Survivin、PCNA在子宮肌瘤中的表達(dá)及相關(guān)性研究

王 芳

（株洲市中心醫(yī)院，湖南 株洲 412007）

Survivin、PCNA在子宮肌瘤中的表達(dá)及相關(guān)性研究

王 芳

（株洲市中心醫(yī)院，湖南 株洲 412007）

目的探討Survivin與PCNA在子宮肌瘤的表達(dá)和意義及相關(guān)性。方法用免疫組化S-P法檢測(cè)30例正常子宮肌層組織和30例子宮肌瘤組織中Survivin與PCNA蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果Survivin在子宮肌瘤組織中的陽(yáng)性率明顯高于正常子宮肌層組織，（χ2=7.576，P=0.006），PCNA在子宮肌瘤組織的陽(yáng)性率明顯高于正常子宮肌層組織（χ2=7.576，P=0.006），在子宮肌瘤組織Survivin與 PCNA的表達(dá)呈正相關(guān)性（r=0.779，P=0.000）。結(jié)論子宮肌瘤組織中Survivin與PCNA可能在細(xì)胞的增殖中發(fā)生協(xié)同作用，共同參與子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展。

子宮肌瘤；免疫組化；Survivin；PCNA

子宮肌瘤是女性生殖系統(tǒng)最常見的良性腫瘤，發(fā)病率逐年遞增，其病因和發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚。腫瘤的發(fā)生是細(xì)胞過度增殖的結(jié)果，國(guó)內(nèi)外研究表明Survivin和PCNA參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本研究采用免疫組化檢測(cè)30例正常子宮肌層組織和30例子宮肌瘤組織中Survivin和PCNA表達(dá)情況，探討Survivin和PCNA在子宮肌瘤組織發(fā)生發(fā)展中的作用與相互關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月至2012年11月在株洲市一醫(yī)院因子宮肌瘤切除的子宮標(biāo)本，肌瘤組織取自瘤心，正常子宮肌層組織取自肌瘤包膜外2 cm，標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，全部研究對(duì)象術(shù)前6個(gè)月均未接受性激素治療。

所有患者的標(biāo)本均完整可靠，且手術(shù)前沒有使用性激素治療，無糖尿病、甲狀腺功能亢進(jìn)、甲狀腺功能減低、卵巢腫塊等?；颊吣挲g最大為71歲、最小為39歲，平均年齡為（47.11±7.21）歲。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

免疫組化采用S-P法，兔抗人Survivin多克隆抗體（即用型），鼠抗人PCNA單克隆抗體（即用型）等購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。將干凈干燥的載玻片放入到多聚賴氨酸溶液內(nèi)，干燥后備用。將包埋好的蠟塊使用切片機(jī)做連續(xù)切片，并放在干凈載玻片上，充分舒展開后撈取蠟片，常規(guī)做HE染色。脫蠟，蒸餾水清洗5 min，孵育以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，使用PBS沖洗后，再進(jìn)行熱修復(fù)抗原，PBS沖洗3次，加入封閉液后在室溫下孵育，再加入一抗工作液、生物素話II抗、SABC，期間使用PBS沖洗，再加入DAB顯色劑，隨后使用蒸餾水做洗滌，蘇木素復(fù)染，封片。

染色切片經(jīng)顯微鏡觀察，如果細(xì)胞質(zhì)以及細(xì)胞核存在棕黃色顆粒，且分布情況呈彌漫片狀，分布面積在10%以上，則確定為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

此次臨床研究主要采用SPSS12.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和處理，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Survivin在正常子宮肌層組織及子宮肌瘤組織中的表達(dá)

Survivin陽(yáng)性染色主要定位于平滑肌細(xì)胞質(zhì)，偶可見細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核同時(shí)著色（圖1）。Survivin在正常子宮肌層組織的陽(yáng)性率為30%（9/30），Survivin在子宮肌瘤組織的陽(yáng)性率為66.7%，陽(yáng)性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.576，P=0.006）。見表1。

圖1 Survivin陽(yáng)性染色

2.2 PCNA在正常子宮肌層組織及子宮肌瘤組織中的表達(dá)

在正常子宮肌層組織以及子宮肌瘤組織中，PCNA表達(dá)多在細(xì)胞核顯示陽(yáng)性染色（圖2）。PCNA在正常子宮肌層組織的陽(yáng)性率為20%（6/30），PCNA在子宮肌瘤組織的陽(yáng)性率為83.3%（25/30），陽(yáng)性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.576，P=0.006），見表1。

圖2 PCNA陽(yáng)性染色

表1 Survivin和PCNA在正常子宮肌層和子宮肌瘤組織中的表達(dá)

2.3 在子宮肌瘤組織中Survivin與PCNA的相關(guān)性Spearman等級(jí)相關(guān)分析

在子宮肌瘤中Survivin與PCNA的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.779，P=0.000）。

3 討 論

3.1 Survivin在子宮肌瘤組織中的表達(dá)

對(duì)于Survivin而言，作為一種凋亡抑制蛋白，其在細(xì)胞的增殖控制以及凋亡上存在重要的作用。相關(guān)研究顯示，Survivin通過對(duì)凋亡基因Caspase-3進(jìn)行抑制，從而對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡進(jìn)行控制，其能夠與Caspase-3進(jìn)行結(jié)合，從而使其失去活性，并對(duì)其自發(fā)性激活進(jìn)行抑制。而在細(xì)胞分裂以及增殖過程中，CDK4是一種細(xì)胞周期的依賴性激酶，Survivin能夠與其進(jìn)行結(jié)合，從而促進(jìn)CD4/P21復(fù)合物釋放P21，并聯(lián)合線粒體Caspase對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行抑制[1]。

Survivin主要在胚胎組織中表達(dá)，組織分布有較為明顯的特征性，一般在人類、哺乳動(dòng)物中的胚胎與發(fā)育胎兒組織中有較多的表達(dá)；在成人造血干細(xì)胞、分泌期子宮內(nèi)膜、蛻膜組織、早期絨毛、生殖腺、胸腺、血管內(nèi)皮細(xì)胞也會(huì)有微量表達(dá)。在分化成熟的組織中國(guó)，Survivin表達(dá)則并不明顯，或者表達(dá)程度低，而在腫瘤組織內(nèi)部，其表達(dá)水平則較高?？梢?，其表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)展存在密切的聯(lián)系[2,3]。

本實(shí)驗(yàn)中Survivin基因陽(yáng)性率在子宮肌瘤組織中明顯高于子宮肌層組織，可見，在子宮肌瘤中，Survivin的表達(dá)狀態(tài)較高，對(duì)肌瘤細(xì)胞的凋亡進(jìn)行抑制，從而增加肌瘤細(xì)胞的數(shù)量，導(dǎo)致病情發(fā)展[4,5]。

3.2 PCNA在正常子宮肌層組織及子宮肌瘤組織中的表達(dá)

PCNA在子宮肌瘤中的表達(dá)：PCNA是一種分子量為56 kd的蛋白，位于細(xì)胞核內(nèi)，其含量在靜止期（G0）細(xì)胞中很少，G1晚期開始增加，S期達(dá)高峰，G2期明顯下降，是DNA聚合酶的輔助蛋白[6]，為DNA合成必須的原料，PCNA在核內(nèi)的表達(dá)預(yù)示著細(xì)胞進(jìn)入S期或G1晚期，因此，PCNA可作為細(xì)胞增殖的指標(biāo)。PCNA在子宮肌瘤中的高表達(dá)提示子宮肌瘤細(xì)胞增殖活性高于正常子宮肌細(xì)胞，PCNA在子宮肌瘤的生長(zhǎng)中起到一定作用。

經(jīng)過分析可得，在子宮肌瘤中，Survivin以及PCNA蛋白在表達(dá)上存在正相關(guān)的關(guān)系，經(jīng)猜測(cè)，可能是因?yàn)镻CNA以及Survinvin在細(xì)胞增殖過程中的協(xié)同作用有關(guān)，二者在子宮肌瘤的病情發(fā)展中均存在參與行為。

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1671-8194（2014）14-0083-02