàn)”，即紅細(xì)胞抗人球蛋白試驗(yàn)、血清游離抗體試驗(yàn)和抗體放散試驗(yàn)[2]。三項(xiàng)試驗(yàn)主要是檢測(cè)新生兒血清中是否含有紅細(xì)胞抗體或紅細(xì)胞是否致敏，提高三項(xiàng)試驗(yàn)的敏感性及特異性，對(duì)優(yōu)生優(yōu)育和新生兒溶血病的早期準(zhǔn)確診斷有十分重要的意義[3]。微柱凝集試驗(yàn)作為一種免疫學(xué)檢測(cè)的新技術(shù)，是一種新的改良抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)，在發(fā)達(dá)先進(jìn)的國(guó)家已成為常規(guī)的血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)，近年來(lái)在我國(guó)輸血領(lǐng)域已逐步作為常規(guī)應(yīng)用。本院2012年7月-2013年7月采用微柱凝膠卡式法及傳統(tǒng)試管法對(duì)擬診的278例ABO血型不合新生兒溶血病患兒進(jìn)行平行檢測(cè)，并進(jìn)行比較分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 血標(biāo)本來(lái)自2012年7月-2013年7月在本院兒科初步診斷疑似ABO母嬰血型不合新生兒溶血病的278例患兒。新生兒出生時(shí)間0.5～7 d，平均（4.8±2.5）d，其中男142例，女136例。患兒多在出生后1～7 d內(nèi)，臨床表現(xiàn)為出現(xiàn)黃疸和貧血、高膽紅素血癥、血紅蛋白降低，伴有新生兒溶血病的臨床癥狀和體征。

1.2 儀器與試劑 標(biāo)準(zhǔn)抗A、B血清試劑和標(biāo)準(zhǔn)A、B、O紅細(xì)胞由上海血液生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，多特異性抗人球蛋白試劑、單特異性抗-IgG、單特異性抗-C3購(gòu)于上海市血液中心。微柱凝膠檢測(cè)卡、試劑、37 ℃免疫微柱孵育器、低速離心機(jī)、加樣機(jī)及自動(dòng)判讀機(jī)由達(dá)亞美公司提供。

1.3 方法 首先分別鑒定母親及新生兒抗凝血作ABO及Rh血型，然后對(duì)患兒血標(biāo)本分別應(yīng)用微柱凝膠卡式檢測(cè)法及流式細(xì)胞儀法進(jìn)行HDN三項(xiàng)試驗(yàn)，即直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAT）、抗體游離試驗(yàn)及抗體放散試驗(yàn)，同時(shí)設(shè)立陰、陽(yáng)性對(duì)照，進(jìn)行質(zhì)控。

1.3.1 試管法 HDN三項(xiàng)試驗(yàn)嚴(yán)格按照《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》進(jìn)行操作。具體步驟：將受檢紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌3次，配成3%～5%的紅細(xì)胞懸液。取紅細(xì)胞懸液1滴加廣譜抗人球蛋白試劑2滴，離心觀察結(jié)果（直抗試驗(yàn)）；取試管3支，分別標(biāo)記A、B、O，每管加入患兒血清/放散液2滴，按標(biāo)記分別加入A、B、O試劑紅細(xì)胞1滴，37 ℃孵育1 h后，用生理鹽水洗3次，加入抗人球蛋白試劑2滴，離心觀察結(jié)果（游離/放散試驗(yàn)）。

1.3.2 微柱凝膠卡式法 （1）直接抗球蛋白試驗(yàn)：取新生兒靜脈血，離心，取壓積紅細(xì)胞，用生理鹽水洗滌3次后配制成約0.5%～1%的紅細(xì)胞懸液，取50 μL紅細(xì)胞懸液加入微柱凝膠孔，離心5 min（2000 r/min），判讀結(jié)果，微柱凝膠卡式法以紅細(xì)胞聚集在凝膠帶上部或凝膠中部為陽(yáng)性反應(yīng)。（2）血清游離抗體試驗(yàn)：取微柱凝膠卡在相應(yīng)位置分別加入標(biāo)準(zhǔn)A、B、O紅細(xì)胞各50 μL，再各加入患兒血清50 μL，置37 ℃孵育15 min，離心10 min（2000 r/min），判斷結(jié)果，陽(yáng)性同上。（3）釋放試驗(yàn)（熱放散法）：取洗滌4次的壓積紅細(xì)胞500 μL置試管中，加等量生理鹽水，放入56 ℃水浴中孵育10 min，取出后立即離心（2000 r/min）5 min取上清液即為放散液，在微柱凝膠孔上分別加入標(biāo)準(zhǔn)A、B、O紅細(xì)胞各50 μL，隨后各加入放散液50 μL，將此卡置孵育器37 ℃孵育15 min，取出放入低速離心機(jī)離心3 min（1500 r/min），判定結(jié)果，陽(yáng)性同上。

1.4 HDN檢驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn) 3項(xiàng)試驗(yàn)同時(shí)陽(yáng)性可確診；不同時(shí)陽(yáng)性時(shí)以放散試驗(yàn)陽(yáng)性為診斷標(biāo)準(zhǔn)；直接抗球蛋白試驗(yàn)和/或血清游離抗體陽(yáng)性，而放散試驗(yàn)陰性，結(jié)合臨床具體分析[4]。

1.5 HDN臨床診斷標(biāo)準(zhǔn) （1）母嬰血型不合；（2）曾有死胎或有分娩原因不明的黃疸、貧血、水腫兒史；（3）新生兒有不同程度的黃疸、貧血、肝脾腫大，出生后2 d內(nèi)有黃疸，2～4 d達(dá)高峰，血清膽紅素>205 μmol/L，有高膽紅素血癥的為臨床型，否則為亞臨床型。（4）實(shí)驗(yàn)室診斷：新生兒直接抗球蛋白試驗(yàn)、血清游離抗體試驗(yàn)、放散試驗(yàn)3項(xiàng)中至少有一項(xiàng)陽(yáng)性。（5）排除乙型肝炎病毒感染等繼發(fā)疾病[5]。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

278例臨床表現(xiàn)為貧血、高膽紅素血癥、臨床疑似HDN的患兒血標(biāo)本中，最后綜合分析臨床確診263例。確診263例中，試管法的抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性者208例（79.1%），漏診55例，HDN與臨床符合率為79.1%（208/263）。微柱凝膠卡式法的抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性者261例（99.2%），漏診2例，HDN與臨床符合率為99.2%（261/263）。微柱凝膠卡式法的直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率76.4%明顯高于試管法的59.3%，抗體游離試驗(yàn)陽(yáng)性率90.5%明顯高于試管法的66.2%，抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率99.2%明顯高于試管法的79.1%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。另試管法檢測(cè)結(jié)果的凝集強(qiáng)度為±～+，而微柱凝膠卡式法為+～++，比試管法的凝集強(qiáng)度高1+～2+，具體見(jiàn)表1。endprint

3 討論

新生兒溶血病是由于母親體內(nèi)存在著與胎兒紅細(xì)胞不合的IgG血型抗體而引起的同種免疫疾病。新生兒溶血病機(jī)理是母體的IgG抗體通過(guò)胎盤(pán)屏障進(jìn)入胎兒血液中，對(duì)胎兒的紅細(xì)胞進(jìn)行破壞，造成不同程度的溶血、貧血、黃疸及高膽紅素血癥等，可引起流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)等，存活的嬰兒嚴(yán)重者可導(dǎo)致新生兒嚴(yán)重后遺癥如嚴(yán)重貧血、膽紅素腦病及智力低下，甚至死亡等[6]。在已知的血型系統(tǒng)中，以ABO血型系統(tǒng)最常見(jiàn)。原因?yàn)锳、B血型抗原物質(zhì)廣泛存在自然界某些植物、寄生蟲(chóng)及細(xì)菌等微生物中，O型血孕婦通常在懷孕前早已接觸過(guò)A、B血型抗原物質(zhì)刺激，并可產(chǎn)生相應(yīng)的不同效價(jià)的抗A、抗B的IgG抗體，ABO血型不合50%在第一胎即可發(fā)病，因此ABO新生兒溶血病臨床多見(jiàn)[7]。其次Rh血型系統(tǒng)，Kell、MN、Duffy等其他系統(tǒng)的血型不合在臨床上比較為少見(jiàn)。目前臨床上可根據(jù)“三項(xiàng)試驗(yàn)”，即紅細(xì)胞抗球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)和血清游離抗體試驗(yàn)，并結(jié)合臨床，綜合分析做出診斷。然而新生兒是人生長(zhǎng)發(fā)育一個(gè)特殊階段，新生兒溶血病雖與新生兒血型密不可分，但其血型抗原位點(diǎn)少，抗原表達(dá)弱，抗體水平表達(dá)較低，尤其是出生3～4個(gè)月時(shí)的生理性低γ球蛋白血癥，IgG水平僅相當(dāng)于成人的35%左右，1～3歲時(shí)IgG水平也僅為成人的60%，13歲時(shí)才基本達(dá)到成人水平[8]。鑒于以上原因故血型血清學(xué)檢測(cè)的難度較大，既往通常采用鹽水抗球蛋白試驗(yàn)、酶處理紅細(xì)胞技術(shù)等傳統(tǒng)方法及手工聚凝胺試驗(yàn)來(lái)測(cè)定，操作繁瑣，時(shí)間長(zhǎng)，同時(shí)需顯微鏡觀察，誤差大，主觀因素?fù)诫s，不易標(biāo)準(zhǔn)化，且準(zhǔn)確率不高[9]。

本院2012年7月-2013年7月采用微柱凝膠卡式法及傳統(tǒng)試管法對(duì)擬診的ABO血型不合新生兒溶血病進(jìn)行平行檢測(cè)，結(jié)果顯示微柱凝膠卡式法檢出直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率、抗體游離試驗(yàn)陽(yáng)性及抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率明顯高于試管法，臨床符合率達(dá)99.2%，兩法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與既往文獻(xiàn)[10]報(bào)道相符。分析差異原因，與采用的試驗(yàn)方法有關(guān)。微柱凝膠卡式法是建立在傳統(tǒng)血清學(xué)基礎(chǔ)上的一項(xiàng)免疫學(xué)血型檢測(cè)技術(shù)，是抗原抗體反應(yīng)、凝膠柱過(guò)濾和離心三種技術(shù)的集成與結(jié)合[11]。原理為當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)，紅細(xì)胞發(fā)生凝集，離心時(shí)，凝集塊不能通過(guò)凝膠間隙而留在凝膠上層，呈陽(yáng)性反應(yīng)，未凝集細(xì)胞離心是可通過(guò)凝膠間隙而留在凝膠下層，呈陰性反應(yīng)。微柱凝膠技術(shù)直觀、敏感、快速、特異性更好，結(jié)果更易于觀察。而試管法操作過(guò)程中需反復(fù)洗滌紅細(xì)胞，步驟繁瑣，受人為因素影響大，結(jié)果判斷主觀化，且試驗(yàn)過(guò)程中干擾因素較多，如在放散試驗(yàn)中，試驗(yàn)的溫度、酶的pH值，酶化時(shí)間等不易把握，容易造成假陽(yáng)性、假陰性?？傊?，傳統(tǒng)試管法由于時(shí)間長(zhǎng)、重復(fù)性不好等缺點(diǎn)，因此也一直不能被臨床廣泛推廣使用，而微柱法操作過(guò)程簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、結(jié)果易觀察，尤其表現(xiàn)在放散試驗(yàn)和游離試驗(yàn)中，易標(biāo)準(zhǔn)化，適宜在臨床推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]張勇萍，安寧，李娜，等.微柱凝膠法與試管法檢測(cè)新生兒溶血病免疫性抗體的比較[J].臨床血液學(xué)雜志：輸血與檢驗(yàn)，2012，24（6）：697-698.

[2]符寶銘，石明芳，袁茜茜.新生兒溶血病壯族患兒ABO溶血三項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（6）：704-705.

[3]朱梅，陶存武，張循善，等.微柱凝膠技術(shù)在新生兒ABO溶血病檢測(cè)中的應(yīng)用[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2013，15（3）：224-227.

[4]王宇宏，劉冰.用微柱凝膠法診斷新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2012，15（12）：2018-2020.

[5]張志哲，黃青枝，吳會(huì)紅，等.應(yīng)用ROC曲線(xiàn)評(píng)價(jià)產(chǎn)前IgG抗A（B）效價(jià)檢測(cè)對(duì)早期診斷ABO新生兒溶血病的價(jià)值[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2011，26（5）：338-339.

[6]朱瑩，王婧.微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)521例O型血孕婦IgG A（B）抗體效價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（1）：33-34.

[7]鐘月華，譚靜，黃華華，等.微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血性疾病診斷中的應(yīng)用[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，10（8）：613-614.

[8]李明鋒，譚代林，伍萬(wàn)剛，等.4種血型血清學(xué)檢測(cè)方法在嬰幼兒患者臨床輸血中的比較與研究[J].基層醫(yī)學(xué)論壇，2007，11（1）：35-36.

[9]李娟，方代華，許琴，等.微柱凝膠技術(shù)在新生兒同種免疫性溶血病診斷中的臨床應(yīng)用[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)刊，2013，40（15）：56-57.

[10]王萍，肖筠，魏紅璐.微柱凝膠法和傳統(tǒng)試管法在新生兒溶血病診斷中的比較研究[J].中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志，2012，20（8）：548-549.

[11]馬吉聯(lián).微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血性疾病診斷的研究[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘（電子版），2013，13（7）：64-65.

（收稿日期：2014-01-20） （本文編輯：歐麗）endprint

3 討論

新生兒溶血病是由于母親體內(nèi)存在著與胎兒紅細(xì)胞不合的IgG血型抗體而引起的同種免疫疾病。新生兒溶血病機(jī)理是母體的IgG抗體通過(guò)胎盤(pán)屏障進(jìn)入胎兒血液中，對(duì)胎兒的紅細(xì)胞進(jìn)行破壞，造成不同程度的溶血、貧血、黃疸及高膽紅素血癥等，可引起流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)等，存活的嬰兒嚴(yán)重者可導(dǎo)致新生兒嚴(yán)重后遺癥如嚴(yán)重貧血、膽紅素腦病及智力低下，甚至死亡等[6]。在已知的血型系統(tǒng)中，以ABO血型系統(tǒng)最常見(jiàn)。原因?yàn)锳、B血型抗原物質(zhì)廣泛存在自然界某些植物、寄生蟲(chóng)及細(xì)菌等微生物中，O型血孕婦通常在懷孕前早已接觸過(guò)A、B血型抗原物質(zhì)刺激，并可產(chǎn)生相應(yīng)的不同效價(jià)的抗A、抗B的IgG抗體，ABO血型不合50%在第一胎即可發(fā)病，因此ABO新生兒溶血病臨床多見(jiàn)[7]。其次Rh血型系統(tǒng)，Kell、MN、Duffy等其他系統(tǒng)的血型不合在臨床上比較為少見(jiàn)。目前臨床上可根據(jù)“三項(xiàng)試驗(yàn)”，即紅細(xì)胞抗球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)和血清游離抗體試驗(yàn)，并結(jié)合臨床，綜合分析做出診斷。然而新生兒是人生長(zhǎng)發(fā)育一個(gè)特殊階段，新生兒溶血病雖與新生兒血型密不可分，但其血型抗原位點(diǎn)少，抗原表達(dá)弱，抗體水平表達(dá)較低，尤其是出生3～4個(gè)月時(shí)的生理性低γ球蛋白血癥，IgG水平僅相當(dāng)于成人的35%左右，1～3歲時(shí)IgG水平也僅為成人的60%，13歲時(shí)才基本達(dá)到成人水平[8]。鑒于以上原因故血型血清學(xué)檢測(cè)的難度較大，既往通常采用鹽水抗球蛋白試驗(yàn)、酶處理紅細(xì)胞技術(shù)等傳統(tǒng)方法及手工聚凝胺試驗(yàn)來(lái)測(cè)定，操作繁瑣，時(shí)間長(zhǎng)，同時(shí)需顯微鏡觀察，誤差大，主觀因素?fù)诫s，不易標(biāo)準(zhǔn)化，且準(zhǔn)確率不高[9]。

本院2012年7月-2013年7月采用微柱凝膠卡式法及傳統(tǒng)試管法對(duì)擬診的ABO血型不合新生兒溶血病進(jìn)行平行檢測(cè)，結(jié)果顯示微柱凝膠卡式法檢出直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率、抗體游離試驗(yàn)陽(yáng)性及抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率明顯高于試管法，臨床符合率達(dá)99.2%，兩法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與既往文獻(xiàn)[10]報(bào)道相符。分析差異原因，與采用的試驗(yàn)方法有關(guān)。微柱凝膠卡式法是建立在傳統(tǒng)血清學(xué)基礎(chǔ)上的一項(xiàng)免疫學(xué)血型檢測(cè)技術(shù)，是抗原抗體反應(yīng)、凝膠柱過(guò)濾和離心三種技術(shù)的集成與結(jié)合[11]。原理為當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)，紅細(xì)胞發(fā)生凝集，離心時(shí)，凝集塊不能通過(guò)凝膠間隙而留在凝膠上層，呈陽(yáng)性反應(yīng)，未凝集細(xì)胞離心是可通過(guò)凝膠間隙而留在凝膠下層，呈陰性反應(yīng)。微柱凝膠技術(shù)直觀、敏感、快速、特異性更好，結(jié)果更易于觀察。而試管法操作過(guò)程中需反復(fù)洗滌紅細(xì)胞，步驟繁瑣，受人為因素影響大，結(jié)果判斷主觀化，且試驗(yàn)過(guò)程中干擾因素較多，如在放散試驗(yàn)中，試驗(yàn)的溫度、酶的pH值，酶化時(shí)間等不易把握，容易造成假陽(yáng)性、假陰性?？傊瑐鹘y(tǒng)試管法由于時(shí)間長(zhǎng)、重復(fù)性不好等缺點(diǎn)，因此也一直不能被臨床廣泛推廣使用，而微柱法操作過(guò)程簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、結(jié)果易觀察，尤其表現(xiàn)在放散試驗(yàn)和游離試驗(yàn)中，易標(biāo)準(zhǔn)化，適宜在臨床推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]張勇萍，安寧，李娜，等.微柱凝膠法與試管法檢測(cè)新生兒溶血病免疫性抗體的比較[J].臨床血液學(xué)雜志：輸血與檢驗(yàn)，2012，24（6）：697-698.

[2]符寶銘，石明芳，袁茜茜.新生兒溶血病壯族患兒ABO溶血三項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（6）：704-705.

[3]朱梅，陶存武，張循善，等.微柱凝膠技術(shù)在新生兒ABO溶血病檢測(cè)中的應(yīng)用[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2013，15（3）：224-227.

[4]王宇宏，劉冰.用微柱凝膠法診斷新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2012，15（12）：2018-2020.

[5]張志哲，黃青枝，吳會(huì)紅，等.應(yīng)用ROC曲線(xiàn)評(píng)價(jià)產(chǎn)前IgG抗A（B）效價(jià)檢測(cè)對(duì)早期診斷ABO新生兒溶血病的價(jià)值[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2011，26（5）：338-339.

[6]朱瑩，王婧.微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)521例O型血孕婦IgG A（B）抗體效價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（1）：33-34.

[7]鐘月華，譚靜，黃華華，等.微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血性疾病診斷中的應(yīng)用[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，10（8）：613-614.

[8]李明鋒，譚代林，伍萬(wàn)剛，等.4種血型血清學(xué)檢測(cè)方法在嬰幼兒患者臨床輸血中的比較與研究[J].基層醫(yī)學(xué)論壇，2007，11（1）：35-36.

[9]李娟，方代華，許琴，等.微柱凝膠技術(shù)在新生兒同種免疫性溶血病診斷中的臨床應(yīng)用[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)刊，2013，40（15）：56-57.

[10]王萍，肖筠，魏紅璐.微柱凝膠法和傳統(tǒng)試管法在新生兒溶血病診斷中的比較研究[J].中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志，2012，20（8）：548-549.

[11]馬吉聯(lián).微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血性疾病診斷的研究[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘（電子版），2013，13（7）：64-65.

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3 討論

新生兒溶血病是由于母親體內(nèi)存在著與胎兒紅細(xì)胞不合的IgG血型抗體而引起的同種免疫疾病。新生兒溶血病機(jī)理是母體的IgG抗體通過(guò)胎盤(pán)屏障進(jìn)入胎兒血液中，對(duì)胎兒的紅細(xì)胞進(jìn)行破壞，造成不同程度的溶血、貧血、黃疸及高膽紅素血癥等，可引起流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)等，存活的嬰兒嚴(yán)重者可導(dǎo)致新生兒嚴(yán)重后遺癥如嚴(yán)重貧血、膽紅素腦病及智力低下，甚至死亡等[6]。在已知的血型系統(tǒng)中，以ABO血型系統(tǒng)最常見(jiàn)。原因?yàn)锳、B血型抗原物質(zhì)廣泛存在自然界某些植物、寄生蟲(chóng)及細(xì)菌等微生物中，O型血孕婦通常在懷孕前早已接觸過(guò)A、B血型抗原物質(zhì)刺激，并可產(chǎn)生相應(yīng)的不同效價(jià)的抗A、抗B的IgG抗體，ABO血型不合50%在第一胎即可發(fā)病，因此ABO新生兒溶血病臨床多見(jiàn)[7]。其次Rh血型系統(tǒng)，Kell、MN、Duffy等其他系統(tǒng)的血型不合在臨床上比較為少見(jiàn)。目前臨床上可根據(jù)“三項(xiàng)試驗(yàn)”，即紅細(xì)胞抗球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)和血清游離抗體試驗(yàn)，并結(jié)合臨床，綜合分析做出診斷。然而新生兒是人生長(zhǎng)發(fā)育一個(gè)特殊階段，新生兒溶血病雖與新生兒血型密不可分，但其血型抗原位點(diǎn)少，抗原表達(dá)弱，抗體水平表達(dá)較低，尤其是出生3～4個(gè)月時(shí)的生理性低γ球蛋白血癥，IgG水平僅相當(dāng)于成人的35%左右，1～3歲時(shí)IgG水平也僅為成人的60%，13歲時(shí)才基本達(dá)到成人水平[8]。鑒于以上原因故血型血清學(xué)檢測(cè)的難度較大，既往通常采用鹽水抗球蛋白試驗(yàn)、酶處理紅細(xì)胞技術(shù)等傳統(tǒng)方法及手工聚凝胺試驗(yàn)來(lái)測(cè)定，操作繁瑣，時(shí)間長(zhǎng)，同時(shí)需顯微鏡觀察，誤差大，主觀因素?fù)诫s，不易標(biāo)準(zhǔn)化，且準(zhǔn)確率不高[9]。

本院2012年7月-2013年7月采用微柱凝膠卡式法及傳統(tǒng)試管法對(duì)擬診的ABO血型不合新生兒溶血病進(jìn)行平行檢測(cè)，結(jié)果顯示微柱凝膠卡式法檢出直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率、抗體游離試驗(yàn)陽(yáng)性及抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率明顯高于試管法，臨床符合率達(dá)99.2%，兩法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與既往文獻(xiàn)[10]報(bào)道相符。分析差異原因，與采用的試驗(yàn)方法有關(guān)。微柱凝膠卡式法是建立在傳統(tǒng)血清學(xué)基礎(chǔ)上的一項(xiàng)免疫學(xué)血型檢測(cè)技術(shù)，是抗原抗體反應(yīng)、凝膠柱過(guò)濾和離心三種技術(shù)的集成與結(jié)合[11]。原理為當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)，紅細(xì)胞發(fā)生凝集，離心時(shí)，凝集塊不能通過(guò)凝膠間隙而留在凝膠上層，呈陽(yáng)性反應(yīng)，未凝集細(xì)胞離心是可通過(guò)凝膠間隙而留在凝膠下層，呈陰性反應(yīng)。微柱凝膠技術(shù)直觀、敏感、快速、特異性更好，結(jié)果更易于觀察。而試管法操作過(guò)程中需反復(fù)洗滌紅細(xì)胞，步驟繁瑣，受人為因素影響大，結(jié)果判斷主觀化，且試驗(yàn)過(guò)程中干擾因素較多，如在放散試驗(yàn)中，試驗(yàn)的溫度、酶的pH值，酶化時(shí)間等不易把握，容易造成假陽(yáng)性、假陰性?？傊?，傳統(tǒng)試管法由于時(shí)間長(zhǎng)、重復(fù)性不好等缺點(diǎn)，因此也一直不能被臨床廣泛推廣使用，而微柱法操作過(guò)程簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、結(jié)果易觀察，尤其表現(xiàn)在放散試驗(yàn)和游離試驗(yàn)中，易標(biāo)準(zhǔn)化，適宜在臨床推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]張勇萍，安寧，李娜，等.微柱凝膠法與試管法檢測(cè)新生兒溶血病免疫性抗體的比較[J].臨床血液學(xué)雜志：輸血與檢驗(yàn)，2012，24（6）：697-698.

[2]符寶銘，石明芳，袁茜茜.新生兒溶血病壯族患兒ABO溶血三項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（6）：704-705.

[3]朱梅，陶存武，張循善，等.微柱凝膠技術(shù)在新生兒ABO溶血病檢測(cè)中的應(yīng)用[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2013，15（3）：224-227.

[4]王宇宏，劉冰.用微柱凝膠法診斷新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2012，15（12）：2018-2020.

[5]張志哲，黃青枝，吳會(huì)紅，等.應(yīng)用ROC曲線(xiàn)評(píng)價(jià)產(chǎn)前IgG抗A（B）效價(jià)檢測(cè)對(duì)早期診斷ABO新生兒溶血病的價(jià)值[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2011，26（5）：338-339.

[6]朱瑩，王婧.微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)521例O型血孕婦IgG A（B）抗體效價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（1）：33-34.

[7]鐘月華，譚靜，黃華華，等.微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血性疾病診斷中的應(yīng)用[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，10（8）：613-614.

[8]李明鋒，譚代林，伍萬(wàn)剛，等.4種血型血清學(xué)檢測(cè)方法在嬰幼兒患者臨床輸血中的比較與研究[J].基層醫(yī)學(xué)論壇，2007，11（1）：35-36.

[9]李娟，方代華，許琴，等.微柱凝膠技術(shù)在新生兒同種免疫性溶血病診斷中的臨床應(yīng)用[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)刊，2013，40（15）：56-57.

[10]王萍，肖筠，魏紅璐.微柱凝膠法和傳統(tǒng)試管法在新生兒溶血病診斷中的比較研究[J].中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志，2012，20（8）：548-549.

[11]馬吉聯(lián).微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血性疾病診斷的研究[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘（電子版），2013，13（7）：64-65.

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