燒傷患者血小板微粒產生的變化及意義分析

董士華 曲 狄 劉銘然

(黑龍江省大慶油田總醫(yī)院燒傷科，黑龍江 大慶 163000)

燒傷患者血小板微粒產生的變化及意義分析

董士華 曲 狄 劉銘然

(黑龍江省大慶油田總醫(yī)院燒傷科，黑龍江 大慶 163000)

目的分析燒傷患者的血小板微粒（PMPs）變化及其臨床意義。方法收集2010年1月至2013年1月期間，我院收治的燒傷患者77例，其中44例燒傷休克期患者多為A組，33例燒傷感染患者作為B組，并選擇同期體檢健康人44例為對照組C組。采用流式細胞儀等方法分別檢測三組血漿PMPs水平，常規(guī)進行生化檢測，分析器與PMPs之間的相關性。結果A、B組的血小板膜糖蛋白CD41+PMPs水平顯著高于C組（P＜0.05），經相關性分析顯示其與燒傷面積之間呈顯著正相關性（P＜0.05）；經多元逐步回歸分析顯示γ-CT、ALT及燒傷面積均與CD41+PMPs相關。結論燒傷患者的PMPs水平升高與燒傷后患者的凝血狀態(tài)有密切關系。

感染；燒傷；血小板

血栓、血小板活化、凝血功能障礙以及血小板消耗減少均是燒傷后常見并發(fā)癥，直接威脅患者的生命[1]。相關研究資料顯示，活化血小板可釋放出含血小板也異性蛋白、脂質氧化物以及磷脂等的超微膜囊泡，即血小板微粒（PMPs），PMPs在微血栓的形成、促炎性反應以及調節(jié)血管功能等方面均具有重要作用。但關于PMPs是否參與了燒傷以及燒傷后感染的病理生理過程尚不完全明確[2,3]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年1月至2013年1月期間，我院收治的燒傷患者77例，其中，男65例，女12例，年齡17～72歲，平均為（42.6±5.9）歲?；颊叩臒齻娣e均在總體表面積的50%以上，除外心血管疾病、慢性炎癥性疾病、糖尿病以及腫瘤病史者。其中，44例燒傷休克期患者多為A組，33例燒傷感染患者作為B組，燒傷休克期主要是指在燒傷后72 h之內入院（包括體液復蘇處理前后）的休克期患者，而燒傷感染主要是指存在肺部、創(chuàng)面、血液感染和燒傷膿毒癥者。選擇同期來院檢查的健康人44例為對照C組，其中，男37例，女7例，年齡18～78歲，平均為（44.7±5.5）歲。三組的年齡及性別構成無明顯差異，P＞0.05。

1.2 方法

A組患者于傷后72 h內采集血漿樣本，B組患者在明確感染或者膿毒癥時采集血漿樣本，C組均為體檢時留取血漿。同時對血液標本進行各項生化指標檢查。以血小板膜蛋白CD41進行單標記，對CD41/CD61或者CD41/CD31進行雙標記，檢測患者的PMPs。所用PECy5-CD41單克隆抗體由美國Biolegend公司提供，PE-CD61單克隆抗體由美國BD公司提供，CFS-CD31單克隆抗體由美國R&D公司提供，0.8 μm乳膠珠由美國Sigma公司提供。常規(guī)取2.7 mL靜脈血，并置于枸櫞酸鈉抗凝管之中，于3820 r/min轉速、溫度為20 ℃下進行離心分離20 min，分離出貧瘠血小板血漿。取分離出的貧瘠血小板血漿250 μL置于1.5 mL的離心管中，于轉速為137722 r/min、溫度為4 ℃條件下進行離心分離30 min，并取沉淀物采用PBS進行洗滌，取沉淀物25 μL，加入PEcy5-CD41、PE-CD61以及CFS-CD31，并于室溫條件下進行30 min的避光孵育，然后進行洗滌，以洗去尚未結合的抗體。然后加入適量的鞘液并立即采用美國BD公司提供的上流式細胞儀進行檢測。對于檢測所得的PMPs采用絕對值以及其所占血漿總微粒數(shù)的比例兩種方式來表示。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結 果

2.1 各組的生化指標比較

A、B組的各項生化指標與正常對照C組比較均存在顯著差異，特別是凝血酶原時間（PT）較C組顯著延長，而血清總膽紅素（TBIL）較C組顯著增加，A組的血小板顯著低于C組，B組的γ-谷氨酸轉肽酶（γ-GT）明顯高于A組P＜0.05。見表1。

2.2 各組PMPs水平比較

A、B組的CD41+PMP水平、CD31+PMPs水平以及CD41+CD61+PMPs水平均顯著高于C組（P＜0.05），CD41+PMP所占全血微粒的水平顯著低于C（P＜0.05）；B組的CD41+CD31+PMPs水平所占比例顯著高于A組和C組P＜0.05。見表2。

2.3 CD41

+PMPs與燒傷之間的關系經Logistic多元逐步回歸分析顯示，CD41+PMPs的絕對值與患者的燒傷面積呈顯著正相關性（r=0.261，t=3.813，P＜0.05），而γ-CT以及ALT（t=-2.041、3.813，P＜0.05）均可入選回歸方程。

3 討 論

細胞微粒是一種由紅細胞、白細胞、血管內皮細胞、淋巴細胞以及血小板等經刺激活化或者凋亡脫落而產生的超微膜囊泡[1,4]。血液中的細胞微粒約有70%～90%源自活化血小板。通常血小板活化后生成的PMPs表面多存在活化血小板膜標志物，例如CD41及D62p等[5]。本研究以攜帶CD41表達的血小板微粒作為PMPs。PMPs可促進血栓形成及血小板活化，協(xié)助血小板發(fā)揮其止血功能，并可作為信使向遠隔處傳遞血小板的活化信息，參與了各類血栓性疾病以及炎癥疾病的發(fā)生及發(fā)展過程

表1 各組的生化指標比較（

表1 各組的生化指標比較（

組別 WBC(×109/L) PT(s) PLT(×109/L) ALB(g/L) ALT(IU/L) TBIL(μmol/L) γ-GT(IU/L) A組 19.8±1.9 14.4±0.3 161.6±14.8 26.9±2.6 29.7±2.6 30.8±2.4 19.8±2.0 B組 17.3±1.4 14.5±0.2 263.3±21.3 25.4±0.9 59.1±8.3 22.2±2.3 86.2±15.0 C組 7.35±0.8 11.7±0.2 262.9±28.5 33.9±3.2 32.1±11.9 11.8±1.2 23.4±7.6

表2 各組PMPs水平比較（

表2 各組PMPs水平比較（

組別 例數(shù) CD41+(104/mL) A組 44 46.5±5.9 111.6±28.8 13.4±4.8 44.9±23.4 27.1±5.1 79.8±28.5 B組 33 33.5±2.3 5748±77.5 12.6±1.4 220.5±37.5 25.1±2.2 415.4±56.8 C組 44 47.8±2.9 862.2±147.5 15.8±1.9 363.1±87.1 37.2±2.8 721.9±140.3+(%) CD41+(104/mL) CD41+CD61+(%) CD41+CD61+(104/mL) CD41+CD31+(%) CD41+CD31

嚴重燒傷以后，受感染、缺氧以及熱力等損傷性作用，可損傷血管內皮細胞，暴露內皮下的膠原組織，可導致血管內皮釋放出血管性的血友病因子，而血小板活化后能夠黏附在血管壁上，逐漸聚集從而形成血栓，并釋放出攜帶有PMPs[4,5]。本研究結果顯示，燒傷休克期患者的PMPs水平顯著高于正常者，且與燒傷嚴重程度顯著相關。提示患者處于燒傷休克期時，血液中的血小板發(fā)生大量聚集、活化、黏附以及被消耗，并可生成大量的PMPs釋放如血液中，分析其原因可能與燒傷早期形成微血栓有關。不同類型的活化PMPs所具有的功效不同，本組燒傷感染或者膿毒癥患者的CD41+CD31+PMPs率顯著升高，因發(fā)生嚴重感染，特別是膿毒癥時，形成大量微血栓可導致患者發(fā)生微循環(huán)障礙，從而逐漸發(fā)展成為抗凝狀態(tài)，或者繼發(fā)彌漫性的血管內凝血。經多元回歸分析顯示，燒傷面積、γ-CT以及ALT均與CD41+CD31+PMPs具有顯著相關性，與相關研究報道一致。因此，認為燒傷后所發(fā)生的PMPs在不同病程階段、不同生理及外界刺激因素等條件下所具有的生物效應不同，燒傷后患者的凝血狀態(tài)改變可引起PMPs水平上升。

[1] 吳孝蘋,王東,段勁峰,等.抗焦慮抑郁治療對燒傷患者血小板5-HT水平、血小板計數(shù)和細胞因子的影響[J].四川大學學報(醫(yī)學版),2010,41(2):356.

[2] 虞俊杰,呂國忠,顧在秋,等.重度燒傷病人血小板參數(shù)變化及影響因素分析[J].重慶醫(yī)科大學學報,2012,37(12):1076-1079.

[3] 譚琪佳,楚愛榮,王志敏,等.燒傷早期血小板計數(shù)的臨床意義[J].醫(yī)學檢驗與臨床,2012,23(3):52-53.

[4] 曹以金.兒童燒傷患者血小板四項參數(shù)動態(tài)分析[J].海南醫(yī)學,2010,21(22):60-61.

[5] 楊瑞祥.血小板動態(tài)變化與燒傷病情及預后的相關性研究[J].中國實用醫(yī)刊,2012,39(5):65.

R644

B

1671-8194（2014）14-0145-02