應(yīng)用絨毛膜促性腺激素促進(jìn)早期妊娠識(shí)別提高受胎率

張福建，高朋舉，姜宏星，張洪濤，閆德光，燕傳利

(1.牡丹江管局8511 農(nóng)場(chǎng)畜牧科，黑龍江 雞西158307; 2.黑龍江省五常犇牛牧業(yè)有限責(zé)任公司，五常150204;3.黑龍江省農(nóng)墾科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，哈爾濱150038; 4.山東省廣饒縣畜牧局，廣饒257300)

在妊娠初期，孕體發(fā)出信號(hào)(類(lèi)固醇激素或蛋白質(zhì)) 傳遞給母體，母體隨即產(chǎn)生反應(yīng)，以識(shí)別孕體的存在。由此，母體和孕體建立密切聯(lián)系，促進(jìn)孕體進(jìn)一步發(fā)育，這一生理過(guò)程叫妊娠識(shí)別。

人類(lèi)和其它靈長(zhǎng)動(dòng)物的胚囊合胞體滋養(yǎng)層產(chǎn)生一種蛋白質(zhì)信息，可以分泌大量的蛋白激素，即絨毛膜促性腺激素(chorionic gonadotropin，CG) ，它和促黃體素非常相似。CG 與黃體上的促黃體素受體結(jié)合，可以刺激黃體繼續(xù)分泌孕酮，還可以封鎖黃體內(nèi)引起黃體退化的信號(hào)。對(duì)于牛和其它反芻動(dòng)物來(lái)說(shuō)，如果沒(méi)有妊娠，子宮內(nèi)膜分泌的PGF2α作用于黃體，使其在性周期末發(fā)生退化。反芻動(dòng)物的早期胚胎會(huì)大量分泌一種蛋白——干擾素τ。牛的妊娠識(shí)別發(fā)生在妊娠的16 ～19 d。牛胚胎從囊胚孵化開(kāi)始，到滋養(yǎng)層與子宮阜接觸之前也分泌干擾素τ，稱(chēng)為bIFN-τ。暴露在這種激素下的子宮內(nèi)膜會(huì)減少PGF 的分泌，從而阻止黃體溶解的信號(hào)，結(jié)果黃體得以繼續(xù)存在，孕酮水平也得到維持。

牛配種后正常生成受精卵，但受精卵發(fā)育的最初幾周里，很容易有胎兒流產(chǎn)的問(wèn)題，這樣就需要重新配種。有研究表明，妊娠識(shí)別與繁殖障礙存在一定的關(guān)系，妊娠初期的流產(chǎn)跟絨毛膜促性腺激素等激素有關(guān)。為此，我們開(kāi)展了此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)牛、藥品和時(shí)間

選擇單產(chǎn)7 ～8 t 的泌乳高峰期牛，共69頭。人絨毛膜促性腺激素(hCG) 由蘇州市蘇牧動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，1 支含量1 000單位。實(shí)驗(yàn)于2013年10月末至2014年1月末進(jìn)行，全期90 d。

1.2 試驗(yàn)分組和方法

將試驗(yàn)用經(jīng)產(chǎn)母牛，通過(guò)直檢和觀察法判定子宮和卵巢均健康后，在其發(fā)情時(shí)進(jìn)行人工授精。同時(shí)對(duì)每頭牛的卵巢及卵泡發(fā)育情況等做好記錄。

將所有試驗(yàn)牛分作A、B 兩組，其中卵巢上黃體和卵泡同時(shí)存在的為一組(A) ，卵巢上只存在黃體的為一組(B) 。每組牛再隨機(jī)分成對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。

實(shí)驗(yàn)組牛采用后海穴一次性注射hCG，用0.9%生理鹽水5 mL 稀釋(hCG) 5 支，即總量為5 000 單位。分別在配后30 天和58天進(jìn)行B 超檢查，并配合直腸妊娠判定法進(jìn)行妊娠診斷。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)結(jié)果

從表1 中實(shí)驗(yàn)A 組與實(shí)驗(yàn)B 組對(duì)比，配后都注射了HCG，母牛卵巢表面黃體卵泡同時(shí)存在組的受胎率為58.8%; 母牛卵巢表面只有生成較好黃體組的受胎率為73.9%，相差15.1%(P ＜0.05) 。

表1 不同卵巢狀況下使用HCG 的妊娠情況

2.2 分析

A 組母牛卵巢表面黃體較好，暫時(shí)沒(méi)有退化跡象，同時(shí)卵巢上存在著卵泡發(fā)育狀態(tài)。30 天妊檢兩組受胎率相近。58 天妊檢，實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組受胎率25.5 個(gè)百分點(diǎn)，經(jīng)檢驗(yàn)差異顯著(P ＜0.05) 。對(duì)照組妊娠率較低，可能是其母牛妊娠識(shí)別差，從而在囊胚開(kāi)始附植時(shí)，部分胚胎附植和著床差，造成胚胎早期脫落、流產(chǎn)。

B 組母牛卵巢上排卵處形成較好的黃體，同時(shí)卵巢上無(wú)其他異物。對(duì)照組雖然沒(méi)有注射hCG，但是因其卵巢上生成的黃體很好，無(wú)外源激素，其自身黃體分泌的孕酮就能達(dá)到周期黃體轉(zhuǎn)變成妊娠黃體，尤其B 組母牛卵巢不存在卵泡發(fā)育，也就是說(shuō)從形態(tài)上促卵泡素含量很低或沒(méi)有，影響不了胚胎的附植和著床。若想論證此點(diǎn)還需進(jìn)一步研究測(cè)定母牛在此階段的激素含量。

雖然兩次孕檢時(shí)各組胚胎的著床和受胎率均沒(méi)變化，但是在第一次孕檢前即5 ～15天的胚胎損失有多少在本試驗(yàn)中還不能確定，有待進(jìn)一步研究。從實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組受胎率相差21 個(gè)百分點(diǎn)，經(jīng)檢驗(yàn)差異極顯著(P ＜0.01) 。Hanson 指出，在受精后第28 ～45 天有13%的流產(chǎn)和第45 ～75 天有6%的流產(chǎn)，合計(jì)流產(chǎn)也在19%左右。

3 討 論

妊娠識(shí)別是有孕體及其所產(chǎn)生的促黃體分泌激素作為信號(hào)，母體接收信號(hào)并做出反應(yīng)來(lái)完成的。這種激素的性質(zhì)可以是糖蛋白(例如絨毛膜促性腺激素) ，也可以是雌激素。它們的作用主要是抑制PGF2α的生成，使黃體分泌孕酮的機(jī)能維持下去。它們產(chǎn)生的時(shí)間，對(duì)于是否能維持妊娠是至關(guān)重要的。這個(gè)時(shí)間是在周期黃體發(fā)生作用末期，否則就因胚胎未能及時(shí)發(fā)生足夠的抗溶黃體影響，而不能阻止黃體退化，導(dǎo)致胚胎自身死亡。這和家畜的受胎率低不無(wú)關(guān)系。在胚胎產(chǎn)生信號(hào)的同時(shí)，子宮的機(jī)能也發(fā)生相應(yīng)的改變，適應(yīng)胚胎的發(fā)育。因此妊娠識(shí)別是胚胎與子宮環(huán)境之間，激素的同步，精確的相互影響和平衡，動(dòng)物母體適應(yīng)胚胎的一種微妙機(jī)制。通過(guò)實(shí)驗(yàn)可以得出，在牛的妊娠識(shí)別前，也就是在排卵后13 ～15 d，給母牛注射一種類(lèi)似人絨毛膜促性腺激素(hCG) 的物質(zhì)，增加促黃體激素來(lái)抑制PGF2α發(fā)生作用，使黃體分泌孕酮的機(jī)能維持下去，可以加強(qiáng)胚胎附植和著床能力，提高受胎率。

重要一點(diǎn)是，留給母體進(jìn)行妊娠識(shí)別的時(shí)間非常短暫，妊娠信號(hào)的發(fā)送或接收的失敗都是早期胚胎死亡的重要原因。如果一個(gè)母牛的胚胎不能及時(shí)分泌足夠的CG 來(lái)挽留母親的黃體，這個(gè)胚胎就會(huì)死亡。據(jù)報(bào)道，黃體的退化是有卵巢本身產(chǎn)生的雌激素和PGF2α發(fā)生局部作用所引起的。如果懷孕了，根據(jù)動(dòng)物的種類(lèi)不同，胚胎產(chǎn)生不同的黃體分泌激素，抑制PGF2α的產(chǎn)生或起作用，黃體的壽命就通過(guò)不同的機(jī)制而延長(zhǎng)下去，周期黃體也就變成妊娠黃體。早期胚胎的內(nèi)分泌因素是引起黃體轉(zhuǎn)變的內(nèi)在原因，排卵后13 ～16 天，牛胚胎會(huì)產(chǎn)生一種胚胎激素，這是一種類(lèi)似人絨毛膜促性腺激素的物質(zhì)，可促進(jìn)黃體的功能，防止黃體退化。